一、肝星状细胞与肝纤维化的关系（论文文献综述）
万义鹏,张望,朱萱[1]（2021）在《细胞焦亡在肝纤维化发生、发展中的作用研究进展》文中进行了进一步梳理细胞焦亡是一种新型的促炎程序性细胞死亡,不同于其他程序性死亡,包括经典途径和非经典途径,依赖于Caspase-1、Caspase-4、Caspase-5、Caspase-11介导。目前研究最为深入的是NLRP3炎症小体介导的依赖于Caspase-1的经典细胞焦亡途径,在机体免疫功能方面起到重要作用。研究表明细胞发生焦亡后可释放大量的促炎症细胞因子,这个细胞因子将进一步促进炎症的发展。近年来研究表明细胞焦亡在肝脏疾病的发生、发展中起重要作用。该文主要对细胞焦亡的分子机制及肝细胞、肝星状细胞和肝脏巨噬细胞与肝纤维化的关系进行综述。
徐静,严永敏,蔡梦洁[2]（2022）在《miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化》文中研究表明背景:肝星状细胞活化分泌大量胶原是肝纤维化进展的主要因素,miRNA在肝星状细胞活化、凋亡等方面发挥着重要作用,miR-373调控肝星状细胞胶原分泌的作用及机制尚不清楚。目的:探讨miR-373靶向调控转化生长因子βⅡ型受体在肝星状细胞胶原分泌中的作用。方法:（1）建立Bal b/c小鼠肝纤维化模型,Masson法测定肝组织胶原,采集小鼠血清样本,提取血清总RNA,qRT-PCR定量分析小鼠mmu-miR-291a-3p（人hsa-miR-373-3p的同源序列）水平。免疫组化检测肝组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA表达;（2）TargetScan软件预测miR-373的靶基因转化生长因子βⅡ型受体,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-373调控转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性;（3）用25,50 nmol/L miR-373 mimics转染人肝星状细胞（LX-2）过表达miR-373,并以转染随机miRNA序列做对照,采用Western blot和免疫荧光检测转化生长因子βⅡ型受体和成纤维细胞激活蛋白的蛋白表达。实验方案经江苏大学实验动物伦理委员会批准（批准号为UJS-IACUCAP-2020033127）。结果与结论:（1）健康对照组相比,肝纤维化组小鼠血清mmu-miR-291a-3p水平明显降低（P <0.001）,肝组织胶原合成显着增加;（2）肝纤维化组织转化生长因子βⅡ型受体和αSMA共表达显着增加;（3）miR-373显着抑制了转化生长因子βⅡ型受体启动子的活性（P <0.01）,miR-373过表达显着抑制LX-2的转化生长因子βⅡ型受体（P <0.05）和成纤维细胞激活蛋白（P <0.01）的蛋白表达;（4）结果说明,miR-373通过调控转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化和肝组织胶原沉积。
梁仁久,梁尧,李建明,黄贵华[3]（2021）在《基于自噬探讨肝纤维化发病机制以及壮肝逐瘀煎的潜在干预作用》文中提出肝纤维化是各种慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程,其发病率和病死率较高,但治疗手段有限。近年来中医中药给肝纤维化的治疗提供了新思路。自噬是一种可降解受损细胞器或蛋白质的细胞过程,其参与了肝纤维化的发展过程。为此,本研究基于自噬对肝纤维化发病机制进行了总结,并针对肝纤维化有效方药壮肝逐瘀煎进行分析,以期为临床了解自噬与肝纤维化的关系,以及壮肝逐瘀煎通过调控自噬防治肝纤维化的潜力提供参考。
谢海深[4]（2021）在《七叶皂苷钠通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制eIF4F复合物进而缓解大鼠肝纤维化》文中进行了进一步梳理目的 肝炎-肝硬化-肝癌的连续发展过程为肝癌发展的一般规律,被称为肝癌发展的三部曲。我国作为最大的发展中国家是肝炎感染大国,也是肝癌患者高发国家,当前全世界对于肝癌的治疗方法包括手术切除肿瘤病灶、经B超引导的射频或微波消融术、放射治疗、化学药物治疗和肝脏活体器官移植等,但是治疗效果有限。肝硬化为肝癌发展的重要中间过程,早期干预阻断此过程可大大降低患者发展为肝癌的可能性。肝硬化的发展是一个漫长的连续过程,肝纤维化是肝硬化发展的早期可逆阶段。肝纤维化的主要特征为肝星状细胞激活转分化为肌成纤维细胞,分泌大量的包括胶原蛋白I、胶原蛋白III、α-SMA和纤维连接蛋白等在内的细胞外基质组分,不断沉积在肝小叶间的汇管区。七叶皂苷钠是从传统中药娑罗子中提取的主要成分,已知的功效包括抗炎、消肿、扩张血管和改善微循环等,前期实验证明七叶皂苷钠对原发性肝癌具有明显抑制作用,本研究主要探究七叶皂苷钠对肝纤维化发展的影响作用及机制。方法 本研究主要通过体外和体内实验验证七叶皂苷钠对于肝纤维化发展的影响作用。体内实验将雄性大鼠分为空白对照组、CCl4诱导的模型组和在CCl4诱导的基础上给予七叶皂苷钠处理的治疗组三组。对照组大鼠予以橄榄油腹腔注射处理,模型组和治疗组均通过腹腔注射四氯化碳液诱导实验大鼠肝脏进展为肝纤维化,此处理贯穿于整个8周实验过程。从实验的第3周开始,对治疗组给予适量七叶皂苷钠进行腹腔注射,对照组以及模型组给予腹腔注射等量的医用生理盐水。第8周末时开腹取大鼠肝脏组织,通过免疫组化、HE以及Masson染色检测对照组、模型组和治疗组三组大鼠肝脏纤维化发展程度以及组织中胶原蛋白的表达情况。在体外细胞试验中,通过MTT、克隆形成实验检测七叶皂苷钠处理的HSC-T6细胞的生长增殖活性,通过流式细胞学检测七叶皂苷钠处理的HSC-T6细胞凋亡程度,通过免疫蛋白印迹检测七叶皂苷钠对HSC-T6细胞内eIF4F复合物以及PI3K/AKT/mTOR通路中各蛋白表达影响情况。结果 CCl4诱导大鼠肝纤维化形成明显,HE、Masson及免疫组化染色结果显示,七叶皂苷钠处理使大鼠肝脏细胞外基质中的α-SMA,COL-I和COL-III含量较四氯化碳诱导肝纤维化的模型组明显下降。MTT检测结果显示,七叶皂苷钠使HSC-T6细胞增殖活性显着降低;克隆形成实验显示,七叶皂苷钠使HSC-T6细胞的细胞集落形成数明显减少;流式细胞学检测结果显示,七叶皂苷钠使HSC-T6细胞凋亡数量增加,以早期凋亡数量增加最为明显;免疫蛋白印迹表明,七叶皂苷钠可下调HSC-T6细胞中α-SMA、COL-Ⅰ和COL-Ⅲ等胶原蛋白的表达。七叶皂苷钠处理的大鼠肝组织免疫组化染色和HSC-T6细胞免疫蛋白印迹结果均显示e IF4G,e IF4E蛋白的表达量降低。七叶皂苷钠可下调HSC-T6细胞中PI3K/AKT/mTOR/4EBP1信号通路中各蛋白质的表达水平,降低4EBP1磷酸化水平。结论 七叶皂苷钠通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制eIF4F复合物的合成进而缓解大鼠肝纤维化的进展。
刘旭[5]（2020）在《肝硬化病人的肝星状细胞转录组学研究》文中研究表明研究背景及目的:肝纤维化是由慢性肝损害引起的一种动态、失衡的创伤愈合反应,其特征是细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的网状堆积,肝硬化是纤维化晚期的病理状态。全球肝硬化负担严重,抗纤维化研究已成为当前肝病领域的热点与难点。HSCs被认为是产生ECM的主要细胞群,其由静止的且贮存维生素A的状态到活化的且增殖的状态的转变代表了肝脏损伤的持续存在和纤维化的发生,在肝纤维化和肝硬化发生发展中扮演核心角色。增强对HSCs活化机制及纤维形成的理解有助于肝纤维化的早期诊断及潜在治疗靶点的揭示。高通量测序技术的出现为基于转录组学的关键分子的识别带来了前所未有的机遇。除编码RNAs外,nc RNAs亦参与调控HSCs的活化。鉴于肝纤维化的确切机制尚未建立且基于NGS技术的病人来源HSCs的转录组学研究尚无,本研究旨在展现人HSCs分离技术,并利用RNA-seq（RNA sequencing）,对人HSCs的m RNAs及mi RNAs表达情况进行分析,以寻找与肝纤维化诊断与治疗相关的分子靶点。如今,组学研究正着眼于单个细胞的特征描述,为研究者带来潜在且意想不到的生物学发现。本研究旨在利用单细胞测序技术研究HBV相关肝硬化中细胞亚群的改变及潜在调控机制,揭示疾病本质。材料与方法:本研究采用IV型胶原酶循环灌流法从手术切除的肝组织中分离人HSCs,并利用维生素A的自发荧光特性、免疫荧光染色对HSCs进行鉴定。收集9例肝硬化及6例非肝硬化患者的HSCs,构成肝硬化-非肝硬化HSCs比较方案（非肝硬化HSCs作为对照）,比较肝硬化与非肝硬化状态HSCs的m RNA组学差异。另外,将状态较好的新鲜分离的HSCs体外培养14天,获取7对初始及充分活化状态的HSCs,构成培养活化-新分离HSCs比较方案,以模拟肝纤维化过程,对比HSCs培养前后的基因表达差异。具体步骤如下:收集研究对象的人口学和临床特征,记录组织热缺血时间及细胞产率。对上述两个方案的HSCs进行RNAs提取、c DNAs文库建立及测序。对测序数据的基因表达水平进行计算并得到样本之间m RNAs的相关性及差异表达m RNAs（differentially expressed m RNAs,DEm RNAs）,通过层次聚类分析确定不同样本中DEm RNAs的表达模式。对两个方案的差异表达基因（differentially expressed genes,DEGs）进行GO、KEGG、Reactome及Dis Ge NET等多种富集分析及数据一致性检验。