一、镜下观察活体蚤的新方法（论文文献综述）
梁欣[1]（2021）在《磁粒子成像联合具有MPI响应的Annexin Ⅴ靶向示踪剂在肿瘤细胞凋亡显像中的初步实验研究》文中提出无创、准确、及时地评估肿瘤对治疗的反应,对优化治疗方案、规范医疗管理、评估预后以及新药研发等具有重要的临床意义。目前常用的肿瘤非手术治疗策略,如放疗、化疗、热疗和光动力疗法等,主要是通过显着诱导肿瘤细胞的医源性凋亡以达到治疗成功的目的[1-4]。因此,在肿瘤治疗过程中有效地监测细胞凋亡状态是迫切需要的。虽然已有成熟的方法来检测培养细胞和切片组织的凋亡,如流式细胞术、TUNEL检测或Cleaved Caspase染色,但对于活体内无创凋亡显像及凋亡定量化检测的研究目前仍处于不断探索的阶段,我们希望有一种强大的成像方法来检测和监测肿瘤细胞体内凋亡这一过程。分子成像作为一种无创成像策略,是一种很有吸引力的监测手段,它可以在分子水平上直观、无创地获取更有价值的病理信息[5]。磁粒子成像（Magnetic Particle Imaging,MPI）技术作为近年来新兴的分子影像成像技术,其利用磁纳米粒子的非线性磁化响应原理来定量获取磁纳米粒子在活体动物体内的浓度、分子标记、温度和粘度等信息[6-8],该新型活体无创成像技术具有潜在的高灵敏度（达到纳摩尔级,高出磁共振1000倍）、高速度（断层扫描速度达毫秒级）、大视野（深度视野大于5厘米,超越光学2厘米极限）、高分辨率（达到亚毫米级,高出核素成像3倍）、提供定量信息（用于定量成像区域内SPIO标记的细胞数）及无电离辐射等特点[9-11]。这些优势使其有望为实现活体无创凋亡可视化及凋亡定量提供新的影像学工具。因此,为对以上假设进行验证,研究MPI在凋亡成像中的应用价值,我们进行了如下三部分的实验研究:第一部分具有MPI响应的双模态凋亡靶向磁纳米示踪剂的制备及表征目的:制备具有良好MPI响应、能够特异性靶向凋亡细胞、且符合一定理化表征的磁纳米颗粒,为后续验证MPI凋亡显像提供基本的成像示踪剂。方法:本研究选择在凋亡早期暴露于凋亡细胞膜外的磷脂酰丝氨酸作为其成像靶点,以与之高亲和力、特异性结合的Annexin Ⅴ作为其配基,以已商品化应用于MPI成像研究的超顺磁性氧化铁纳米颗粒（Superparamagnetic Iron Oxide Particles,SPIONs）Vivo Trax作为其成像基本信号源,并辅以荧光染料Alexa Flour 647（AF647）作为其荧光信号源,通过化学交联法合成MPI示踪剂:AF647-Anx V-SPIO,并对其进行提纯和表征,其中包括（1）物理性质表征:运用动态光散射（Dynamic Light Scattering,DLS）技术检测示踪剂水合粒径、示踪剂粒径稳定性;用激光多普勒电泳法检测示踪剂Zeta电位;用透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察其形貌特征、分布。（2）化学性质表征:用电感耦合等离子体发射光谱法（Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometer,ICP-OES）检测示踪剂的铁含量,用BCA蛋白检测法（bicinchoninic acid assay）检测并计算Annexin Ⅴ蛋白与SPIONs的结合率。（3）示踪剂成像性能:用荧光分光光度计检测示踪剂的荧光特征;用MPI扫描仪检测示踪剂合成前后的MPI信号变化及MPI信号与示踪剂浓度的相关性分析。（4）生物安全性能的检测（细胞水平）:用CCK8法（Cell Counting Kit-8）检测不同浓度示踪剂对正常细胞（人脐静脉血管内皮细胞）及肿瘤细胞（EL-4淋巴瘤细胞）的细胞毒性。结果:合成的AF647-Anx V-SPIO相关表征结果如下:（1）物理性质表征:AF647-Anx V-SPIO外观呈深棕褐色,易溶于水,无沉淀无杂质;在透射电镜下:呈圆形、类椭圆形较规则的高电子密度影,平均粒径为6.8±4.7nm;马尔文纳米粒度和Zeta电位分析仪检测结果:AF647-Anx V-SPIO的平均水合粒径（z-Ave）约在87nm左右,而与Annexin Ⅴ连接前SPIO的水合粒径约为67nm,合成后的示踪剂水合粒径增大,这符合连接上生物分子材料的大小和特性。AF647-Anx V-SPIO的水合粒径在72小时内的大小变化不大,约在80nm左右,说明其具有较好的稳定性,AF647-Anx V-SPIO具有较小的多分散指数,PDI小于0.3,说明示踪剂的粒径分布较均一;Zeta电位测试结果显示,AF647-Anx V-SPIO拥有较高的表面负电荷,表面Zeta电位为-21.4±6.11m V,有利于示踪剂在溶液中的分散,防止相互聚集。（2）化学性质表征:荧光分光光度计检测结果:AF647-Anx V-SPIO具有与AF647相同的特征峰,表明示踪剂标记成功,并且AF647-Anx V-SPIO的荧光强度明显高于超滤液中的荧光强化（约20倍）,推测大部分AF647-Anx V蛋白与SPIO发生了结合;BCA蛋白定量检测结果:Annexin Ⅴ蛋白与SIPO的交联率约为91.8%,即大部分的Annexin Ⅴ与SPIO相交联;电感耦合等离子体发射光谱仪结果:AF647-Anx V-SPIO的铁浓度约为4.75 mg/m L。（3）成像性能检测:AF647-Anx V-SPIO具有与AF647相同的特征峰,具有AF647荧光成像特性;AF647-Anx-SPIO的MPI成像性能基本与Vivo Trax一致,具有较好的MPI响应;且AF647-Anx-SPIO浓度与MPI信号具有显着线性相关,拟合系数R2为0.998。（4）生物安全性能检测（细胞水平）:CCK-8法检测不同浓度AF647-Anx VSPIO对HUVECs、EL-4的细胞毒性实验:不同浓度（0-250μg/m L）的AF647-Anx V-SPIO与HUVECs、EL-4细胞共孵育24、48小时后,细胞存活率均在90%以上,说明AF647-Anx V-SPIO具有较低的细胞毒性及较好的生物相容性。结论:本实验成功地将凋亡靶向配基AF647-Annexin Ⅴ与具有MPI响应的Vivo Trax结合起来,制备的AF647-Anx V-SPIO示踪剂水溶性好、粒径分布均匀、稳定性好、具有较高的表面负电位,具有AF647荧光特性及MPI成像性能,具有较低的细胞毒性,可用于接下来的实验研究。第二部分凋亡靶向示踪剂AF647-Anx V-SPIO体外效能评估目的:通过对体外凋亡细胞模型的构建和研究,评估AF647-Anx-SPIO对体外凋亡肿瘤细胞的寻靶能力,以及作为MPI示踪剂的体外凋亡显像能力,为之后活体动物水平MPI凋亡成像的研究奠定基础。方法:运用临床常用化疗药物依托泊苷诱导小鼠T淋巴瘤EL-4细胞,构建体外细胞水平凋亡模型。通过体外流式细胞实验、荧光共聚焦实验定量、定性地检测合成的示踪剂AF647-Anx V-SPIO靶向凋亡细胞的能力。通过对不同处理组细胞进行MPI成像,验证其体外凋亡显像能力,通过对不同数量梯度的凋亡细胞进行MPI成像,检测其定量凋亡细胞的能力。结果:流式细胞术验证了20μM依托泊苷孵育EL-4淋巴瘤细胞14h的体外凋亡模型构建成功,凋亡率约67.21%。通过体外流式细胞实验、荧光共聚焦实验定量、定性验证了AF647-Anx V-SPIO具有良好的体外靶向凋亡细胞的能力,实验组与对照组间荧光强度差异具有统计学意义（p<0.05）。体外MPI成像实验初步验证了MPI对凋亡细胞具有良好的体外成像效果,表现为治疗实验组区别于其他各组明显的高亮MPI图像,且信号强度差异具有统计学意义（p<0.05）。MPI图像信号强度随凋亡细胞数量的增加而增强,两者之间具有很好的线性相关性,拟合系数R2为0.9991。结论:AF647-Anx V-SPIO具有良好的体外靶向凋亡细胞的能力。同时MPI作为一种新兴的成像技术,对体外凋亡细胞可视化和凋亡细胞定量具有良好的检测能力,利用其靶向凋亡肿瘤细胞的能力,为后续动物水平双模态成像提供了理论基础。第三部分MPI检测荷淋巴瘤小鼠化疗效果的初步研究目的:系统评估示踪剂AF647-Anx V-SPIO在小鼠体内的生物安全性;通过构建荷淋巴瘤小鼠-化疗药物诱导的活体肿瘤凋亡模型,初步评估MPI在动物水平对肿瘤凋亡显像的应用潜能。方法:将示踪剂AF647-Anx V-SPIO以不同浓度（生理盐水对照组,50,100,200μg/g）由尾静脉注射到正常裸鼠体内,通过观察各组裸鼠体重、皮肤、口鼻眼等生命体征的系列指标、血常规、肝肾功能等血生化指标及各主要脏器的HE切片染色,检测该示踪剂对机体的生物安全性。选用依托泊苷联合环磷酰胺诱导构建小鼠皮下瘤凋亡模型,通过肿瘤组织TUNEL凋亡染色确认构建的凋亡模型。通过对静脉注射AF647-Anx V-SPIO的凋亡模型小鼠的IVIS成像初步确认MPI的最佳成像时间,并用ICP-OES法做进一步验证。通过对荷瘤小鼠进行活体MPI成像、离体肿瘤及各主要器官MPI成像,检测其在体凋亡显像能力,以及AF647-Anx V-SPIO在体内的分布情况。结果:不同处理组小鼠在生命体征的系列指标及各主要脏器的HE切片染色结果上,均表现出良好的生物安全性;肿瘤组织TUNEL染色证实依托泊苷联合环磷酰胺诱导的小鼠皮下瘤凋亡模型构建成功,联合用药体内肿瘤凋亡率约16.6%。通过IVIS观察得到小鼠尾静脉注射AF647-Anx V-SPIO 2小时后在治疗组肿瘤位置即可早期观察到示踪剂的聚集,4小时后可见较明显的荧光信号,而在注射示踪剂4小时后未治疗组肿瘤部位仍未检测到明显的荧光信号,预计给药4h左右即可有较好的成像效果,ICP-OES检测也进一步证实了这一结果。在活体MPI成像中,两组小鼠肿瘤部位均未检测到明显的MPI信号,但在不同药物处理的离体肿瘤MPI成像中,可以观测到Etoposide+CTX联合治疗组明显区别于Etoposide单药组、CTX单药组及正常对照组肿瘤部位的高亮信号,而Etoposide单药组、CTX单药组也显示出比正常对照组肿瘤部位较高的MPI信号,各组间MPI信号差异反应了肿瘤组织中发生凋亡比率的不同,MPI检测结果与肿瘤组织TUNEL染色结果及实验期间肿瘤体积生长监测结果相符。体外主要脏器的MPI成像结果显示,示踪剂主要分布在肝脏（92±10%）,其次是脾脏（5±1%）和肿瘤（1.6±3%）,在肾脏、肠道和心脏几乎检测不到示踪剂信号。结论:本部分内容是将新兴的成像技术---MPI扩大其医学应用范围,首次应用于凋亡成像可视化的一次初步探索,虽然在活体MPI成像部分没有取得预期效果,但通过离体肿瘤的MPI成像,我们获得了具有很高对比度的肿瘤显影图像,各不同药物处理组间MPI信号的差异反应了肿瘤组织中发生凋亡比率的不同,再次验证了合成示踪剂AF647-Anx V-SPIO的凋亡靶向性以及MPI检测肿瘤化疗效果的能力。相信,随着MPI设备性能的不断优化,更具MPI响应的示踪剂被广泛开发,MPI会发展成有别于现有医学成像模式之外的极具发展前景的诊断工具用于活体凋亡显像。通过我们的初步实验再次说明具有优良MPI特征的示踪剂对于潜在的临床前成像方式的发展和新的可能的临床应用的识别尤为重要。
