问：土壤放线菌的分离和纯化要注意哪些问题
- 答：（1）能分解尿素的细菌将尿素氧化成氨气，代谢类型为异氧需氧型．（2）尿素为唯一碳源的培养基上，只有能分解尿素的菌才能以尿素作为氮源生长繁殖，不能分解尿素的菌因缺乏氮源无法生长繁殖，因此分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用尿素为唯一碳源的培养基进行分离，分解尿素的菌在分解尿素时产生氨气，使酚红指示剂显红色，所以要加入酚红指示剂进行鉴别．（3）若取土样5g，应加入45ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液，样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落的数目，选用一定稀释范围的样品进行培养，取样稀释前，一定要将菌液摇匀以减少误差；将103-107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用稀释涂布平板法将菌液用涂布器涂布到固体培养基上．（4）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有红色环带的菌落既是分解尿素的菌的菌落，估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30 到300之间的平板，分析表格是数据可知，105和106的稀释度平板菌落数在这一范围．故答案应为：（1）异氧需氧型（2）尿素为唯一氮源 酚红（3）45（4）摇均（震荡、混匀） 涂布器（玻璃刮刀） 稀释涂布（平板）法（5）红色环带 105或106
问：将土壤中的微生物（细菌，真菌，放线菌）进行分离，纯化，培养保藏的具体步骤及注意事项
- 答：1.用三种培养基培养，分别是牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养、分离）、马铃薯葡萄糖培养基（真菌培养），高氏1号培养基（放线菌）
2.培养一定时间，待菌长出，根据三种菌的菌落特点，选取菌种，用划线法接种到各种菌对应的斜面培养基上，培养。
3.进行生化实验，确定是否是你猜想的菌。三种菌的生化实验具体我也不是很清楚。
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问：放线菌如何纯化培养？
- 答：分离放线菌用高氏1号培养基加10%的酚数滴以抑制细菌的生长。将高氏1号培养基熔化，冷却至50℃左右时，加入10%的酚数滴，然后到平板，并标记稀释倍数。将10克土样倒入盛有玻璃珠和90毫升无菌水的三角瓶中，震荡30分钟，制成悬浊液。再取一支1毫升无菌移液管，吸取0.5毫升土悬液注入盛有4.5毫升无菌水的试管中取另一支1毫升无菌移液管吹吸三次，吸取0.5毫升注入另一盛有4.5毫升无菌水的试管中，以此类推，稀释四次。接下来，取一支1毫升无菌移液管吸取不同浓度的悬液各0.2毫升于相应的平板上，用无菌涂棒涂匀。将培养皿倒置于28℃恒温箱中培养3~4天即可转管 。