利用蛋白质交互作用（proteinprotein interaction,PPI）网络寻找肝纤维化相关的关键基因（hub genes）并进行实时定量PCR（quantitative real time PCR,q RT-PCR）验证。选取4对体外培养前后的HSCs,收集患者及肝组织的基本信息。对HSCs进行RNAs提取、c DNAs文库建立及测序。计算mi RNAs表达水平及样本的相关性。对mi RNAs进行差异表达分析与层次聚类分析,并将本研究数据与公开发表的肝组织mi RNA-seq数据进行对比。利用q RT-PCR对肝病相关mi RNAs进行验证。预测差异表达mi RNAs（differentially expressed micro RNAs,DEmi RNAs）的靶m RNAs构建共表达网络并利用GO及KEGG分析对靶DEGs进行富集分析。初步分析mi R-1268a、mi R-665对肝纤维化的影响。采用循环灌流法及单细胞测序样本制备流程获取单细胞悬液。纳入4例HBV相关肝硬化肝组织及3例正常肝组织,在10x Genomics平台中形成单细胞Gel Bead in Emulsions（GEMs）结构。随后构建测序文库、测序、评估单细胞测序质量并生成细胞基因表达矩阵。经历细胞过滤后,对多个样本的表达矩阵进行校正、降维及聚类。利用细胞标志对不同群（cluster）的细胞进行定义。结果:本研究成功对人肝组织中的HSCs进行分离,细胞产率为105-106个/g。在mRNA-seq中,肝硬化与非肝硬化患者的性别及年龄分布、肝功能指标均衡可比。分析过程中1例肝硬化样本因聚类不符而被去除。最终,在硬化组织的HSCs中筛选到3,828个DEGs,分别有2,251、1,577个基因的表达水平出现了显着性上调和下调。培养活化-新分离HSCs比较方案纳入7对配对样本,排除了疾病基础及其他指标的干扰。HSCs被激活后m RNAs表达情况发生明显的改变,共鉴定出2,262个DEGs,包含1,032个显着上调的基因及1,230个显着下调的基因。两种比较方案的层次聚类分析均显示相同处理条件下基因的表达模式相近,且经典的肝纤维化相关基因可在差异表达谱中被验证。综合两种方案的生物信息学分析结果,DEGs参与ECM组成、小分子代谢等多种进程,并在粘着斑、视黄醇的新陈代谢、胶原或ECM生成、组装或降解等通路显着富集。PPI分析显示肝硬化-非肝硬化HSCs比较方案及培养激活-新分离HSCs比较方案的DEGs分别存在9,960、8,042对互作关系,COL1A1、COL1A2、VIM、MMP2、ITGB4、ITGA2、CDK1、HGF、CAV1、GSTP1、GNAI2、APP、SHC1、LPL、BCR、ESR1、CXCR4等17个基因被识别为肝纤维化的关键基因,包括与肝纤维化关系明确的基因（如COL1A1、MMP2、HGF等）及作用尚待明确的基因。q RT-PCR结果提示,在肝硬化发生时或HSCs被体外激活时,上述基因在转录水平发生改变,反映了HSCs在肝纤维化进展中的反应。根据mi RNA-seq分析可知,随着HSCs的激活,共鉴定到230个DEmi RNAs,包含118个上调的mi RNAs及112个下调的mi RNAs。从表达差异最为显着的mi RNAs中发现,mi R-758-3p、mi R-493-5p、mi R-409-3p、mi R-31-5p、mi R-1268a和mi R-381-3p等肝病相关mi RNAs亦可能在肝纤维化中扮演角色。其中,mi R-1268a拥有最丰富的靶DEm RNAs,在调控HSC活化过程中至关重要。将本研究的HSCs测序数据与公开的肝组织测序数据进行比较,let-7g-5p、mi R-101-3p、mi R-107、mi R-122-5p、mi R-127-3p、mi R-139-5p、mi R-148a-3p、mi R-192-5p、mi R-194-5p、mi R-215-5p、mi R-24-3p、mi R-26a-5p、mi R-340-5p、mi R-451a及mi R-99a-5p被证实在两组之间重叠。对表达模式矛盾的mi R-101-3p、mi R-192-5p和mi R-24-3p进行检测,结果与我们的数据基本一致。同时,mi RNAs-m RNAs共表达网络（|pearson相关系数|≥0.7,p<0.05）被描述,其由1,891对匹配的mi RNA-m RNA组成,代表了138个DEmi RNAs和1,414个DEm RNAs（mi R-665展现最强的联系性）。靶DEGs的集合参与胶原代谢、ECM结构组成、细胞骨架蛋白结合、细胞粘附等过程。在肝星状细胞系LX-2细胞中,沉默mi R-1268a或导入mi R-665模拟物可上调COL1A1的表达。基于单细胞内基因表达情况的差异,来自7例人肝组织的64,990个细胞被聚集成14个clusters,任一cluster均包肝硬化及正常对照肝组织的细胞。参考数据库对细胞初步分类及定义,肝细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核巨噬细胞、胆管上皮细胞、内皮细胞、间充质细胞、固有淋巴细胞（innate lymphoid cells,ILCs）及树突细胞（dendritic cells,DCs）等有9种细胞类型被鉴定。聚类热图显示clusters之间的基因表达情况呈阶梯状,差异清晰,在乙肝相关肝硬化中行使相应功能。结论:本研究建立的循环灌流法可充分消化肝组织并成功分离出人HSCs,为肝纤维化的机制研究奠定了基础。利用RNA-seq,本研究从m RNAs及mi RNAs水平揭示了人HSCs在疾病进程中或体外活化时的变化特点,为肝纤维化的诊断与治疗靶点的筛选提供依据及参考。本研究提及的hub基因及mi RNAs与HSCs激活或纤维化发生密切相关,可能成为候选生物标志物。此外,基于肝内不同细胞群体,本研究建立了HBV相关肝硬化的单细胞图谱。未来的研究将着眼于利用单细胞测序结果及相关分析以剖析肝纤维化的细胞和分子基础的未知领域,并提供研究肝纤维化治疗靶点所需的概念框架。
林华江[6]（2020）在《LncRNA-Meg8通过Notch通路抑制肝星状细胞的激活和肝细胞上皮间充质转化》文中指出目的肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理表现,目前尚缺乏疗效肯定的药物。肝纤维化如不能得到有效控制,可进展为肝硬化乃至发生肝癌。早期肝纤维化可以逆转,因此深入研究肝纤维化的机制,对于其诊断和治疗具有重要的意义。长非编码RNA（lnc RNA）在多种生理和病理过程中发挥重要作用,但是其在肝纤维化中的生物学作用大部分是未知的。因具有人鼠同源性的lnc RNA-Meg8可以通过抑制纤维化相关基因的表达从而减轻肾脏纤维化,我们设想其在肝脏中是否有类似的作用。本研究旨在观察Meg8在纤维化的肝组织中是否异常表达,并进一步通过体内外实验探究其表达、功能和机制,阐明Meg8与肝纤维化的关系,从而为肝纤维化的治疗提供新的靶标。方法构建CCl4以及胆管结扎（Bile duct ligation,BDL）诱导的肝纤维化小鼠模型,q RT-PCR检测lnc RNA-Meg8在纤维化肝组织中的表达。提取正常的以及CCl4诱导的肝纤维化模型小鼠的原代肝星状细胞（HSCs）和原代肝细胞（HCs）,通过q RT-PCR检测lnc RNA-Meg8在肝纤维化模型小鼠的HSCs和HCs中的表达。分离并培养激活原代HSCs,q RT-PCR检测lnc RNA-Meg8在培养激活的原代HSCs中的表达。在小鼠肝细胞系AML12细胞以及人肝星状细胞系LX-2细胞中进行细胞核浆分离实验确定lnc-Meg8在细胞中的定位。研究Meg8在小鼠HSCs中的作用,敲低Meg8并提取细胞的蛋白和RNA,通过q RT-PCR、Western blot和confocal检测纤维化和增殖相关基因的表达。探究Meg8是否参与HSCs的激活,原代HSCs在体外培养12天后敲低Meg8并在RNA和蛋白水平检测相同标志物的表达。在LX-2细胞中敲低Meg8验证实验结果。验证lnc RNA-Meg8是否参与HCs的上皮向间充质转化过程（EMT）,敲低小鼠原代HCs的Meg8,提取细胞的RNA和蛋白并通过q RT-PCR和Western blot检测上皮、间充质标志基因的表达。AML12细胞中敲低Meg8并利用q RT-PCR、Western blot及confocal验证实验结果。研究Meg8抑制HSCs活化和HCs-EMT的分子机制,首先研究Meg8是否调节Notch通路的活化,提取小鼠原代HCs、原代HSCs以及复苏培养LX-2细胞和AML12细胞,敲低Meg8并提取细胞的RNA和蛋白,通过q RT-PCR和Western blot检测Notch通路相关分子的表达。进一步研究Meg8是否通过Notch通路抑制HSCs活化和HCs-EMT,应用抑制剂RO4929097阻断已沉默Meg8的LX-2和AML12细胞中的Notch通路,通过q RT-PCR和Western blot获取实验结果。结果在CCl4和BDL诱导的小鼠肝组织中Meg8表达上调。在CCl4诱导的小鼠原代HSCs、HCs以及培养激活的原代HSCs中Meg8表达上调。核浆分离实验揭示Meg8主要定位于细胞核。沉默Meg8促进HSCs的激活和HCs上皮向间充质转化。沉默Meg8促进肝脏细胞中Notch通路相关分子的表达。当Notch通路被阻断,HSCs的激活以及HCs上皮向间充质转化都受到了抑制。结论具有人鼠同源性的lnc RNA-Meg8在纤维化肝组织中表达上调,其在激活的HSCs和受损的HCs中表达上调,Meg8主要定位于细胞核内。lnc RNA-Meg8可以抑制HSCs的激活和HCs上皮向间充质转化。机制研究发现lnc RNA-Meg8通过抑制Notch通路抑制HSCs的激活以及HCs上皮向间充质转化。