姚瑶[2]（2021）在《生物系统胁迫产物活性氧的贵金属纳米复合界面原位感知方法研究》文中研究表明环境中的胁迫因素会对生物系统平衡造成威胁,获取胁迫信息并研究应答机制对于维护系统安全具有重要意义。生物体内的活性氧作为最具代表性的胁迫信号分子是获取胁迫信息的有效桥梁。但目前生物体系中活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的检测手段仍存在一些不足之处,如灵敏度不高、感知器件制备步骤繁杂、与生物体系相容性差以及对待测样本造成较大创伤等。本课题以实现生物体系中活性氧的原位感知为主要目标,分别从感知界面建立、感知性能测试、生物体系相容性评估以及原位感知四个方面展开研究。设计与构建了贵金属纳米复合界面,用于活性氧的高灵敏以及高选择性检测,并在此基础上研制了柔性感知器件,探究其用于生物体活性氧原位感知的可行性。主要研究内容及结果如下:（1）针对活性氧检测对于高催化活性感知界面的需求,本课题设计与构建了基于贵金属纳米颗粒-二维纳米材料类纸薄膜的复合感知界面。对过渡族金属硫族化合物（Transition metal dichalcogenides,TMDs）以及过渡族金属碳氮化合物（Transition metal carbides、nitrides、carbonitrides,MXene）中的典型二维纳米材料（二硫化钼:Mo S2,二硫化钨:WS2,碳化钛:Ti3C2Tx）进行自组装以制备类纸薄膜作为基础界面。通过探究类纸薄膜材料的能级分布,提出了类纸薄膜界面处贵金属纳米颗粒自发生长策略。相比于传统构建方法,该方法无需使用有毒试剂、还原剂,常温常压下仅3秒即可实现贵金属纳米颗粒（金、钯）的均匀成核,拥有简单高效、绿色环保的巨大优势。探明了该贵金属纳米复合感知界面的自发氧化还原构建机理,并进一步提出混合贵金属前驱体策略,实现了界面处贵金属纳米颗粒（铂、银）组成与生长形貌的有效调控。基于自发生长策略的感知界面构建与调控方法为后期制备高性能感知器件提供了新的路径。（2）针对目前基于贵金属纳米颗粒的活性氧感知器件制备过程较为繁琐等问题,将自发生长策略构建贵金属纳米复合感知界面的方法应用到柔性TMDs（Mo S2、WS2）以及MXene类纸电极上,制备具有高电化学活性的活性氧感知器件。分别研制了修饰金铂纳米颗粒的Mo S2类纸电极以及MXene类纸电极,并探究了活性氧检测性能。其中,金铂纳米颗粒修饰的Mo S2类纸电极检测活性氧-H2O2时,在0.05～1.05 m M的范围内检测灵敏度可达111μA cm-2 m M-1（R2=0.9910）,检测限（信噪比:S/N=3）为0.01 m M。而金铂纳米颗粒修饰的MXene类纸电极用于检测活性氧-O2·-时,在0.4～9.5μM（R2=0.9962）的线性检测范围内,灵敏度为172μA cm-2 m M-1,检测限为0.2μM。此外,感知器件均展现出较好的选择性、稳定性、重复性以及柔韧性。结果表明贵金属纳米复合感知界面在构建柔性活性氧感知器件上有着较大的应用潜力。（3）针对传统活性氧感知器件与待测生物体系相容性较差等问题,将上述柔性类纸感知器件分别应用到植物以及动物细胞体系中,探究了感知器件的生物相容性以及应用于生物体系活性氧检测的可行性。通过研制金铂纳米颗粒修饰的Mo S2类纸电极并用于植物体系的活性氧检测,建立了活性氧检测模型,标样回收法中高于82%的回收效率验证了模型的准确性。在此基础上,进一步采用自发生长策略构建了新型三元贵金属纳米复合感知界面,即金钯铂纳米颗粒修饰的Mo S2类纸电极用于细胞体系的活性氧监测。结果显示细胞（人体肝癌细胞Hep-G2）与感知界面共同孵育4小时后依旧保持～100%的活性,证明该感知界面细胞毒性小,生物相容性较好。随后建立了细胞体系的活性氧检测模型,并实现了对细胞在药物刺激下释放活性氧的实时监测。结果表明基于贵金属纳米复合感知界面的柔性类纸器件在不同生物体系的活性氧检测上都有着较高的可行性。（4）针对传统活性氧检测手段难以实现原位感知的问题,提出了采用微创植入式的检测手段实现植物体内活性氧的原位感知。由于传统感知器件受到结构与原理的限制,在小型化后会大大影响检测性能,无法在实现微创的同时保持较高的检测精度。基于此,将贵金属纳米复合感知界面与有机电化学晶体管相结合以制备高性能的柔性感知器件。利用有机电化学晶体管的小尺寸、可放大信号以及生物相容等优势,将器件制备于柔性聚酰亚胺薄膜（25μm）上,并设计了针尖状检测端（长度:4 mm）,有效减小了植入式监测对植物体造成的伤害。此外,贵金属纳米复合感知界面的构建进一步增强了器件对活性氧的电流响应信号,保证了植物体内微创式检测的感知精度。通过建立活性氧检测模型以及模拟原位感知实验,证明了该器件在植物体系活性氧的原位感知上具有较高的可行性。
张小川[3]（2021）在《高精度高内涵小鼠全脑图谱构建及其在阿尔兹海默症小鼠中的应用》文中研究指明在全脑范围同时获取多种结构的高分辨图谱对于深入揭示脑功能及神经系统疾病的发病机制具有重要意义。目前已有的成像技术和方法在实现大尺度、高分辨率的多种脑结构元素同步成像方面面临着巨大的挑战。作为严重威胁人类生命健康的神经退行性疾病之一,阿尔兹海默症（Alzheimer’s disease,AD）常伴随广泛的脑组织学和病理学变化:一方面,脑血管结构和功能异常在AD发生发展中的重要性日益得到认可,在全脑尺度介观水平上,脑血管特别是毛细血管在AD病理中的形态和解剖学改变仍有待阐明;另一方面,已有多种成像手段揭示了 Aβ斑块的结构和分布特征,也有多通道荧光标记等方法观察到Aβ斑块对脑结构的影响,然而依然缺乏在全脑范围内针对Aβ斑块及其周围环境三维构筑的高精度、跨尺度研究。针对上述问题,本文发展了一种全脑成像策略,并采用此策略构建了 AD小鼠多种脑结构的高精度图谱。本文第一部分进行了小鼠全脑成像技术的平台搭建及后续图像处理分析,以完成全脑高精度图谱绘制方法的建立。为了实现全脑高分辨率成像以及成像后海量复杂数据的处理与解读,本文首先开展显微光学切片断层成像（Micro-Optical Sectioning Tomography,MOST）技术的应用以及构建高效数据分析流程,主要包含样本制备、数据采集、图像预处理与优化、海马分割、三维可视化重建与定量分析、虚拟内窥等环节,解决了低信噪比图像增强、噪声图像质量优化、高空间复杂度三维数据的快速渲染和量化分析等在数据处理方面依然面临诸多挑战的难题。对C57BL/6小鼠的全脑血管网络精细可视化显示了皮层、丘脑和海马等区域具有各自独特血管模式,其中海马的平均血管直径、血管长度密度、血管体积分数均最低。完整海马的高精度重建揭示了其“耙”式血管分布模式,齿状回（DG-ml）分子层的主要血管在直径和分支角度上均发生突变,呈现出独特的梳状毛细血管分布模式。对单枝海马血管的虚拟内窥从独特的视角观察血管腔的内表面形态、平滑度以及分岔模式,可以提供常规可视化手段不能涉及的血管腔内信息。本文第二部分对APP/PS1转基因小鼠的全脑血管系统进行了高分辨的可视化重建和定量分析,首次在亚微米级别分辨率上系统性地描述了 AD病理相关的海马血管分布和形态模式的变化。运用已建立的MOST技术平台及数据分析路线率先获得了 APP/PS1转基因AD小鼠及其野生型对照的Nissl染色全脑数据集,构建了包含从直径几十微米的大血管到小于2微米的毛细血管的完整小鼠全脑跨尺度三维血管图谱。通过系统定量分析野生型与APP/PS1小鼠的脑血管网络,发现APP/PS1小鼠海马血管的平均血管直径、血管体积分数均显着降低。进一步对海马不同亚区的比较分析揭示了齿状回分子层（DG-ml）的平均血管直径、血管长度密度及血管体积分数的降低程度最为显着。对单枝血管分支模式的量化分析结果表明,APP/PS1小鼠血管分支角度显着变小,导致单枝海马血管的血液灌注面积减少。最后虚拟血管内窥检查揭示了 APP/PS1小鼠与野生型小鼠在血管管腔内壁粗糙度、分支节点平滑度上均有显着差异。上述结果证明了对小鼠脑血管的高分辨率跨尺度评估的能力,并系统揭示了海马微循环尤其是齿状回在AD病理中的损伤。本文第三部分对5×FAD转基因AD小鼠全脑Nissl染色数据集进行高精度的三维重建,首次实现基于Nissl染色的小鼠全脑Aβ斑块分布可视化,首次在同一小鼠全脑中构建了 Aβ斑块及其周围胞体、神经树突、神经束和血管的高精度全景图。针对高通量明场图像背景复杂、灰度异质性导致的高难度信号提取和图像处理问题,设计了包含“虚拟通道分割”和“特征融合”的多种结构信号提取和同步可视化方法,并据此开展多种结构的高精度跨尺度的全脑构筑研究。全脑Aβ斑块密度最大区域及大尺寸斑块分布最密集区域均为内嗅皮层和邻近的海马腹侧下托区域,提示Aβ病理可能最早出现在这些最密集的区域。在全脑范围,Aβ斑块分布较密集的区域通常具有相对较多的胞体且处于血管远端,而神经纤维束在Aβ斑块相对稀疏的区域较为密集;在局部脑区,皮层区域可视化和定量分析均显示Aβ斑块密集区靠近胞体丰富的深部区域,而海马内的Aβ斑块成层状分布在锥体细胞层和颗粒细胞层附近;在亚微米分辨水平,海马辐射层内Aβ斑块周围的神经树突显示出明显的弯曲或截断,海马下托的毛细血管穿过斑块内部或附近,也呈现一定程度截断或变形且表面粗糙度高。此外,本文最后选取了可能影响血管的舒尼替尼、西地那非和可替宁进行给药实验及行为学测试,然后选取行为学变化趋势最明显的可替宁给药小鼠进行多结构同步可视化方法,发现给药后皮层Aβ斑块数量呈下降趋势,而海马区域无明显变化;垂直于脑表面的较粗的皮层血管在给药后呈增多趋势,且皮层血管体积分数显着增加,而海马区域给药后血管形态参数无明显变化。这些结果显示了基于MOST技术的三维可视化方法可能用于研究药物效应。本文提供了一种针对高通量灰度图像进行信息提取和可视化重建的方法,从而完成了对全脑范围内多种结构元素的高精度同步可视化。对全脑范围内多种结构信息的清晰展示为深入理解AD相关病理状态下的大脑解剖结构特征提供了新思路。本文对正常小鼠全脑血管网络尤其是海马血管分布模式的清晰描绘、对AD小鼠脑血管的系统评估和Aβ斑块及其周围多结构的同步可视化,不但促进了在介观水平对正常以及AD病理状态下的小鼠脑基本结构的深入认识,也可能为AD相关药物临床前开发提供新参考。