徐莹[7]（2019）在《虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究》文中提出1.背景及目的:在我国,无论相对发病率还是绝对病例数,肝纤维化患者均居世界首位,其主要病因为:病毒性肝炎、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性肝病或药物性肝病等,肝纤维化不仅是肝脏损伤的病理修复反应,还会进一步发展为肝硬化、肝癌、肝衰竭[1],是严重危害人民健康和消耗社会资源的难治性疾病。因此,抗肝纤维化是慢性肝病的重要治疗环节。西医学已有较多的临床试验报道,对于慢性病毒性（乙型、丙型）肝炎抗病毒治疗可有效逆转肝纤维化[2],但迄今临床上仍缺乏直接针对纤维结缔组织增生的有效治疗肝纤维化的生物或化学药物,而中药及其复方具有多组分、多途径与多环节的综合作用特点,近年来发现在抗肝纤维化治疗方面有明显优势,已经取得了较好的临床疗效,如扶正化瘀胶囊（片）、复方鳖甲软肝片等[3-5]。虫草菌丝作为中医药抗肝纤维化药物扶正化瘀胶囊/片中最重要的扶正药物,课题组前期大量研究证实以虫草菌丝为主药的扶正药物在促进肝纤维化逆转中发挥主要作用,为了解析其发挥抗肝纤维化作用的主要活性成分,课题组前期开展系列活性导向研究,并在近两年取得了可喜的进展,成功从虫草菌丝主要活性部位中分离并证实了一种脂溶性成分C02是虫草菌丝抗肝纤维化主要活性成分,课题组目前已经申请国家发明专利,但由于C02成分抗肝纤维化的作用机制仍不明确,制约了其进一步的新药开发与应用。因此本研究拟开展C02体内外抗肝纤维化研究,试图解析其抗肝纤维化机制,为其新药开发与应用提供参考。2.方法:（1）C02体内抗肝纤维化作用与机制研究:建立CCl4小鼠肝纤维化模型及DMN大鼠肝纤维化模型,给予C02干预治疗后,收集血清及肝组织。通过肝组织HE及天狼猩红胶原染色、羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量、血清肝功能指标、纤维化相关指标因子的免疫组化及蛋白、基因水平变化等检测,探讨虫草菌丝活性成分C02潜在抗纤维化的作用机制。（2）C02对肝星状细胞（HSCs）与巨噬细胞活化、增殖的影响:体外采用不同浓度的C02对激活的JS-1（小鼠肝星状细胞）进行干预,观察HSCs活化、增殖相关基因及蛋白的变化;采用不同浓度的C02对LPS激活的巨噬细胞（RAW264.7小鼠巨噬细胞）进行干预,检测巨噬细胞活化、增殖相关指标基因及蛋白的变化。（3）C02通过调控巨噬细胞表型抑制HSCs活化的研究:体外采用LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞活化模型,给予C02及STAT1抑制剂干预24 h,去药后与正常JS-1细胞共培养24 h,分别收取RAW264.7巨噬细胞及JS-1细胞,检测巨噬细胞及肝星状细胞活化、增殖相关指标基因及蛋白的变化。观察活化的巨噬细胞对肝星状细胞活化的影响以及C02的干预作用;3.结果:（1）C02对CCl4诱导肝纤维化小鼠的干预作用:C02对CCl4诱导的纤维化小鼠肝功能有明显的改善作用,C02中、高剂量组可有效降低血清谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）含量,且高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）;小鼠肝组织天狼猩红染色、胶原半定量及肝组织HE染色结果显示,C02高剂量组可有效减少胶原沉积及肝脏炎性细胞浸润,肝组织羟脯氨酸结果与胶原半定量结果基本一致（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02用药组α-SMA、COL-I表达较模型组显着减少,且C02高剂量组药效优于低剂量组,荧光定量RT-PCR和Western-blot结果表达与免疫组化结果基本一致（P<0.01或P<0.05）。Western-blot蛋白免疫印迹结果显示,C02高剂量组p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平较模型组显着下降（P<0.05）;较模型组相比,C02高剂量组M1型巨噬细胞表型相关蛋白STAT1及IRF5表达下调（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02高剂量组小鼠M1型巨噬细胞标记物CD11b阳性表达较模型组明显减少,M2型巨噬细胞标记物CD206阳性表达较模型组有所增加。（2）C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的干预作用:C02对DMN诱导的纤维化大鼠肝功能有改善作用,C02中、高剂量组可有效降低AST、ALT含量,且高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）;大鼠天狼猩红染色、胶原半定量及肝组织HE染色结果显示,C02高剂量组可有效减少胶原沉积及肝脏炎性细胞浸润,肝组织羟脯氨酸结果与胶原半定量结果基本一致（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02用药组α-SMA、COL-I表达较模型组显着减少,且C02高剂量组药效优于低剂量组（P<0.05）,荧光定量PCR及Western-blot结果与免疫组化的结果表达基本一致。Western-blot结果显示,C02高剂量组p-ERK/ERK、PDGF、TNF-α蛋白水平较模型组显着下降（P<0.05）;较模型组相比,C02高剂量组M1型巨噬细胞表型相关蛋白STAT1及IRF5表达下调（P<0.05）;免疫组化结果显示,C02高剂量组大鼠M1型巨噬细胞标记物CD68阳性表达较模型组明显减少,M2型巨噬细胞标记物CD163阳性表达较模型组有所增加。（3）C02对肝星状细胞（HSCs）及巨噬细胞活化、增殖的影响:C02能够呈剂量依赖性的抑制小鼠肝星状细胞（JS-1）及原代肝星状细胞的增殖（P<0.05）;JS-1细胞经5 ng/m L TGF-β1处理激活造模,采取不同浓度C02干预,较模型组相比,40μM C02可显着降低JS-1细胞α-SMA和COL-I基因及蛋白的水平（P<0.05）;F-actin细胞染色结果显示,C02在20μM、40μM浓度时可成不同程度降低JS-1细胞F-actin的表达;原代小鼠肝星状细胞的油红染色实验结果显示,C02可显着增加原代肝星状细胞胞质内脂滴含量。RAW264.7巨噬细胞经100 ng/m L LPS处理激活造模,采取不同浓度C02干预,荧光定量PCR结果显示,较模型做相比,C02在10μM浓度时TGF-β1、IL-1、PDGF等相关炎性因子较模型组m RNA表达下降（P<0.01或P<0.05）;Elisa结果显示,5μM和10μM C02可在2 h-36 h内持续降低巨噬细胞分泌PDGF-BB的含量（P<0.05）,2.5μM、5μM和10μM C02可在8 h-36 h内持续降低巨噬细胞i NOS分泌量（P<0.05）;C02对巨噬细胞的起效浓度较对HSCs的起效浓度低2-16倍。（4）C02通过调控巨噬细胞表型抑制HSCs活化的研究:RAW264.7巨噬细胞与JS-1细胞共培养:LPS激活的RAW264.7巨噬细胞给予C02及STAT1抑制剂干预24h,去药后与JS-1细胞共培养24 h,模型组JS-1细胞α-SMA m RNA表达水平明显升高（P<0.05）,C02干预后,高剂量组α-SMA m RNA表达下调（P<0.05）,细胞爬片免疫荧光α-SMA检测也得到同样的结果;Western-blot蛋白免疫印迹结果显示,C02高剂量组可抑制JS-1细胞p-ERK/ERK的蛋白表达（P<0.01或P<0.05）。STAT1抑制剂组可抑制JS-1细胞α-SMA、COL-I m RNA的表达水平,STAT1抑制剂联合C02高剂量组药效优于STAT1或C02高剂量组单用组（P<0.05）;STAT1抑制剂及C02可抑制M1型巨噬细胞标志物CD11b及PDGF m RNA表达水平,且STAT1抑制剂联合C02高剂量组药效优于STAT1或C02高剂量组单用组（P<0.05）。4.结论:（1）体内药效学研究表明C02可有效改善CCl4小鼠肝纤维化模型及DMN大鼠肝纤维化模型的肝功能及纤维化程度,C02可以抑制M1型巨噬细胞及HSCs活化,同时发现C02在体内的作用机制与PDGF/ERK信号通路有关。（2）体外实验研究表明C02可能通过抑制STAT1进而抑制M1型巨噬细胞活化,从而减少PDGF-BB、TNF-α等因子释放,进而抑制HSCs的活化,其抑制HSCs活化的作用机制与PDGF/ERK信号通路有关。
郑洋[8]（2019）在《莪术醇对肝纤维化小鼠肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的影响》文中研究指明目的:观察莪术醇对肝纤维化小鼠肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的作用,探究其作用的分子机制。为莪术醇抗肝纤维化提供科学依据,为进一步开发与研究广西道地药材莪术抗肝纤维化提供了理论铺垫。方法:用生物信息学对肝纤维化和莪术进行深入分析。将KM小鼠分为三组,空白组、模型组、莪术醇组,用四氯化碳构建肝纤维化模型,用莪术醇对其进行灌胃处理。用HE和Masson染色观察肝脏结构的改变,使用自动分析仪检测肝纤四项和肝功能。对小鼠肝星状细胞进行培养,然后对其进行分组。先用MTT比色法测定各组细胞的增殖率,以此来确定莪术醇的高中低浓度,按照8个浓度梯度来进行。然后将细胞分为6组:空白对照组、模型组、阳性对照组、莪术醇低浓度组、莪术醇中浓度组,莪术醇高浓度组。实时荧光定量PCR检测RhoA和ROCK2mRNA的含量,免疫印迹检测RhoA和ROCK2的表达。结果:1.生物信息分析的结果:发现肝纤维化重要的靶点基因与Rho-ROCK信号通路关系密切;莪术发挥药理作用的通路上富集的基因与Rho-ROCK信号通路关系密切。2.肝纤维化模型的构建:空白组肝细胞,环绕汇管区成放射状排列,未见明显病理学改变,基本无胶原纤维生成;模型组肝细胞排列不规则,有空泡样改变,有胶原纤维沉积,纤维间隔变宽,可以看到明显的由纤维组织包绕肝小叶形成的假小叶;莪术醇组胶原沉积较少,肝组织病变较模型组改善。3.肝纤四项和肝功能指标:模型组和莪术醇组肝纤四项指标和肝功能指标均高于对照组,模型组两项指标又均高于莪术醇组,这种差异有统计学意义（P<0.05）。4.四氮噻唑蓝检测结果:设置莪术醇8个浓度梯度,除空白组外,均对细胞增殖有抑制作用。选择莪术醇1.5626ug/ml、3.1252ug/ml、6.2504ug/ml三个剂量作为莪术醇的低中高浓度组,因为这三组细胞增殖率较高。在这8组中,随着莪术醇浓度的增加,细胞的增殖率下降,增殖率与浓度有剂量关系,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.实时荧光定量PCR检测结果:模型组RhoA和ROCK2mRNA的表达量均显着高于空白对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;阳性对照组RhoA和ROCK2mRNA的表达量均显着高于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）;莪术醇各组RhoA和ROCK2mRNA的表达量均显着低于模型组,而且这种差异存在明显的剂量依懒性,差异有统计学意义（P<0.05）。6.免疫印迹检测结果:模型组RhoA和ROCK2的表达明显高于空白对照组,并且差异具有统计学意义（P<0.05）;阳性对照组RhoA和ROCK2的表达明显高于模型组,并且差异具有统计学意义（P<0.05）;莪术醇各组RhoA和ROCK2的表达明显低于模型组,并且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:Rho-ROCK信号通路与肝纤维化和莪术关系密切,莪术醇对肝纤维化KM小鼠模型有一定的抗肝纤维的作用,莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路有抑制作用,在一定的剂量范围内,这种抑制作用与剂量有剂量依赖性。
朱慧[9]（2019）在《丹红青成分复方的建立及抗肝纤维化的药效机制》文中研究指明目的:在中医理论指导下,将抗肝纤维化作用环节明确的几种中药成分组成中药成分复方,使之既具有传统中药复方多成分多靶点发挥药效的特点,又弥补了中药复方难以在体外开展机制研究的不足,对研创可以阐明机制又有质控保证的中药复方作有益探索。方法:1、筛选四成分最佳配伍剂量:以丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯、白藜芦醇为研究对象,采用CCl4腹腔注射诱导小鼠肝纤维化模型（造模共6w,自第二周起灌胃给药）,采用均匀设计法“四因素八水平”分组设计,以肝组织Hyp含量为筛选指标,并用DAS3.0软件NOMEN（Non-Linear Mixed-Effect Modeling）分析获得最佳有效剂量;2、筛选三成分最佳配伍剂量:以丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯为研究对象,CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型（腹腔注射造模6w,第二周起给药）,采用均匀设计法“三因素八水平”分组设计,以肝组织Hyp含量为主筛选指标,AST、ALT、胶原面积为辅助筛选指标,用DAS3.0软件NOMEN分析获得最佳有效配伍剂量;3、以CCl4诱导的肝纤维化小鼠验证成分复方的药效:以三成分筛选结果为基础,以扶正化瘀浸膏为对照,在最佳配伍组分基础上加减不同组分及剂量设计分组,观察CCl4小鼠肝组织Hyp含量和血清肝功能的变化,以及肝组织病理及胶原纤维程度的变化,对所得最佳配方进行验证,最终确定最优配伍为丹红青方;4、以BDL诱导的肝纤维化大鼠验证丹红青方:以丹红青方为观察对象,以扶正化瘀浸膏为阳性对照,观察BDL大鼠肝组织Hyp含量和血清肝功能以及肝组织病理及胶原纤维程度的变化,进一步验证丹红青方抗肝纤维化作用;5、丹红青方抑制HSCs活化、迁移和收缩实验:（1）丹红青方（丹参酚酸B 10μM、红景天苷10μM、青蒿琥酯50μM）温育HSC 24h,在12h时,加入TGF-β1（10ng/ml）,观察丹红青方抑制HSCs活化、增殖的作用。蛋白检测采用Western blot,m RNA检测采用RT-PCR;（2）以划痕法观察,丹红青方及PDGF-BB（10ng/ml）温育LX-2后,在第8h观察迁移面积变化,用Image J软件分析计算迁移面积,观察丹红青方抑制LX-2迁移的作用;（3）用凝胶收缩法观察,JS 1接种凝胶上,以丹红青方温育30min后加入ET-1（10n M）在第12h观察凝胶直径及面积变化,并用Image J软件分析计算凝胶面积,评估丹红青方抑制JS 1收缩的作用。6、全转录组测序实验:采用KAPA RNA Hyper Prep Kit with Ribo Erase（HMR）for Illumina?建库试剂盒构建文库,检测丹红青方抗CCl4模型小鼠基因的变化,用Bowite2.1.0将结果映射到最新的UCSC转录集,用RSEM软件估计基因表达水平,用GO功能富集和KEGG富集法分析主要差异基因。结果:1、⑴丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯和白藜芦醇四成分不同剂量的配伍可不同程度降低肝纤维化模型小鼠肝组织Hyp含量和胶原沉积面积以及ALT、AST的活性以发挥抗肝纤维化的作用（均P<0.05）。⑵数字模型分析结果显示最优组方由红景天苷+青蒿琥酯+白藜芦醇,配伍剂量为红景天苷474 mg·kg-1体重、青蒿琥酯62 mg·kg-1体重、白藜芦醇319 mg·kg-1体重,但药物之间没有交互作用。2、以肝纤维化程度变化的数字模型分析结果筛选出的最优组方是红景天苷+青蒿琥酯,考虑到丹参酚酸B抗肝纤维化的实际药效,确定丹参酚酸B、红景天苷和青蒿琥酯组成三成分复方。3、在CCl4诱导的肝纤维化小鼠开展的验证实验显示,筛选实验的B组3种成分的配比复方抗肝纤维化的药效相对突出,与扶正化瘀方相似,将其命名为丹红青方。4、进一步在BDL大鼠肝纤维化模型验证丹红青方的药效,其抗肝纤维化的药效显着（P<0.05）,不差于扶正化瘀方和任何一种成分。5、丹红青方能抑制TGFβ1诱导的HSC活化和增殖（P<0.05）、抑制PDGF诱导的HSC迁移和活化（P<0.05）、抑制ET-1诱导的JS 1收缩（P<0.05）。6、丹红青方使肝纤维化小鼠肝组织内部分基因发生显着差异变化,这些基因主要富集在4条与组织代谢相关的信号通路。结论1.通过均匀设计的动物实验,以药效学指标评价,获得丹参酚酸B、红景天苷和青蒿琥酯三种成分的特定比例剂量的配方,命名为丹红青方。2.通过CCl4和BDL两种肝纤维化动物模型验证了丹红青方抗肝纤维化的药效。综合评判其药效较其组成成分相对突出,且与扶正化瘀方相似。3.丹红青方保持各单体的生物功能,其具有明显地抑制TGF-Β1诱导的HSC活化的作用、PDGF诱导的HSC迁移的作用以及ET-1诱导的HSC收缩的作用。4.丹红青方可以使肝组织内基因发生表达差异显着变化,其集中的信号通路与课题组前期发现丹参酚酸B、红景天苷、青蒿琥酯各自调控的通路相似。
覃立锋[10]（2019）在《CXCL12/CXCR4生物轴在肝纤维化中通过上调RhoA活性促进肝星状细胞活化、增殖和迁移》文中研究指明肝纤维化是肝脏对各种原因所致慢性损伤的修复反应,表现为以胶原蛋白为主的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）在肝脏内过度增生和沉积,是所有慢性肝损伤向肝硬化发展的必经阶段。肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSCs）是肝纤维化中ECM的主要来源。活化的HSCs发生表型转变,获得肌成纤维细胞样特征,向肝损伤部位移行,增殖,合成分泌大量ECM,导致肝纤维化发生发展。HSCs是各种致纤维化因素的最终靶细胞,研究HSCs的生物学功能及其调控机制对于预防控制肝纤维化至关重要。由趋化因子CXCL12及其受体CXCR4组成的生物轴参与机体的炎症、免疫、损伤修复等多种病理生理过程。研究表明,CXCL12/CXCR4生物轴与多种组织器官纤维化密切相关,如肾,肺,前列腺等;然而,该生物轴在肝纤维化发病机制中的作用仍未阐明。RhoA,是ras同源基因家族的成员A,主要参与RhoA/ROCK通路,是近年来研究的明星分子,其与HSCs的活化、收缩、迁移和粘附密切相关;但是,RhoA在肝纤维化中的调节网络尚未明确。因此,为了探索CXCL12/CXCR4生物轴在肝纤维化发病机制中的作用以及与RhoA的调控关系,我们以大鼠肝纤维化模型和HSC-T6细胞株为研究对象,给予CXCR4抑制剂、RhoA抑制剂干预,并构建CXCR4过表达稳转细胞株,观察肝组织和细胞中相关分子的表达改变以及细胞的功能学变化。