张慧聪[4]（2021）在《一种生物激发水凝胶荷载微粒羊膜促进皮肤伤口无瘢痕愈合的研究》文中研究指明目的:据报道,每年因烧伤和慢性伤口而受到影响的人分别超过1100万人和650万人。大面积的皮肤创伤或烧伤在治疗后通常会留下疤痕。在过去的几十年中传统的伤口愈合敷料主要致力于抵抗感染和炎症,递送生物活性物质以促进修复,但这些敷料通常可以加速皮肤的愈合,但却很少能促进皮肤附属器的再生。而细胞疗法虽疗效较佳,但其涉及到细胞的分离和培养,时间和物质成本均较高。羊膜构成了预先形成的干细胞膜片,含有丰富的干细胞资源,但其柔软且较薄,难以附着在伤口床上。因此本课题组研发出一种大鲵皮肤分泌物（SSAD）的水凝胶作为微粒羊膜（约600μm）的支架材料,以促进皮肤大面积缺损的无瘢痕愈合并探究其促进无瘢痕愈合的可能机制。方法:为了获得SSAD粉末及微粒羊膜（约600μm）,对羊膜及大鲵的皮肤分泌物进行处理。制备完成的SSAD粉末与PBS混匀后可形成具有粘结性的SSAD水凝胶。采用扫描电镜观察SSAD水凝胶与微粒羊膜的粘结界面。在体外通过微粒羊膜的活死细胞染色及TUNEL染色检测SSAD水凝胶对微粒羊膜的毒副作用。通过羊膜间充质干细胞和Ha Cat细胞的细胞增殖实验,划痕和transwell实验验证SSAD水凝胶促进细胞增殖和迁移的效果。在大鼠背部做直径为20 mm的全层皮肤缺损模型,微粒羊膜,SSAD水凝胶作为阳性对照组,单纯伤口愈合作为阴性对照组,评估SSAD水凝胶荷载微粒羊膜促进大鼠皮肤无瘢痕愈合的效果。同时检测SSAD水凝胶荷载微粒羊膜对实验动物是否有毒副作用。最后,通过对经SSAD条件培养基培养的Ha Cat细胞及4组实验动物进行转录组测序,分析SSAD水凝胶荷载微粒羊膜的可能机制。结果:SSAD水凝胶与微粒羊膜结合后形成了良好的粘附界面。SSAD水凝胶具有良好的生物相容性,对比对照组,体外微粒羊膜的活死细胞染色及TUNEL实验均表现出较少的凋亡。细胞增殖,划痕和transwell实验表明SSAD水凝胶对羊膜间充质干细胞和Ha Cat细胞有促进增殖和迁移的作用。此外,在大鼠全层皮肤缺损模型的结果中显示,SSAD水凝胶荷载微粒羊膜组的伤口愈合时间最短且再生组织可以实现皮肤无瘢痕愈合,有皮肤附属器的再生。同时,毒副检测表明各实验组大鼠没有脏器的损伤和坏死。转录组分析表明,SSAD可以促进细胞的迁移、分化和增殖,这些功能可能归因于SSAD中丰富的生长因子。结论:来源于大鲵皮肤粘液的水凝胶具有良好的粘结性及生物相容性,可以作为支架材料荷载微粒羊膜促进皮肤的无瘢痕愈合,同时它促进细胞迁移、分化和增殖的潜力显示出它具有广泛的医学应用价值。
黑晓燕[5]（2021）在《内热针疗法对兔膝骨性关节炎软骨下骨OPG、RANKL、RANK表达的影响》文中进行了进一步梳理目的通过比较内热针疗法对KOA（Knee osteoarthritis）兔行为学、软骨下骨形态学及软骨下骨骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、核因子κB受体活化因子配体（receptor activator of NF-kB ligand,RANKL）以及核因子κB受体活化因子（receptor activator of NF-kB,RANK）表达的影响,探讨内热针疗法对KOA的疗效及部分作用机制。方法1、分组及模型制备:采取随机数字表法将30只SPF级健康新西兰兔分为空白组（10只）和造模组（20只）。采用改良后Hulth建模方法制备兔左后肢KOA模型,建模成功后再随机分为模型组（10只）与治疗组（10只）;2、干预处理:治疗组实验兔左后膝关节行内热针治疗（42℃,1次/周,每次20min）,连续治疗4周;模型组和空白组均不给予任何治疗;3、观察指标:采用Lequesne MG量表对各组实验兔进行步态评分。采用甲苯胺蓝染色（Toluidine blue staining,TBS）观察各组实验兔膝关节软骨下骨组织形态学变化;采用Western blot和RT-PCR法检测软骨下骨中OPG、RANKL、RANK蛋白及其mRNA的表达。结果1、步态评分:干预前,与空白组相比,模型组和治疗组的实验兔行为学评分显着升高（P<0.05）;治疗组和模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。干预后,治疗组与模型组前后差值相比,差异具有统计学意义（P<0.05）,且治疗组干预后与干预前相比较,差异有统计学意义（P<0.05）。2、甲苯胺蓝染色:与空白组相比,模型组骨小梁呈现稀疏分布状态,连续性中断、骨小梁含量下降、间距增加等变化。与模型组比较,治疗组骨小梁密度增加、分布均匀,间距变窄。3、骨组织形态计量学参数比较:与空白组相比,模型组骨小梁数目下降,骨小梁面积百分数明显变少,骨小梁分离度变大（P<0.05）。与模型组比较,治疗组骨小梁分离度明显下降,骨小梁数量、面积百分比增加（P<0.05）。3组的骨小梁宽度变化不明显,无统计学差异（P=0.549）。4、软骨下骨组织中OPG、RANKL、RANK蛋白表达情况:与空白组相比,模型组OPG表达量明显减少,RANKL和RANK表达量升高（P<0.01）;与模型组比较,治疗组OPG表达量明显升高,RANKL和RANK表达量减少（P<0.05）。5、软骨下骨组织中OPG、RANKL、RANK mRNA表达情况:与空白组相比,模型组OPG mRNA表达量明显变少（P<0.05）,RANKL和RANK mRNA表达量升高（P<0.01）。与模型组比较,治疗组OPG mRNA表达量明显增加,RANKL和RANK mRNA表达量降低（P<0.05）。结论:内热针疗法能显着改善兔KOA行为学以及软骨下骨形态学变化,其机制可能是通过上调兔KOA软骨下骨组织中OPG、下调RANKL和RANK的表达而实现。
陈俊[6]（2021）在《藤黄酸对高脂饮食糖尿病小鼠视网膜炎症的影响及其机制的研究》文中指出目的:糖尿病性视网膜病变（Diabetic Retinopathy,DR）是发生在糖尿病人群的、严重威胁视力的眼部微血管并发症。DR的发生发展与全身及视网膜本身的炎症和免疫反应密切相关。我们通过体外和体内研究来证明中药藤黄主要的活性单体成分之一藤黄酸（Gambogic Acid,GA）对合并“脂毒性”刺激的DR的抗炎治疗作用。研究方法:本研究大体分为三部分:首先,我们通过高糖（High Glucose,HG）联合棕榈酸（Palmitic Acid,PA）诱导人-视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）建立“糖脂毒性”刺激的RPE炎性反应细胞模型,通过CCK8检测细胞活力、ELISA检测IL-1β、TNF-α的表达水平,摸索PA最佳作用浓度及作用时间。用Western-blot检测NLRP3炎性小体相关成分TXNIP、pro-caspase-1/cleaved-caspase-1、ASC的表达,炎性因子pro-IL-1β/cleaved-IL-1β、IL-18蛋白表达以及核因子E2相关因子2（Nrf2）/入核的Nrf2的表达,进行RPE炎性细胞模型验证。然后,使用GA对细胞模型进行干预,Annexin V-FITC检测细胞凋亡、ELISA检测炎性细胞因子水平、Western-blot检测NLRP3炎性小体成分表达、抗氧化信号轴Nrf2信号通路及下游的血红素加氧酶-1（HO-1）、NADPH:醌氧化还原酶1（NQO1）表达水平,免疫荧光检测ARPE-19中Nrf2表达改变和定位,并通过Nrf2 si RNA抑制实验验证GA抗炎作用受Nrf2通路的调节作用。最后,进行相应的体内研究进一步证实GA对DR炎性反应的抑制作用。采用高脂喂养联合STZ腹腔注射方法建立DR早期小鼠模型,C57BL/6小鼠随机分成6组,分别为对照组、高脂喂养组、高脂喂养+STZ模型组及高糖高脂模型加不同剂量GA治疗组;对照组正常饮食,高脂组予高脂饮食、模型组及治疗组采用高脂喂养联合小鼠腹腔注射STZ建立模型,然后治疗组分别给予不同剂量GA治疗。1、成模时ELISA检测小鼠非酯化脂肪酸（Nonestesterified fatty acid,NEFA）的水平;活体眼底血管造影（Fundus fluorescein angiography,FFA）检测小鼠视网膜血管通透性变化,光学相干断层扫描（Optical coherence tomography,OCT）检测小鼠视网膜层次和形态变化。2、GA治疗4周后HE染色+Masson染色观察小鼠视网膜的组织形态学变化、纤维化改变。3、免疫荧光染色及免疫组化检测小鼠视网膜NLRP3、Nrf2定位及表达水平的改变。4、Western-blot检测小鼠视网膜组织中的NLRP3炎性小体相关成分表达水平的变化。5、Western-blot及Real-time PCR检测小鼠视网膜组织中Nrf2及下游HO-1、NQO1蛋白表达量及m RNA水平的变化。结果:1、CCK8和ELISA实验表明200μM浓度的PA与HG共同作用24 h时ARPE-19细胞活力下降;炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量升高;Western-blot显示NLRP3炎性小体组份蛋白表达增加,同时,入核Nrf2蛋白增加。2、0.5、1和2μM的GA处理模型细胞24 h后,CCK8显示细胞活力升高;ELISA分析发现炎性细胞因子IL-1β、TNF-α水平明显被抑制,在亚毒性细胞水平与GA浓度呈剂量依赖性;Western-blot表明GA能下调NLRP3炎性小体成分的表达、增加入核的Nrf2的蛋白表达;免疫荧光分析表明增加的Nrf2定位于细胞核内;RT-q PCR显示GA显着增加了下游依赖Nrf2转录的HO-1和NQO1 m RNA水平。此外,Nrf2si RNA实验证实了Nrf2被沉默后,NLRP3炎性小体组份及下游cleaved-IL-1β不受GA作用影响,继续升高,而入核Nrf2蛋白水平继续下降。3、高脂喂养联合STZ注射小鼠的NEFA含量明显增高;FFA+OCT示血管通透性增加,局部视网膜层次结构欠清晰;Western-blot小鼠视网膜中NLRP3炎性小体成分表达水平升高;经过GA治疗后,1.5 mg/kg、3 mg/kg和6 mg/kg的GA以剂量依赖性方式下调了NLRP3炎性小体成分的表达、抑制炎性细胞因子水平;HE染色+Masson染色观察到GA能够改善小鼠视网膜结构,降低纤维化;同时,GA上调了Nrf2、HO-1、NQO1的表达和m RNA水平。此外,免疫荧光染色和免疫组化结果也证实了GA使小鼠视网膜NLRP3表达降低、Nrf2表达升高的作用。结论:1、PA能显着增强HG对RPE细胞炎性反应的诱导作用,HG联合PA共同培养的ARPE-19可以作为DR早期RPE细胞炎性反应模型。2、GA能够通过激活抗氧化轴Nrf2/HO-1信号通路,抑制TXNIP/NLRP3/IL-1β信号通路的过度活化、抑制“糖脂毒性”引起的RPE细胞炎性反应;GA对ARPE-19的抗炎作用依赖于Nrf2轴的激活;3、高脂喂养联合STZ注射小鼠在“糖脂毒性”刺激下呈DR病变早期变化,视网膜处于炎性应激环境,NLRP3炎性小体参与炎症产生和炎症级联放大过程。4、GA对合并高脂的糖尿病小鼠显示出很好的抗炎效果,能够激活抗氧化轴Nrf2/HO-1信号通路,并抑制TXNIP/NLRP3/IL-1β信号通路的过度活化,对糖尿病小鼠早期视网膜炎症发挥抗炎和保护作用。
乔思佳[7]（2020）在《脂肪基质细胞源性神经元的突触内吞功能研究》文中研究说明目的研究脂肪基质细胞（Adipose-derived stromal cells,ADSC）源性神经元是否具有正常神经元的突触内吞功能。方法1应用针吸法获取成人皮下脂肪组织,提取ADSC培养及传代。2选取第三代ADSC,采用β巯基乙醇（β-mercaptoethanol,β-ME）诱导分化为神经元,将细胞分为ADSC组、1h、3h、5h、8h组。3扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）下观察分化各组细胞的三维形态学特征。4 ADSC源性神经元特异性标志物检测:免疫细胞化学法及Western-blotting法检测各组细胞神经元的特异性烯醇化酶（Neuron specific enolase,NSE）及微管相关蛋-2（Microtubule associated protein 2,MAP-2）的表达情况。5 ADSC源性神经元突触内吞功能核心标志物检测:免疫细胞化学法、免疫荧光双标法以及Western-blotting法定性、定位和定量检测各组细胞中神经元内吞作用核心蛋白衔接蛋白-2（AP-2）、网格蛋白（Clathrin）、吞蛋白（Endophilin）、动力蛋白（Dynamin）、热休克同源蛋白（Hsc70）的表达情况。6透射电子显微镜（Transmission electron microscope,TEM）下观察各组分化细胞的超微结构特征。7 ADSC源性神经元突触的内吞功能实验:应用FM1-43神经元突触内吞功能实验和硒化镉量子点（Cadmium selenide quantum dots,Cd Se QDs）神经元突触内吞功能实验检测分化细胞是否具有内吞功能。8统计学分析方法:本实验所获得的实验数据经Excel 2007建立数据库,采用SPSS 17.0软件包进行数据统计分析,数据以sx±表示,采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）进行组间比较,LSD检验、Tamhane’s T2检验进行两两比较,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1 ADSC提取及培养后24h内贴壁,可呈圆形、多角形、不规则形。随着培养时间延长,ADSC逐渐变为长梭形且呈旋涡状聚集。传代至第三代完全纯化的ADSC主要呈现规则的长梭形密集生长且呈绵羊卷样分布趋势。2扫描电子显微镜下观察ADSC组细胞呈梭形生长,诱导分化1h时细胞两端梭形部位变细边长,诱导分化3h时细胞伸出一根较长且末端略膨大的突起,同时可见多根较短突起且两侧伸出类树枝样细小分支,诱导分化5h时细胞突起分支延伸数量增多,其中伸出一根较细长的突起,较长突起末端膨大并且伸出大量微绒毛,诱导分化8h时细胞突起分支减少、断裂,细胞形态退化。3 ADSC源性神经元特异性标志物检测结果:ADSC组未见NSE和MAP-2阳性表达细胞,在诱导分化各组均可见NSE及MAP-2阳性表达细胞。本实验中各组细胞NSE和MAP-2表达水平均于诱导分化5h时达高峰（P均<0.05）。4 ADSC源性神经元突触内吞功能核心标志物检测结果:ADSC组未见AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin及Hsc70的阳性表达细胞,在诱导分化各组细胞均可见AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin及Hsc70的阳性表达细胞。随着诱导分化时间延长,AP-2、Clathrin、Dynamin及Hsc70的阳性表达水平均于5h时达高峰（P均<0.05）,Endophilin的阳性表达水平于5h时达高峰,8h时Endophilin阳性表达水平下降但与5h组比较差异无统计学意义（P>0.05）。5透射电子显微镜下观察ADSC组细胞胞质丰富,核饱满,内含少量细胞器,诱导分化1h时细胞逐渐形成短小突起,胞质出现少量溶酶体等细胞器,诱导分化3h时细胞短小突起延长,末端可见较多数量囊泡,可见含有大量线粒体及囊泡的类突触前膜结构及电子致密度较高的类突触后膜结构,诱导分化5h时可见细胞表面大量突起及微绒毛,突起处可见大量形态各异的囊泡结构,胞质内细胞器含量丰富并且富含尼氏体这种神经元的特异性细胞器结构,诱导分化8h时细胞突起及微绒毛数量减少,细胞器肿胀,并且含大量次级溶酶体。6 ADSC源性神经元突触的内吞功能实验结果:FM1-43神经元突触内吞功能实验结果显示ADSC组FM1-43阳性表达细胞外溶液及细胞膜,诱导分化各组细胞可见突起处囊泡呈周围FM1-43阳性表达且中间阴性表达的环状类圆形膜样结构,FM1-43阳性表达强度于诱导5h时达到高峰,Cd Se QDs神经元突触内吞功能实验结果显示ADSC组Cd Se QDs于细胞质中呈云片状阳性表达,诱导分化各组细胞突起处可见呈Cd Se QDs阳性表达颗粒样结构,Cd Se QDs阳性表达强度于诱导5h时达到高峰。结论ADSC源性神经元具有正常神经元的生理特征,并且具有位于突起末端的囊泡样超微结构特征以及神经元突触内吞功能所需核心蛋白因子AP-2、Clathrin、Endophilin、Dynamin、Hsc70的表达,FM1-43及QDs神经元功能实验检测验证了ADSC源性神经元具有典型的神经元突触内吞功能。图18幅;表12个;参89篇。
梁冰[8]（2020）在《人工工程肿瘤生物磁体的构建及高效聚集纳米粒协同磁热治疗肝癌的实验研究》文中研究指明第一部分人工工程生物磁体的构建及其表征和磁性能的检测目的制备Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA生物磁体,探索生物磁体达到最佳磁性能时的Nd2Fe14B的配比,并进行材料的表征、液固相变性能及磁力的检测。方法通过机械涡流物理振动方法,制备Nd2Fe14B质量分数为25%,45%,65%的Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA可充磁的前生物磁体。体外超声观测前生物磁体的液固相变性能及相变时间。扫描电镜和元素扫描观察固化后前生物磁体的微观结构及各组分的分布情况,Mapping扫描检测元素含量。充磁后,用高斯计检测含不同质量分数的Nd2Fe14B生物磁体的磁力。结果制备了含有不同Nd2Fe14B质量分数的前生物磁体。在超声及大体观测下,制备的Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA呈凝胶状,具有良好的可注射性及液固相变性能。随着溶剂交换后,发生液固相变,超声检测可见其回声逐渐增强,固化后无崩解溃散,三种不同含量Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA的平均固化时间分别为2.71±0.42分钟,2.72±0.39分钟和2.69±0.36分钟。扫描电镜观测固化后前生物磁体表面稳定,Mapping元素扫描所示各组分分布均匀,其中Nd、Fe、C、O元素百分比与质量百分比统一。随着Nd2Fe14B的含量增多,充磁后Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA的磁力增大,同时在具有相同质量分数的Nd2Fe14B的情况下,随着体积的增大,生物磁体的磁力增大。由于25%和45%质量分数的Nd2Fe14B充磁后所获得的磁力过低,从而不纳入后续动物实验研究。结论Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA前生物磁体的制备流程便捷,产出稳定,固化后元素分布均匀,具有良好的注射性、液固相变性能。充磁后,含65%Nd2Fe14B磁性最佳,饱和磁化强度可达126 emu/g,可以用于后续实验研究。第二部分人工工程生物磁体的体外磁热性能探究目的评估生物磁体的体外磁热性能,为后续体内治疗提供依据。方法根据第一部分的制备方法,将不同浓度,不同质量分数,不同体积的Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA材料制成球体,经过其液固相变后,制作成球形;放入含有1.5 m L生理盐水的EP管内;将EP管放置于自制磁感应加热仪的线圈内,连续暴露于交变磁场中并用红外测温仪记录温度变化（每10秒记录一次,持续180秒）,单纯PLGA与生理盐水组作为对照组,同时绘制时间-温度曲线,并以此筛选后得出用于后续实验的最佳Nd2Fe14B含量的生物磁体。利用离体牛肝模拟实体瘤进行体外实验,将液态的生物磁体注入牛肝中,相变并充磁后,置于交变磁场加热不同的时间（1-5分钟）,用红外仪每10秒一次记录牛肝变化温度,绘制时间温度曲线。同时测量不同时间下牛肝消融范围,记录消融范围,以材料周边发生凝固性坏死为标准,绘制时间消融体积曲线。观察消融范围以及有无正常组织的损伤。结果PLGA对照组（无磁热物质）,置于交变磁场中EP管内温度无明显变化（32.3±0.5°C and 35±1.3°C）,含65%Nd2Fe14B的生物磁体升温速率最快;体积为50μL,75μL,and 100μL的含65%Nd2Fe14B生物磁体置于磁热线圈内3min达到的温度分别为87.3±1.8°C,104.4±2.2°C及125.9±7.1°C。离体牛肝在1-5分钟的消融范围分别为1.0±0.3 cm3,1.8±0.2 cm3,2.2±0.3 cm3,2.3±0.1 cm3,2.7±0.3cm3,随着时间的增多,离体牛肝发生凝固性坏死的区域越大,可作为依据指导后续体内治疗时间的选择。结论随着Nd2Fe14B的含量增多,体积增大,磁热治疗的性能逐渐增强。