本研究工作从以下三个方面进行:第一部分 CXCL12/CXCR4轴和RhoA诱导肝星状细胞活化促进大鼠肝纤维化目的:观察CXCR4抑制剂和RhoA抑制剂干预肝纤维化大鼠模型后,各组大鼠肝纤维化程度、肝组织中CXCR4、α-SMA、COL1的表达情况以及RhoA活性变化。方法:将40只雄性SD大鼠随机分为4组:正常组,模型组,CXCR4抑制剂组,RhoA抑制剂组（每组10只）。除正常组外,所有其他大鼠均采用皮下注射四氯化碳构建肝纤维化模型,每3天1次,持续8周。建模的同时,实施干预。CXCR4抑制剂组和RhoA抑制剂组分别给予CXCR4抑制剂（AMD3100）和RhoA抑制剂（Rhosin）每天腹腔注射。干预措施持续8周以后,处死所有大鼠,收集肝组织。使用HE和Masson染色评价各组肝脏的病理组织学变化;RT-qPCR和Western blot检测各组肝组织中CXCR4和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测各组肝组织中COL1和α-SMA的蛋白表达水平;Western blot检测各组肝组织中RhoA的相对活性。结果:正常组肝脏病理组织学结构正常,而模型组显示广泛的肝桥接纤维化和大量胶原沉积;但与模型组相比,CXCR4抑制剂组和RhoA抑制剂组的桥接纤维化和胶原沉积显着减少（P<0.01）。与正常组比较,模型组中CXCR4的mRNA和蛋白表达水平显着升高（P<0.01）;与模型组相比,CXCR4抑制剂组中CXCR4的mRNA和蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,但RhoA抑制剂组中的CXCR4表达水平没有明显变化（P>0.05）。与正常组比较,模型组中α-SMA和COL1的表达水平、RhoA的相对活性均显着升高（P<0.05）;然而,与模型组相比,CXCR4抑制剂和RhoA抑制剂组中α-SMA和COL1的表达水平、RhoA的相对活性均显着降低（P<0.05）。结论:CXCL12/CXCR4轴和RhoA参与了肝纤维化的发病机制,抑制CXCR4的表达和RhoA活性可减轻肝纤维化;CXCL12/CXCR4轴和RhoA可影响HSCs的活化,抑制CXCR4的表达和RhoA活性可降低HSCs的活化;CXCL12/CXCR4 轴可能影响 RhoA 的活性,但 RhoA 对 CXCL12/CXCR4轴没有明显影响。第二部分 CXCL12/CXCR4轴和RhoA促进肝星状细胞活化、增殖和迁移目的:观察CXCR4抑制剂和RhoA抑制剂干预HSC-T6细胞以及转染CXCR4过表达慢病毒以后,各组细胞中CXCR4、α-SMA、COL1的表达情况、RhoA活性变化以及各组细胞的功能学变化。方法:将HSC-T6细胞用PDGF-BB激活,并随机分为6组:空白组（Blank）,溶剂对照组（PBS）,CXCR4 抑制剂组（CXCR4 inhibitor）,空载体组（Empty vector）,CXCR4 过表达组（CXCR4 overexpression,CXCR4-OE）和 RhoA 抑制剂组（RhoA inhibitor）。CXCR4 抑制剂组和 RhoA抑制剂组分别给予AMD3100和Rhosin处理细胞;溶剂对照组给予等体积的PBS溶液处理细胞;空白组不给予任何处理。空载体组和CXCR4过表达组分别转染空载体和CXCR4过表达慢病毒。通过RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中CXCR4和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平;G-LISA Activation Assay检测各组细胞的RhoA活性;ELISA检测各组细胞中COL1的表达;CCK-8法检测各组细胞的增殖率;Transwell实验检测各组细胞的迁移能力;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率和细胞周期分布。结果:与空白组相比,空载体组和溶剂对照组中CXCR4和α-SMA表达量无明显变化（P>0.05）;与溶剂对照组相比,CXCR4抑制剂组中CXCR4和α-SMA的mRNA和蛋白表达量均显着下降（P<0.05）;RhoA抑制剂组中α-SMA的mRNA和蛋白表达显着降低（P<0.05）;与空载体组相比,CXCR4过表达组中CXCR4和α-SMA的mRNA和蛋白表达量均显着增加（P<0.01）。与空白组比较,溶剂对照组和空载体组中RhoA活性和COL1表达量没有明显变化（P>0.05）;与溶剂对照组相比,CXCR4抑制剂组和RhoA抑制剂组中RhoA活性和COL1表达量显着降低（P<0.05）;与空载体组相比,CXCR4过表达组中RhoA活性和COL1表达量显着增加（P<0.01）。与空白组相比,空载体组和空载体组中细胞增殖率和迁移能力无明显变化（P>0.05）;与溶剂对照组相比,CXCR4抑制剂组和RhoA抑制剂组中细胞增殖率和迁移能力明显降低（P<0.05）;与空载体组相比,CXCR4过表达组的细胞增殖率和迁移能力显着增加（P<0.05）。与空白组相比,空载体组和溶剂对照组中细胞的凋亡率和各周期（G1、S和G2/M）的细胞比例无明显变化（P>0.05）;与溶剂对照组相比,CXCR4抑制剂组和RhoA抑制剂组中细胞凋亡率和处于各周期的细胞比例无明显变化（P>0.05）;与空载体组相比,CXCR4过表达组中细胞凋亡率和处于各周期的细胞比例也无明显变化（P>0.05）。结论:CXCL12/CXCR4轴和RhoA可促进HSCs的活化、增殖和迁移,从而发挥促纤维化作用;CXCL12/CXCR4轴可能通过调控RhoA活性,从而影响HSCs的功能;在肝纤维化中,CXCL12/CXCR4轴和RhoA可能对HSCs的凋亡和细胞周期没有影响。第三部分 CXCL12/CXCR4轴通过上调RhoA活性促进肝星状细胞活化、增殖和迁移目的:为了明确CXCL12/CXCR4轴与RhoA的调控关系,使用RhoA抑制剂干预CXCR4过表达的HSC-T6细胞以后,观察各组细胞中CXCR4、α-SMA、COL1的表达情况、RhoA活性变化以及各组细胞的功能学变化。方法:设计Rescue实验,将CXCR4过表达细胞随机分为3组:CXCR4-OE 组（CXCR4 过表达组）、CXCR4-OE+PBS 组、CXCR4-OE+RhoA抑制剂组。CXCR4-OE+RhoA抑制剂组和CXCR4-OE+PBS组分别给予RhoA抑制剂（Rhosin）和PBS溶液处理细胞;CXCR4-OE组不给予任何处理。通过RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中CXCR4和α-SMA的mRNA和蛋白表达水平;G-LISA Activation Assay检测各组细胞的RhoA活性;ELISA检测各组细胞中COL1的表达;CCK-8法检测各组细胞的增殖率;Transwell实验检测各组细胞的迁移能力。结果:与 CXCR4-OE 组相比,CXCR4-OE+PBS 组中 RhoA活性、α-SMA的mRNA及蛋白表达量、COL1的蛋白表达量没有明显变化（P>0.05）;然而,与CXCR4-OE+PBS组相比,CXCR4-OE+RhoA抑制剂组中RhoA活性、α-SMA的mRNA及蛋白表达量、COL1的蛋白表达量均明显降低（P<0.05）。与CXCR4-OE组相比,CXCR4-OE+PBS组中细胞增殖率和迁移能力没有明显变化（P>0.05）。然而,与CXCR4-OE+PBS组相比,CXCR4-OE+RhoA抑制剂组中细胞的增殖率和迁移能力均明显下降（P<0.05）。结论:在肝纤维化中,RhoA是CXCL12/CXCR4轴的下游分子;CXCL12/CXCR4轴可通过上调RhoA活性来促进HSCs的活化、增殖和迁移,导致肝纤维化发生发展。
二、肝星状细胞与肝纤维化的关系（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝星状细胞与肝纤维化的关系（论文提纲范文）
（1）细胞焦亡在肝纤维化发生、发展中的作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 细胞焦亡的途径 |
| 2 细胞焦亡对肝纤维化的影响 |
| 3 各种肝脏内细胞焦亡与肝纤维化的关系 |
| 3.1 肝细胞焦亡与肝纤维化 |
| 3.2 肝星状细胞焦亡与肝纤维化 |
| 3.3 肝脏巨噬细胞焦亡与肝纤维化 |
| 4 总结 |
（2）miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 主要试剂、仪器和动物 |
| 1.3.2 实验动物 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 动物实验 |
| 1.4.2 细胞学实验 |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 miR-373在肝纤维化血清中表达增加 |
| 2.3 肝纤维化组织中肝星状细胞TGFβR2表达增加 |
| 2.4 miR-373调控肝星状细胞TGFβR2表达 |
| 3 讨论Discussion |
（3）基于自噬探讨肝纤维化发病机制以及壮肝逐瘀煎的潜在干预作用（论文提纲范文）
| 1 肝纤维化的研究概况 |
| 2 自噬与肝纤维化发生、发展的关系 |
| 2.1 自噬与肝纤维化病理生理的关系 |
| 2.2 自噬与肝星状细胞激活的关系 |