体外实验表明生物磁体的磁热性能好并且具有一定的可控性,可为后续肿瘤磁热治疗的时间选择提供数据依据。第三部分人工工程生物磁体靶向聚集磁性纳米粒的体内外探究目的评估生物磁体体外聚集及体内原位靶向磁性纳米粒的能力,探索生物磁体介导的原位主动靶向的优势。方法制备模拟血管的体外模型,依据第一部分探索的生物磁体最佳配比,制备前生物磁体65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA并置于充磁机中充磁获得生物磁体。通过大体观察、活体荧光及磁粉的吸收范围,观测生物磁体体外磁性聚集MNPs的能力。培养SMMC-7721人肝癌细胞,建立裸鼠皮下实体瘤肝癌模型。待肿瘤体积长致1±0.1 cm3时,将荷瘤小鼠随机分为4组:单纯肿瘤组,PLGA组,前生物磁体组,生物磁体组。在超声检测下分别原位注入相同体积的生理盐水,PLGA,65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA（不充磁的前生物磁体）及65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA（充磁的生物磁体）,待固化后充磁组制得“肿瘤生物磁体”。随后,尾静脉注入清洗过的荧光磁珠,分别在注入前,24小时,48小时及72小时观察体内磁性纳米粒的靶向性能,同时进行定量分析。并且在不同的荧光检测时间点,分别行普鲁士蓝染色,进一步观测铁物质的沉积量,综合评估生物磁体的体内原位磁靶向效果。结果体外血管模拟磁靶向实验所示,磁性纳米粒可向生物磁体聚集。将其置于均匀分散的磁粉时,可观测到磁感线及磁吸收范围。活体荧光所示肿瘤内生物磁体可高效富集循环血液中的磁性纳米粒,达到主动靶向,48小时时含量最多。其荧光定量分析所示,生物磁体组荧光定量值为示（11.36±2.46）×108,相对为充磁组（1.94±0.86）×108有显着性差异。富集量在72小时达到最多。同时,普鲁士蓝染色所示磁珠沉淀量的定性趋势同上述荧光成像相符。结论体外实验表明,生物磁体可高效聚集磁性纳米粒;体内实验证实,在超声引导下肿瘤生物磁体的制备具有微创性,充磁后主动磁靶向性能强。第四部分人工工程生物磁体的生物安全性及降解性的探究目的探究65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA生物磁体的安全性及降解性能,为后续的体内治疗提供生物安全依据。方法依据前期实验结果,65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA为后续体内实验磁热治疗的配比,用于生物安全性及降解性的探究。75μL的生物磁体,注入Balb/C鼠皮下,待液固相变后,进行充磁制备生物磁体。分别于,注射材料前,注射后第1个月,第2个月,静脉血行血常规及生化常规检测,探究材料对造血系统及肝肾功的影响包括（WBC,RBC,Hb,PLT,ALT,AST,BUN,Cr,LDH,CK）。剩余Balb/C小鼠于2个月后,处死后取五脏（心、肝、脾、肺、肾）行H&E染色,观察脏器有无异常;对肝脏、脾脏行普鲁士蓝染色观察材料降解代谢情况。同时,在各个时间点记录材料代谢情况。结果在注射各个时间点（注射前,）与注射前进行对比,未发现血常规、生化检测与对照组的异常。2月后,75μL皮下生物磁体代谢完全,H&E染色与正常脏器相比未见组织形态破坏与明显异常。肝脾普鲁士蓝染色部分区域可见蓝色颗粒沉着。结论生物磁体植入Balb/C小鼠皮下后,未引起急性炎症反应;对血液系统,肝功肾功、免疫系统等未见明显影响;对脏器（心脏,肝脏,脾脏,肺脏和肾脏）无明显损害,初步证实生物磁体可通过肝脾代谢,具有良好的生物安全性。第五部分超声引导下人工工程肿瘤生物磁体磁热治疗肝癌目的在超声引导下进行肿瘤生物磁体的制备,并且探讨生物磁体对SMMC-7721肝癌实体瘤磁热治疗的效果。方法根据上述四部分的实验结果,筛选出的最适宜体积和最优Nd2Fe14B的配比的生物磁体65%Nd2Fe14B/Fe3O4-PLGA,用于后续体内实验。建立SMMC-7721人肝癌Balb/C-nu荷瘤小鼠,麻醉后在超声引导下注入液态的生物磁体,待固化后进行磁热治疗。在治疗前后（第5,10,15天）记录肿瘤体积大小。评估生物磁体磁热治疗肝癌的疗效,肿瘤体积的变化,生存率,荷瘤裸鼠生命体征。结果人肝癌SMMC-7721荷瘤小鼠成功建立,并在超声引导下成功注入液固相变生物磁体,磁热治疗后的肝癌组织于治疗后第2天开始结痂,约15天脱落,周围组织无损伤。治疗组生存率较对照组明显提升,荷瘤裸鼠的生命体征较肿瘤组平稳。结论人工工程生物磁体可在超声引导下注入肿瘤内部,并且通过磁热疗法,高效治疗肝癌。并且,材料的制备以及磁热治疗过程便捷,有较高的重复性,有潜在的临床应用价值,有望达到临床转化。
张烁[9]（2020）在《抑制RGMb表达前后大鼠MCAO脑梗死后神经机能联系不能的DKI评价》文中研究说明背景和目的脑梗死是脑血管疾病中较为常见的一种表现形式,包括缺血性脑梗死和出血性脑梗死两种类型,前者较常见,约占脑梗死患者的85%,致死率高,且大多数患者后期会出现不同程度后遗症,严重影响了患者的生活质量和家庭幸福。随着临床治疗水平的提高,脑梗死的临床治疗手段更趋全面化,近年来,对于脑梗死后其远隔区域继发的神经损伤及功能代谢异常的干预和治疗引起了更广泛的关注。神经机能联系不能（diaschisis）学说的提出,解释了许多脑梗死后远隔区域所出现的组织结构、功能代谢、电生理活动异常的临床症状,越来越多的研究者依靠更加先进的电生理、病理及影像技术,对神经机能联系不能的发生原因及发展机制进行了更深一步的研究,更加聚焦关注脑梗死发生后,通过对神经联系不能产生通路或介导因子的人为干预,来缓解梗死原发灶对周围及远隔区域结构功能的影响,为神经功能网络的恢复提供了更高效的治疗途径和新方法。排斥性导向分子b（RGMb）是一种重要的轴突生长抑制剂,在中枢神经系统中发挥着抑制轴突再生和重塑的作用,体外实验研究表明,脑梗死发生后RGMb表达量增加,直接参与了梗死区域及与之有神经元联系基础的远隔区域的神经元变性、凋亡等过程,有相关研究表明,RGMb参与介导了神经机能联系不能的产生,因此,RGMb是一种具有巨大潜力的神经元再生抑制性蛋白,临床上通过对其靶向干预,从而对脑梗死或其它中枢神经损伤后神经功能网络的调控有着非常大的临床价值。磁共振扩散峰度成像（DKI）是一种基于水分子运动测量的非侵入性磁共振成像技术,是在扩散加权成像（DWI）和扩散张量成像（DTI）的基础上扩展为可以研究非高斯分布水扩散模型的先进技术,相比于DTI,其增加的峰度值对复杂结构细微组织的观察更敏感。本研究采用DKI技术通过对缺血性脑梗死大鼠的梗死核心区及双侧小脑半球影像参数变化的检测,证明脑梗死后神经机能联系不能现象的存在,并结合病理及免疫组化探讨该现象产生的原因及改善途径,为临床治疗途径的改善提供更加值得信赖的依据。材料与方法1、将144只SD大鼠随机分为A组（假手术组,不插入线栓）、B组（MCAO组,即模型组）、C组（阴性对照组,MCAO模型制作后定向性植入空载腺病毒）、D组（干预组,MCAO模型制作后定向植入重组腺病毒Adv-RGMb-siR）四组:A组共12只、B组60只（分6h、12h、24h、48h、3d共5个时间点,每个时间点12只）、C组36只（分12h、24h、48h共3个时间点的亚组,每个亚组12只）、D组36只（同样分12h、24h、48h共3个时间点的亚组,每个亚组12 只）;2、对A、B、C、D四组大鼠进行神经功能评分及磁共振扫描（序列包括T1WI、T2WI、DWI、DKI）,并对DKI图像后处理,取得梗死核心区（左侧基底节区）、双侧小脑半球的MK图和MD图,处理并记录参数;3、每组大鼠各时间点分别取6只制作大脑标本,用以HE染色和免疫组化,测量梗死核心区（左侧基底节区）、双侧小脑半球RGMb蛋白的表达。4、采用SPSS 21.0统计学软件,两两对比采用独立样本t检验或Mann-Whitney U;多组样本相比较可采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验。多组之间多重比较用LSD-t检验或Bonferroni检验。认为P<0.05差异则有统计学意义。结果1、MCAO组6h、12h、24h、48h、3d核心梗死区及双侧小脑半球的MK值均高于对照组,于12h最高;MD值均低于对照组,于12h最低（P<0.05）;2、MCAO组6h、12h、24h、48h、3d对侧小脑半球的MK值均高于同侧小脑半球,MD值均低于同侧小脑半球（P<0.05）;3、RNAi干预组12h、24h、48h核心梗死区MK值均低于MCAO组,干预组24h、48h核心梗死区的MD值高于MCAO组（P<0.05）;MCAO组与阴性对照组相比,MK值、MD值差异无统计学意义;4、RNAi干预组24h、48h对侧小脑半球MK值低于MCAO组,且低于同侧小脑半球的MK值（P<0.05）;5、MCAO组核心梗死区（6h、12h、24h、48h、3d）、双侧小脑半球（12h、24h、48h、3d）的RGMb表达均高于对照组（P<0.05）;双侧小脑半球对比,对侧小脑半球（12h、24h、48h、3d）的RGMb表达高于同侧小脑半球（P<0.05）;6、RNAi干预组核心梗死区及对侧小脑半球（12h、24h、48h）、同侧小脑半球（24h、48h）的RGMb表达均低于MCAO组,对侧小脑半球的RGMb表达高于同侧小脑半球（P<0.05）;7、RNAi干预前后MK值、MD值变化率:差异有统计学意义的亚组对比中,MK值的变化率高于MD值。结论1、DKI可以用于检测交叉性小脑神经机能联系不能现象,且MK值对检测脑梗死后神经机能联系不能现象较MD值更敏感;2、排斥性导向分子b的表达水平的改变可以提示交叉性小脑神经机能联系不能现象的存在;3、给予RGMb特异性RNAi干预治疗后,梗死核心区及对侧小脑RGMb表达降低,MK值降低、MD值升高,说明该治疗方法对脑梗死后神经机能联系不能有积极的治疗意义。