| 2.3 从自噬角度抗肝纤维化 |
| 3 中医角度下肝纤维化与自噬的关系及壮肝逐瘀法的潜在干预作用 |
| 4 结 语 |
（4）七叶皂苷钠通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制eIF4F复合物进而缓解大鼠肝纤维化（论文提纲范文）
| 缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 肝纤维化的影响因素及肝星状细胞的激活 |
| 参考文献 |
（5）肝硬化病人的肝星状细胞转录组学研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩写词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 肝纤维化或硬化的病因学及流行病学 |
| 1.2 肝纤维化或硬化的诊断与监测 |
| 1.3 肝星状细胞与肝纤维化相关机制的讨论 |
| 1.3.1 肝星状细胞的基本特征 |
| 1.3.2 肝星状细胞活化的调控 |
| 1.3.3 肝星状细胞活化的不同阶段 |
| 1.4 肝纤维化的治疗与逆转 |
| 1.5 转录组学研究进展 |
| 1.5.1 测序技术的发展与现状 |
| 1.5.2 全转录组测序的意义 |
| 1.5.3 RNAs的互作 |
| 1.5.4 基因功能富集分析 |
| 1.6 本研究的技术路线 |
| 第2章 人肝星状细胞的分离与鉴定 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 肝组织 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 细胞形态及脂滴的变化 |
| 2.2.2 肝组织分离所得的人肝星状细胞的验证 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 基于mRNA测序的肝硬化病人肝星状细胞的转录组学研究 |
| 3.1 实验材料和方法 |
| 3.1.1 细胞 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 研究对象的基线特征 |
| 3.2.2 测序样本的RNAs纯度及完整性检测 |
| 3.2.3 RNA-seq数据的质量控制 |
| 3.2.4 基于两种比较方案的mRNAs相关分析 |
| 3.2.5 差异表达基因的功能富集分析及数据一致性检验 |
| 3.2.6 肝纤维化相关hub基因的筛选 |
| 3.2.7 Hub基因的qRT-PCR验证 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 人原代肝星状细胞体外培养前后的micro RNA组学比较 |
| 4.1 实验材料和方法 |
| 4.1.1 细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 研究对象的人口学和临床特征 |
| 4.2.2 测序样本的RNAs纯度及完整度检测 |
| 4.2.3 MicroRNA测序数据的质量控制 |
| 4.2.4 MicroRNAs表达量相关性 |
| 4.2.5 MicroRNAs差异表达分析 |
| 4.2.6 差异表达microRNAs的qRT-PCR验证 |
| 4.2.7 差异 表达microRNAs的 靶基 因预 测及micro RNAs-mRNAs共表达分析 |
| 4.2.8 靶mRNAs的富集分析 |
| 4.2.9 MiR-1268a及miR-665 对肝纤维化的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 HBV相关肝硬化肝组织的单细胞测序结果初步分析 |
| 5.1 实验材料和方法 |
| 5.1.1 细胞 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 实验方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 用于肝组织单细胞测序的研究对象人口学和临床特征 |
| 5.2.2 单细胞测序的质量控制 |
| 5.2.3 肝组织单细胞测序后的细胞聚类及细胞定义 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 本实验创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（6）LncRNA-Meg8通过Notch通路抑制肝星状细胞的激活和肝细胞上皮间充质转化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的 |
| 研究方法 |
| 一、检测lncRNA-Meg8 的表达 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 实验材料 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 验证肝纤维化小鼠模型是否构建成功 |
| 1.2.2 lncRNA-Meg8 在纤维化的肝组织中表达上调 |
| 1.2.3 lncRNA-Meg8 在激活的肝星状细胞和受损的肝细胞中表达上调 |
| 1.2.4 lncRNA-Meg8 主要定位于细胞核中 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、LncRNA-Meg8 在纤维化中的功能研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象 |
| 2.1.2 实验材料 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 沉默Meg8促进肝星状细胞的激活 |
| 2.2.2 沉默Meg8促进肝细胞上皮间充质转化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、LncRNA-Meg8 在纤维化中的机制研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象 |
| 3.1.2 实验材料 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 沉默Meg8 促进Notch通路基因的表达 |
| 3.2.2 沉默Meg8 通过Notch通路促进肝星状细胞的激活 |
| 3.2.3 沉默Meg8 通过Notch通路促进肝细胞的上皮间充质转化 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 肝窦内皮细胞在肝纤维化中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一章 C02对CCl_4诱导肝纤维化小鼠的干预作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物模型制备方法 |
| 2.2 血清肝功能检测 |
| 2.3 蛋白免疫印迹 |
| 2.4 肝组织HE染色 |
| 2.5 肝组织天狼猩红染色及胶原半定量 |
| 2.6 肝组织羟脯氨酸含量 |
| 2.7 肝组织和细胞总RNA抽提 |
| 2.8 Real time PCR |
| 2.9 免疫组织化学染色 |
| 2.10 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组小鼠基本情况 |
| 3.2 小鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况 |
| 3.3 C02对CCl_4 肝纤维化小鼠血清ALT、AST的影响 |
| 3.4 C02对CCl_4肝纤维化小鼠肝组织病理学及羟脯氨酸含量的影响 |
| 3.5 C02对CCl_4 肝纤维化小鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.6 C02对CCl_4诱导肝纤维化小鼠肝内巨噬细胞表型的影响 |
| 3.7 C02 对促纤维化相关因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响 |
| 3.8 C02对JNK/ERK/P38 信号通路的影响 |
| 3.9 C02 对巨噬细胞活化相关蛋白IRF5、STAT1 的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第二章 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物来源 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物模型制备方法 |
| 2.2 血清肝功能检测 |
| 2.3 蛋白免疫印迹 |
| 2.4 肝组织HE染色 |
| 2.5 肝组织羟脯氨酸含量 |
| 2.6 肝组织和细胞总RNA抽提 |
| 2.7 Real time PCR |
| 2.8 免疫组织化学染色 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠基本情况 |
| 3.2 大鼠体重、肝重、脾重、肝体比及脾体比的变化情况 |
| 3.3 C02对DMN肝纤维化大鼠血清ALT、AST含量的影响 |
| 3.4 C02对DMN纤维化大鼠肝组织病理及羟脯氨酸含量的影响 |
| 3.5 C02对DMN肝纤维化大鼠肝脏α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.6 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝内巨噬细胞表型的调控作用 |
| 3.7 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏促纤维化因子PDGF-BB、TNF-α表达的影响 |
| 3.8 C02对DMN诱导肝纤维化大鼠肝脏JNK/ERK/P38 信号通路的影响 |
| 3.9 C02对巨噬细胞活化相关蛋白的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第三章 C02对肝星状细胞及巨噬细胞的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 分离原代小鼠肝星状细胞 |
| 2.3 原代肝星状细胞存活率鉴定 |
| 2.4 原代肝星状细胞的纯度鉴定 |
| 2.5 细胞免疫荧光检测 |
| 2.6 CCK8法检测细胞增殖 |
| 2.7 Real Time PCR |
| 2.8 蛋白免疫印迹 |
| 2.9 ELISA检测 |
| 2.10 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 C02对JS-1细胞活力及增殖的影响 |
| 3.2 C02对JS-1 细胞α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.3 C02 对小鼠原代肝星状细胞α-SMA、COL-I表达的影响 |
| 3.4 C02对巨噬细胞的增殖及活力的影响 |
| 3.5 C02 对巨噬细胞分泌相关炎性因子PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的影响 |
| 3.6 C02 对巨噬细胞分泌PDGF-BB、TNF-α、iNOS的影响 |
| 4 本章小结 |
| 第四章 C02通过巨噬细胞影响肝星状细胞的活化 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液配制 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 Transwell细胞共培养 |
| 2.3 细胞免疫荧光检测 |
| 2.4 CCK8法检测细胞增殖 |
| 2.5 Real Time PCR |
| 2.6 蛋白免疫印迹 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 共培养不同时间点巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响 |
| 3.2 共培养24h巨噬细胞CD11b、CD206 表达变化 |
| 3.3 共培养24h巨噬细胞PDGF-BB、TNF-α、TGF-β1、IL-1 mRNA的变化 |
| 3.4 共培养24h培养上清中PDGF-BB、TNF-α蛋白含量变化 |
| 3.5 共培养24h巨噬细胞IRF-5、STAT1 mRNA表达变化 |
| 3.6 共培养24h巨噬细胞对肝星状细胞的活化影响 |
| 3.7 共培养24h对 JS-1 细胞ERK、P-ERK的影响 |
| 3.8 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞STAT1 mRNA变化情况 |
| 3.9 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞CD11b、CD206 mRNA的表达变化 |
| 3.10 STAT1 抑制剂及C02 干预后巨噬细胞分泌促炎因子PDGF-BB、TNF-α变化情况 |
| 3.11 STAT1抑制剂干预后肝星状细胞的活化情况 |
| 4 本章小结 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 本文的创新点 |
| 附录1 :文献综述 肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响 |
| 参考文献 |
| 附录2:在校期间发表的学术论文 |
（8）莪术醇对肝纤维化小鼠肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 基因数据挖掘研究 |
| 1、基于KEGG通路和基因网络对肝纤维化靶点基因的筛选 |
| 1.1 研究的方法 |
| 1.2 研究结果 |
| 1.3 讨论与分析 |
| 2、基于肝星状细胞肝纤维化的生物信息学分析 |
| 2.1 研究方法 |
| 2.2 研究结果 |
| 2.3 讨论与分析 |
| 3、基于网络药理学分析莪术的作用机制 |
| 3.1 研究方法 |
| 3.2 研究结果 |
| 3.3 讨论与分析 |
| 4、总结 |
| 第二部分 莪术醇对肝纤维化KM小鼠的作用 |
| 1、实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 药物与试剂 |
| 1.1.3 主要设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.2 肝纤维化模型的制备 |
| 1.2.3 莪术醇灌胃 |
| 1.3 相关指标的测定及方法 |
| 1.3.1 小鼠一般情况相关指标 |
| 1.3.2 小鼠肝纤四项指标的检测 |
| 1.3.3 小鼠血清肝功能主要指标的检测 |
| 1.3.4 小鼠肝脏病理观察 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2、结果 |
| 2.1 小鼠死亡情况 |
| 2.2 小鼠肝指数 |
| 2.3 小鼠肝纤四项 |
| 2.4 小鼠肝功能 |
| 2.5 肝组织病理检查结果 |
| 3、总结 |
| 第三部分 莪术醇对肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的作用 |
| 1、实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 药物与试剂 |
| 1.1.3 主要仪器设备 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.2 主要试剂的配制方法 |
| 1.2.3 MTT比色法检测HSC的增殖情况 |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR检测RhoAmRNA和 ROCK2mRNA 的含量 |
| 1.2.5 免疫印迹检测RhoA和 ROCK2 的表达 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 2、实验结果 |
| 2.1 MTT比色法检测HSC的增殖 |
| 2.2 RT-PCR来检测RhoA和 ROCK2mRNA |
| 2.3 WB检测RhoA和 ROCK2 的表达情况 |
| 3、总结 |
| 4、讨论 |
| 4.1 西医对肝纤维化的理解 |
| 4.2 肝纤维化病因与流行病学研究 |
| 4.3 肝纤维化发病机制 |
| 4.4 肝星状细胞的生理特性与在肝纤维化中的核心作用 |
| 4.5 中医对肝纤维化的认识 |
| 4.6 中医对肝纤维化的治疗 |
| 4.7 选择莪术醇作为研究对象的理论依据 |
| 4.8 选择血管紧张素Ⅱ作为阳性对照药的依据 |
| 4.9 实验方法的相关讨论 |
| 4.10 总结与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介及攻读学位期间获得的科研成果 |
| 个人简历 |
| 发表的学术论文目录 |
| 主持及参与的课题 |
（9）丹红青成分复方的建立及抗肝纤维化的药效机制（论文提纲范文）
| 主要缩略语 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 四种中药成分最优组方的筛选 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 均匀设计实验方案 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 分组及给药 |
| 2.4 标本留取 |
| 2.5 血清生化学检测 |
| 2.6 肝组织羟脯氨酸含量测定 |
| 2.7 肝组织学观察 |
| 2.8 肝组织胶原纤维沉积面积图像处理半定量分析 |
| 2.9 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 各组小鼠一般情况 |
| 2 各组小鼠体重、肝体比、脾体比比较 |
| 3 各组小鼠肝脏脾脏大体观察 |
| 4 各组小鼠肝组织HE染色观察 |
| 5 肝组织天狼猩红染色观察 |
| 6 各组小鼠肝脏胶原沉积面积测定 |
| 7 各组小鼠肝组织羟脯氨酸含量变化 |
| 8 各组小鼠血清ALT、AST活性检测 |
| 9 四成分复方最适剂量配比的计算 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 三种中药成分最优组方的筛选 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 均匀设计实验方案 |