段丽芸[10]（2020）在《间充质干细胞来源的细胞外囊泡在TNBS诱导的结肠炎小鼠中的治疗作用》文中研究指明研究背景及目的:炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）是一组病因不明且易反复发作的慢性肠道非特异性炎性疾病,包括溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）和克罗恩病（Crohn’s disease,CD）。临床表现主要有腹痛、腹泻及黏液脓血便等症状。IBD的发病原因主要与遗传易感性、环境因素、肠道菌群等有关。间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一类具有再生和免疫调节特性的多能干细胞,可缓解炎症反应及促进受损组织的修复。MSCs旁分泌机制被认为是其发挥治疗作用的主要机制,可释放多种具有生物活性的可溶性因子。细胞外囊泡（Extracellular vesicles,EVs）作为可溶性因子的主要成分,可能在受损组织中起关键作用。实验方法:将24只BALB/c雄性小鼠随机分为假手术组（Sham组）、PBS组、细胞外囊泡组（EVs组）,每组8只。除Sham组外,其余两组均使用2,4,6-三硝基苯磺酸（trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS）灌肠法诱导建立结肠炎动物模型。首先,我们评估了结肠炎小鼠每天的体重变化、疾病活动指数（Disease activity index,DAI）及病理组织学评分等临床参数。其次,我们通过实时聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术和免疫印记（Western blot）技术检测了结肠炎小鼠结肠组织中的促炎细胞因子和抑炎细胞因子之间的平衡。使用IVIS Lumina成像系统检测了结肠炎小鼠肠道中活性氧（reactive oxygen species,ROS）的表达,并通过免疫组化染色评价了结肠炎小鼠髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的活性。最后,我们通过RT-PCR技术和免疫组化染色技术评估了EVs对受损肠道肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IECs）的影响。实验结果:与PBS组小鼠相比,EVs组小鼠的存活率明显提高,小鼠体重改变幅度显着减缓,DAI评分明显降低,结肠组织病理学表现明显改善。与PBS组小鼠相比,EVs组小鼠结肠组织中的促炎细胞因子表达明显降低而抑炎细胞因子表达明显升高。此外研究结果还发现,与PBS组小鼠相比,EVs组小鼠结肠组织中ROS和MPO的活性显着降低,且肠道组织中凋亡相关的蛋白表达明显降低。肠道组织学分析进一步发现,EVs可显着促进受损肠道肠上皮细胞的增殖,促进紧密连接蛋白的表达,降低基质金属蛋白酶的表达,维持肠上皮完整性,促进受损肠道黏膜愈合。实验结论:综上所述,我们的数据表明,MSCs来源的EVs通过调节受损肠道组织中促炎细胞因子和抑炎细胞因子之间的平衡,抑制肠道氧化应激反应,维持肠上皮细胞的结构完整性,从而改善TNBS诱导的结肠炎小鼠症状。此外,本研究结果为MSCs来源的EVs对IBD的治疗提供了一种新的理论基础。
二、镜下观察活体蚤的新方法（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、镜下观察活体蚤的新方法（论文提纲范文）
（1）磁粒子成像联合具有MPI响应的Annexin Ⅴ靶向示踪剂在肿瘤细胞凋亡显像中的初步实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 具有MPI响应的双模态凋亡靶向示踪剂的制备及表征 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验溶液配方 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 AF647-AnxV-SPIO示踪剂的合成流程 |
| 2.2 合成示踪剂形态及粒径的测定结果 |
| 2.3 合成示踪剂AF647-AnxV-SPIO的外观及稳定性检测 |
| 2.4 合成示踪剂AF647-AnxV-SPIO的组分表征 |
| 2.5 合成示踪剂的MPI成像性能及其信号与浓度的相关性分析 |
| 2.6 AF647-AnxV-SPIO的细胞毒性检测结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 凋亡靶向示踪剂AF647-AnxV-SPIO的体外效能评估 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计 |
| 1.2 实验细胞系 |
| 1.3 实验器材 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 体外细胞凋亡模型的构建及验证 |
| 2.2 流式细胞实验对示踪剂靶向凋亡细胞的验证结果 |
| 2.3 荧光共聚焦成像实验对示踪剂靶向凋亡细胞的验证结果 |
| 2.4 MPI体外凋亡细胞显像的成像效果 |
| 2.5 MPI体外定量凋亡细胞的能力检测 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 MPI检测荷淋巴瘤小鼠化疗效果的初步研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验设计 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 示踪剂AF647-AnxV-SPIO生物安全性检测 |
| 2.2 荷淋巴瘤小鼠化疗药物诱导凋亡模型的确认结果 |
| 2.3 荷淋巴瘤小鼠凋亡模型的IVIM成像结果 |
| 2.4 活体ICP-OES法铁含量定量测定结果 |
| 2.5 淋巴瘤凋亡模型的in vivo MPI成像 |
| 2.6 淋巴瘤凋亡模型的ex vivo MPI成像 |
| 2.7 各主要脏器的MPI成像及示踪剂分布情况 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 磁粒子成像的医学应用及临床转化 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）生物系统胁迫产物活性氧的贵金属纳米复合界面原位感知方法研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 课题背景 |
| 1.1.1 常见的生物系统胁迫 |
| 1.1.2 生物系统胁迫下的应答机制 |
| 1.1.3 获取生物系统胁迫信息的重要性 |
| 1.2 生物系统胁迫中的活性氧 |
| 1.2.1 生物体内活性氧的运作和消除机制 |
| 1.2.2 胁迫作用下活性氧的应答机制 |
| 1.2.3 活性氧检测的重要性 |
| 1.3 生物样品中活性氧的检测方法及存在的问题 |
| 1.3.1 常见的检测方法 |
| 1.3.2 存在的问题 |
| 1.4 原位感知技术的生物系统应用现状 |
| 1.4.1 原位感知技术用于生物系统感知的研究背景 |
| 1.4.2 生物系统原位感知的应用前景 |
| 1.5 原位感知生物系统胁迫产物活性氧的要求及存在的难点 |
| 1.5.1 生物系统活性氧的原位感知要求 |
| 1.5.2 生物系统活性氧原位感知所存在的难点 |
| 1.6 研究目的、内容和技术路线图 |
| 1.6.1 研究目的和内容 |
| 1.6.2 技术路线图 |
| 1.7 本章小结 |
| 第二章 贵金属纳米复合感知界面的构建及机理探究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料及方法 |
| 2.2.1 材料和试剂 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 实验步骤 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 纳米材料特性研究 |
| 2.3.2 贵金属纳米复合感知界面的构建及机理研究 |
| 2.3.3 贵金属纳米复合感知界面的调控及机理探究 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 柔性类纸贵金属纳米器件的感知机理及性能研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料及方法 |
| 3.2.1 材料和试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 实验步骤 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 柔性类纸贵金属纳米器件对活性氧-H_2O_2的感知性能测试 |
| 3.3.2 柔性类纸贵金属纳米器件对活性氧-O_2~(·-)的感知性能测试 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 柔性类纸贵金属纳米感知器件在不同生物体系的检测性能探究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料和试剂 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.2.3 实验步骤 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 感知器件用于植物体系的活性氧检测 |
| 4.3.2 感知器件用于动物细胞体系的活性氧检测 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 原位感知生物体活性氧的微创植入式柔性贵金属纳米感知器件研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料和试剂 |
| 5.2.2 仪器设备 |
| 5.2.3 实验步骤 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 柔性贵金属纳米器件的感知机理研究 |
| 5.3.2 有机电化学晶体管的电学性能分析 |
| 5.3.3 贵金属纳米复合感知界面的建立与优化 |
| 5.3.4 柔性贵金属纳米感知器件的性能表征 |
| 5.3.5 建立活性氧检测模型 |
| 5.3.6 植物原位感知的可行性评估 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 全文总结与展望 |
| 6.1 主要研究结论 |
| 6.2 主要创新点 |