| 2.2 模型制备 |
| 2.3 分组及给药 |
| 2.4 标本留取 |
| 2.5 血清生化学检测 |
| 2.6 肝组织羟脯氨酸含量测定 |
| 2.7 肝组织学观察 |
| 2.8 肝组织胶原纤维沉积面积图像处理半定量分析 |
| 2.9 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 各组小鼠一般情况 |
| 2 各组小鼠体重、肝体比、脾体比比较 |
| 3 各组小鼠肝脏脾脏大体观察 |
| 4 各组小鼠肝组织HE染色观察 |
| 5 各组小鼠肝组织天狼猩红染色观察 |
| 6 各组小鼠肝脏胶原沉积半定量分析 |
| 7 各组小鼠肝脏胶原沉积面积测定 |
| 8 各组小鼠肝组织羟脯氨酸含量检测 |
| 9 各组小鼠血清ALT、AST活性检测 |
| 10 三成分复方的最适剂量配比计算 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 以CCl_4肝纤维化小鼠模型筛选验证中药成分复方的抗肝纤维化药效 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 分组及给药 |
| 2.3 标本留取 |
| 2.4 血清生化学检测 |
| 2.5 肝组织羟脯氨酸 |
| 2.6 肝组织学观察 |
| 2.7 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 各组小鼠一般情况 |
| 2 各组小鼠体重、肝体比、脾体比比较 |
| 3 各组小鼠肝脏脾脏大体观察 |
| 4 各组小鼠肝组织HE染色观察 |
| 5 各组小鼠肝组织天狼猩红染色观察 |
| 6 各组小鼠肝脏胶原沉积半定量分析 |
| 7 各组小鼠肝脏胶原沉积面积图像处理 |
| 8 小鼠肝组织羟脯氨酸含量检测 |
| 9 各组小鼠血清ALT和 AST活性检测 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四部分 以BDL大鼠模型验证丹红青复方的抗肝纤维化药效 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 模型制备 |
| 2.2 分组及给药 |
| 2.3 标本留取 |
| 2.4 血清生化学检测 |
| 2.5 肝组织羟脯氨酸含量测定 |
| 2.6 肝组织学观察 |
| 2.7 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 各组大鼠一般情况 |
| 2 各组大鼠体重、肝体比、脾体比比较 |
| 3 各组大鼠肝脏脾脏大体观察 |
| 4 各组大鼠肝组织HE染色观察 |
| 5 各组大鼠肝组织天狼猩红染色观察 |
| 6 各组大鼠肝脏胶原沉积面积图像处理 |
| 7 各组大鼠肝组织羟脯氨酸含量变化 |
| 8 各组大鼠血清生化学检测 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第五部分 丹红青方对肝星状细胞功能改变的影响 |
| 实验一 丹红青方抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞的活化及增殖 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 所用主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞复苏 |
| 2.2 细胞培养与传代 |
| 2.3 细胞冻存 |
| 2.4 药物配置和干预方法 |
| 2.5 免疫印迹(Western blot) |
| 2.6 Real time PCR检测 |
| 2.7 分离小鼠原代肝星状细胞 |
| 2.8 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 丹红青方能够抑制TGF-β1 诱导的LX-2 增殖 |
| 2 丹红青方抑制TGF-β1 诱导的LX-2 上调表达Col.I蛋白 |
| 3 丹红青方抑制TGF-β1 诱导的LX-2 上调表达a-SMAm RNA和Col.Im RNA |
| 4 丹红青方抑制TGF-β1 诱导的JS1 上调表达Col.I m RNA和a-SMA m RNA |
| 5 分离的小鼠原代肝星状细胞的鉴定 |
| 6 丹红青方抑制小鼠原代肝星状细胞增殖 |
| 实验二 丹红青方抑制PDGF诱导的肝星状细胞的迁移和增殖 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞复苏、传代及培养 |
| 2.2 药物的配置 |
| 2.3 实验分组及干预方法 |
| 2.4 细胞划痕实验(实验重复3次) |
| 2.5 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 丹红青方能够抑制PDGF诱导的LX-2 迁移 |
| 2 丹红青方抑制PDGF诱导的LX-2 的增殖 |
| 实验三 丹红青方抑制ET-1诱导的肝星状细胞收缩 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要仪器设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 药物的配制 |
| 2.2 鼠尾胶原提取 |
| 2.3 凝胶制备 |
| 2.4 药物的干预 |
| 2.5 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 丹红青方能抑制JS1收缩 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第六部分 丹红青方影响CCl4模型小鼠肝组织信号通路的筛选 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 基因芯片 |
| 2 方法 |
| 2.1 RNA样品抽提及质检 |
| 2.2 文库构建 |
| 2.3 库检 |
| 2.4 上机测序 |
| 2.5 生物信息学分析 |
| 结果 |
| 1 显着性差异基因表达分析 |
| 2 显着性差异表达基因GO功能分类和KEGG通路分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 创新点 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 核转录因子 NF-κB 在肝纤维化和中药抗肝纤维化机制中的研究 |
| 参考文献 |
（10）CXCL12/CXCR4生物轴在肝纤维化中通过上调RhoA活性促进肝星状细胞活化、增殖和迁移（论文提纲范文）
| 个人简历 |
| 中英文对照一览表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 CXCL12/CXCR4轴和RhoA诱导肝星状细胞活化促进大鼠肝纤维化 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 CXCL12/CXCR4轴和RhoA促进肝星状细胞活化、增殖和迁移 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 CXCL12/CXCR4轴通过上调RhoA活性促进肝星状细胞活化、增殖和迁移 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 本研究的创新点 |
| 综述: 肝纤维化相关信号转导通路 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
四、肝星状细胞与肝纤维化的关系（论文参考文献）
- [1]细胞焦亡在肝纤维化发生、发展中的作用研究进展[J]. 万义鹏,张望,朱萱. 中国现代医学杂志, 2021(24)
- [2]miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化[J]. 徐静,严永敏,蔡梦洁. 中国组织工程研究, 2022(05)
- [3]基于自噬探讨肝纤维化发病机制以及壮肝逐瘀煎的潜在干预作用[J]. 梁仁久,梁尧,李建明,黄贵华. 广西医学, 2021
- [4]七叶皂苷钠通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制eIF4F复合物进而缓解大鼠肝纤维化[D]. 谢海深. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]肝硬化病人的肝星状细胞转录组学研究[D]. 刘旭. 吉林大学, 2020(08)
- [6]LncRNA-Meg8通过Notch通路抑制肝星状细胞的激活和肝细胞上皮间充质转化[D]. 林华江. 天津医科大学, 2020(06)
- [7]虫草菌丝活性成分C02通过调控巨噬细胞影响肝星状细胞活化的抗肝纤维化机制研究[D]. 徐莹. 上海中医药大学, 2019(03)
- [8]莪术醇对肝纤维化小鼠肝星状细胞Rho-ROCK信号通路的影响[D]. 郑洋. 广西中医药大学, 2019(03)
- [9]丹红青成分复方的建立及抗肝纤维化的药效机制[D]. 朱慧. 上海中医药大学, 2019(02)
- [10]CXCL12/CXCR4生物轴在肝纤维化中通过上调RhoA活性促进肝星状细胞活化、增殖和迁移[D]. 覃立锋. 广西医科大学, 2019(08)