| 6.3 进一步研究展望 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（3）高精度高内涵小鼠全脑图谱构建及其在阿尔兹海默症小鼠中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 全脑尺度成像和标记技术的发展 |
| 1.2 显微光学切片断层成像技术用于全脑高分辨成像 |
| 1.3 AD相关的脑血管研究 |
| 1.3.1 AD相关脑血流变化 |
| 1.3.2 AD相关脑血管结构性变化 |
| 1.3.2.1 脑血管细胞病理变化 |
| 1.3.2.2 脑血管基底膜病理变化 |
| 1.3.3 全脑血管成像技术简述 |
| 1.3.3.1 脑血流变化的检测 |
| 1.3.3.2 全脑尺度血管构筑成像 |
| 1.4 淀粉样斑块及其周围多种结构的研究 |
| 1.4.1 Aβ斑块成像方法研究 |
| 1.4.2 Aβ斑块形态特征及分布 |
| 1.4.3 Aβ斑块对神经结构的影响 |
| 1.5 本文立题依据 |
| 1.6 本文研究内容 |
| 1.6.1 MOST技术应用平台与高通量图像数据分析流程搭建 |
| 1.6.2 获取高分辨全脑血管图谱跨尺度研究AD病理中脑血管的变化 |
| 1.6.3 全脑尺度多种结构信息的同步可视化 |
| 1.6.4 其他工作 |
| 第2章 MOST技术应用拓展与高通量数据分析流程搭建 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 材料与试剂配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Nissl染色小鼠全脑样本制备方法 |
| 2.3.2 小鼠全脑样本数据采集 |
| 2.3.3 图像预处理与优化 |
| 2.3.4 海马结构的手动分割 |
| 2.3.5 血管网络的可视化 |
| 2.3.6 血管网络的定量分析 |
| 2.3.7 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 MOST系统整体工作流程 |
| 2.4.2 MOST图像预处理与优化处理 |
| 2.4.3 冠状面厚切片的直接体绘制与MIP渲染 |
| 2.4.4 海马结构手动分割及信息提取 |
| 2.4.5 海马内血管分布模式分析 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 AD模型小鼠全脑血管构筑研究 |
| 3.1 实验动物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 WT与APP/PS1小鼠海马血管网络的系列可视化与比较分析流程 |
| 3.2.2 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 APP/PS1小鼠海马血管系统异常 |
| 3.3.2 APP/PS1小鼠海马血管灌注面积降低 |
| 3.3.3 APP/PS1小鼠虚拟血管内窥影像分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第4章 全脑Aβ斑块及其周围多结构同步可视化 |
| 4.1 实验动物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 5×FAD小鼠全脑Nissl染色样本的制备与采集 |
| 4.2.2 荧光标记方法验证全脑Nissl染色方法显示Aβ斑块的正确性 |
| 4.2.3 石蜡切片常规Nissl染色 |
| 4.2.4 全脑多种结构信息的同步可视化 |
| 4.2.5 5×FAD小鼠灌胃给药实验及后续图像分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 MOST结合小鼠全脑Nissl染色获得多结构信号的同步显示 |
| 4.3.2 不同灰度分布的多结构信号的同步可视化方法 |
| 4.3.3 Aβ斑块分布的全脑可视化 |
| 4.3.4 全脑Aβ斑块及其周围胞体、神经束、血管的同步可视化 |
| 4.3.5 皮层和海马局部区域Aβ斑块、胞体及血管的空间分布关联性 |
| 4.3.6 Aβ斑块周围神经树突的结构异常 |
| 4.3.7 Aβ斑块相关的血管损伤 |
| 4.3.8 全脑多种结构同步可视化评价可替宁对AD小鼠的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 主要内容总结 |
| 5.2 主要创新点 |
| 5.3 研究意义 |
| 5.4 展望 |
| 第6章 其他工作:MOST/FMOST技术应用于肺脏研究 |
| 6.1 材料与试剂配制 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 小鼠全肺Nissl染色样本的制备与采集 |
| 6.2.2 小鼠全肺荧光样本的制备与采集 |
| 6.2.3 全肺数据集的处理与可视化 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 MOST结合全肺Nissl染色实现小鼠全肺气道和血管系统的高精度重建 |
| 6.3.2 小鼠气道和血管系统的三维形态特征分析 |
| 6.3.3 全肺尺度可吸入制剂颗粒分布的高精度分析 |
| 6.3.4 局部区域呼吸道内表面聚集的可吸入颗粒分析 |
| 6.4 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 已发表论文或授权专利 |
| 致谢 |
| 附录Ⅰ 英文缩写词表 |
（4）一种生物激发水凝胶荷载微粒羊膜促进皮肤伤口无瘢痕愈合的研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 SSAD水凝胶和微粒羊膜的制备及表征 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 SSAD水凝胶的体外生物相容性检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 SSAD水凝胶荷载微粒羊膜促进皮肤创口无瘢痕愈合及机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 皮肤表皮干细胞的在伤口愈合过程中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 |
（5）内热针疗法对兔膝骨性关节炎软骨下骨OPG、RANKL、RANK表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 近十年内热针治疗膝骨性关节炎的临床研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（6）藤黄酸对高脂饮食糖尿病小鼠视网膜炎症的影响及其机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:高糖联合棕榈酸诱导糖尿病性视网膜病变色素上皮细胞炎性反应细胞模型的建立 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞株及培养基 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验主要试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养 |
| 2.2.2 药物处理及实验分组 |
| 2.2.3 细胞增殖实验(Cell Counting Kit-8,CCK8 法) |
| 2.2.4 酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA) |
| 2.2.5 Annexin V-FITC/PI双标记染色法检测细胞凋亡 |
| 2.2.6 Western-blot |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 PA最佳浓度测定 |
| 3.1.1 CCK8实验 |
| 3.1.2 ELISA实验 |
| 3.2 PA最佳作用时间测定 |
| 3.2.1 CCK8 |
| 3.2.2 ELISA |
| 3.3 ARPE-19炎性反应细胞模型效果判定 |
| 3.3.1 Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡 |
| 3.3.2 Western-blot检测 |
| 4 讨论 |
| 第二部分:高糖联合棕榈酸诱导色素上皮细胞炎症反应机制及藤黄酸的抗炎效应研究 |
| 5 前言 |
| 6 实验材料及方法 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 细胞培养 |
| 6.2.2 药物处理及实验分组 |
| 6.2.3 CCK8 |
| 6.2.4 ELISA |
| 6.2.5 Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡 |
| 6.2.6 Real-time PCR |
| 6.2.7 免疫荧光 |
| 6.2.8 Western blot |
| 6.3 统计学处理 |
| 7 实验结果 |
| 7.1 藤黄酸最佳浓度 |
| 7.1.1 CCK8 |
| 7.1.2 ELISA |
| 7.2 藤黄酸最佳作用时间 |
| 7.2.1 CCK8 |
| 7.2.2 ELISA |
| 7.3 藤黄酸抗炎效应测定 |
| 7.3.1 Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡 |
| 7.3.2 Western-blot |
| 7.4 藤黄酸对Nrf2的作用 |
| 7.4.1 Western-blot检测Nrf2(核)蛋白水平 |
| 7.4.2 免疫荧光染色评估Nrf2的表达和细胞定位 |
| 7.5 藤黄酸对抗氧化应激相关的蛋白HO-1和NQO1 的影响 |
| 7.5.1 Real-time PCR检测细胞中HO-1和NQO1的mRNA表达水平 |
| 7.5.2 Western-blot检测HO-1、NQO1蛋白表达水平 |
| 7.6 沉默Nrf2 对藤黄酸治疗效果的影响 |
| 8 讨论 |
| 第三部分:高糖高脂激活NLRP3炎性小体介导的糖尿病小鼠早期视网膜炎性机制及藤黄酸保护效应的研究 |
| 9 前言 |
| 10 实验材料与方法 |
| 10.1 实验材料 |
| 10.1.1 实验动物 |
| 10.1.2 饲养条件 |
| 10.1.3 实验仪器 |
| 10.1.4 实验试剂 |
| 10.2 实验方法 |
| 10.2.1 动物模型建立及藤黄酸治疗 |
| 10.2.2 小鼠体重、血糖及NEFA检测 |
| 10.2.3 小鼠活体视网膜血管造影及光学相干断层扫描检查 |
| 10.2.4 小鼠视网膜组织HE染色 |
| 10.2.5 小鼠视网膜组织Masson染色 |
| 10.2.6 小鼠视网膜组织免疫荧光 |
| 10.2.7 小鼠视网膜组织免疫组化 |
| 10.2.8 小鼠视网膜组织Western-blot |
| 10.2.9 小鼠视网膜组织Real-time PCR |
| 10.2.10 小鼠视网膜组织细胞因子含量ELISA检测 |
| 10.3 统计学分析处理 |
| 11 实验结果 |
| 11.1 高脂喂养的糖尿病小鼠病理变化 |
| 11.1.1 小鼠一般情况观察及游离脂肪酸变化 |
| 11.1.2 活体小鼠视网膜血管及视网膜结构变化 |
| 11.2 藤黄酸对视网膜组织病理学改变的影响 |
| 11.2.1 HE染色 |
| 11.2.2 Masson染色 |
| 11.3 藤黄酸对NLRP3炎性小体通路的影响 |
| 11.3.1 免疫荧光染色检测NLRP3在小鼠视网膜分布及表达 |
| 11.3.2 藤黄酸抑制NLRP3炎症相关蛋白的表达 |
| 11.3.3 免疫组织化学检测NLRP3在视网膜中的表达和分布 |
| 11.4 藤黄酸增强Nrf2相关基因及蛋白的表达 |
| 11.4.1 免疫荧光染色检测Nrf2在小鼠视网膜分布及表达 |
| 11.4.2 藤黄酸增强Nrf2相关蛋白的表达 |
| 11.4.3 免疫组织化学检测Nrf2在视网膜中的表达和分布 |
| 11.4.4 Real-time PCR检测Nrf2及下游基因表达水平 |
| 13 讨论 |
| 12 结论 |
| 创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 炎症在糖尿病视网膜病变中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）脂肪基质细胞源性神经元的突触内吞功能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 实验研究 |
| 1.1 技术路线 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.2.1 材料 |
| 1.2.2 实验方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.3.1 ADSC及其分化为神经元过程中的细胞形态学变化特征 |
| 1.3.2 ADSC源性神经元三维细胞形态学的扫描电镜检测结果 |
| 1.3.3 ADSC源性神经元特异性标志物检测结果 |
| 1.3.4 ADSC源性神经元突触内吞功能核心标志物的检测结果 |
| 1.3.5 ADSC源性神经元超微结构的透射电子显微镜分析结果 |
| 1.3.6 ADSC源性神经元的突触内吞功能实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 结论 |
| 第2章 综述 神经元突触囊泡内吞作用与神经系统疾病的研究现状 |
| 2.1 突触囊泡内吞作用的研究方法 |
| 2.1.1 电生理技术检测 |
| 2.1.2 电子显微镜检测(Electron microscopy,EM) |
| 2.1.3 荧光染料检测 |
| 2.2 突触囊泡内吞与神经系统疾病 |
| 2.2.1 网格蛋白介导内吞作用 |
| 2.2.2 Kiss and run |
| 2.2.3 不依赖网格蛋白的大量内吞作用 |
| 2.2.4 超速内吞作用 |
| 2.3 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间研究成果 |
（8）人工工程肿瘤生物磁体的构建及高效聚集纳米粒协同磁热治疗肝癌的实验研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第一部分 人工工程生物磁体的构建及其表征和磁性能的检测 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第二部分 人工工程生物磁体的体外磁热性能探究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第三部分 人工工程生物磁体靶向聚集磁性纳米粒的体内外探究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第四部分 人工工程生物磁体的生物安全性及降解性的探究 |
| 1.材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 第五部分 超声引导下人工工程肿瘤生物磁体磁热治疗肝癌 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 附图 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、参研项目、学术交流及获奖情况 |
（9）抑制RGMb表达前后大鼠MCAO脑梗死后神经机能联系不能的DKI评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词对照表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 缺血性脑梗死后神经机能联系不能的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（10）间充质干细胞来源的细胞外囊泡在TNBS诱导的结肠炎小鼠中的治疗作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、实验材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 细胞 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 主要实验试剂 |
| 1.1.4 实验用溶液的配置 |
| 1.1.5 主要实验仪器及材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 细胞培养 |
| 1.2.1.1 细胞复苏 |
| 1.2.1.2 细胞换液 |
| 1.2.1.3 细胞传代 |
| 1.2.1.4 细胞冻存 |
| 1.2.2 TNBS诱导结肠炎小鼠模型的建立及随机分组 |
| 1.2.3 人胎盘间充质干细胞来源的细胞外囊泡治疗小鼠结肠炎模型 |
| 1.2.4 小鼠结肠炎模型治疗的评估标准 |
| 1.2.5 小动物活体成像 |
| 1.2.6 生物学效应评估 |
| 1.2.6.1 体征观察 |
| 1.2.6.2 ROS化学发光成像 |
| 1.2.6.3 结肠组织取材 |
| 1.2.6.4 切片制备 |
| 1.2.6.5 组织染色 |
| 1.2.7 炎症因子在组织蛋白水平的检测 |
| 1.2.7.1 结肠组织总蛋白提取 |
| 1.2.7.2 蛋白质免疫印迹 |
| 1.2.8 炎症因子在组织基因水平检测 |
| 1.2.8.1 结肠组织RNA提取 |
| 1.2.8.2 cDNA合成 |
| 1.2.8.3 实时荧光定量PCR |
| 1.2.9 细胞外囊泡的提取及鉴定 |
| 1.3 统计学分析 |
| 二、实验结果及分析 |
| 2.1 细胞外囊泡的分离与鉴定 |
| 2.2 细胞外囊泡可改善结肠炎小鼠症状 |
| 2.2.1 各组小鼠大体评估 |
| 2.2.2 各组小鼠结肠宏观表现 |
| 2.2.3 各组小鼠结肠组织的病理评估 |
| 2.3 细胞外囊泡可降低结肠炎小鼠促炎细胞因子的表达 |
| 2.4 细胞外囊泡可促进结肠炎小鼠抑炎细胞因子的表达 |
| 2.5 细胞外囊泡可抑制结肠炎小鼠组织中活性氧簇(ROS)的表达 |
| 2.6 细胞外囊泡可减轻结肠组织中的髓过氧化物酶(MPO)含量 |
| 2.7 细胞外囊泡可抑制结肠炎小鼠肠道上皮凋亡 |
| 2.8 细胞外囊泡可促进结肠炎小鼠上皮细胞增殖 |
| 2.9 细胞外囊泡可促进肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达 |
| 三、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文情况说明 |
| 综述 间充质干细胞来源的细胞外囊泡在炎症性肠病中的应用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、镜下观察活体蚤的新方法（论文参考文献）
- [1]磁粒子成像联合具有MPI响应的Annexin Ⅴ靶向示踪剂在肿瘤细胞凋亡显像中的初步实验研究[D]. 梁欣. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]生物系统胁迫产物活性氧的贵金属纳米复合界面原位感知方法研究[D]. 姚瑶. 浙江大学, 2021(01)
- [3]高精度高内涵小鼠全脑图谱构建及其在阿尔兹海默症小鼠中的应用[D]. 张小川. 华东理工大学, 2021(08)
- [4]一种生物激发水凝胶荷载微粒羊膜促进皮肤伤口无瘢痕愈合的研究[D]. 张慧聪. 重庆医科大学, 2021(01)
- [5]内热针疗法对兔膝骨性关节炎软骨下骨OPG、RANKL、RANK表达的影响[D]. 黑晓燕. 宁夏医科大学, 2021(02)
- [6]藤黄酸对高脂饮食糖尿病小鼠视网膜炎症的影响及其机制的研究[D]. 陈俊. 中国医科大学, 2021(02)
- [7]脂肪基质细胞源性神经元的突触内吞功能研究[D]. 乔思佳. 华北理工大学, 2020(02)
- [8]人工工程肿瘤生物磁体的构建及高效聚集纳米粒协同磁热治疗肝癌的实验研究[D]. 梁冰. 重庆医科大学, 2020(01)
- [9]抑制RGMb表达前后大鼠MCAO脑梗死后神经机能联系不能的DKI评价[D]. 张烁. 郑州大学, 2020(02)
- [10]间充质干细胞来源的细胞外囊泡在TNBS诱导的结肠炎小鼠中的治疗作用[D]. 段丽芸. 天津医科大学, 2020(06)