一、影响牦牛繁殖力的因素（论文文献综述）
陈虹,廖博,樊江峰[1]（2021）在《提高天祝白牦牛繁殖力的措施》文中认为本文对影响天祝白牦牛繁殖力的遗传、环境、营养、管理等因素进行了分析,提出了加强草原生态建设;强化对繁殖牛群的饲养管理;适时断奶,挖掘母牦牛的繁殖潜力;使用生殖激素调控,促进母牦牛及早发情;开展遗传改良等提高天祝白牦牛繁殖力的措施,以期为提高白牦牛生产性能和养殖效益提供参考。
刘宇,邬建飞,李恒,荆天,卢建远,字向东[2]（2021）在《牦牛StAR基因克隆及其生物信息学与组织表达特性的研究》文中研究表明旨在克隆获得牦牛StAR基因编码序列（CDS）并进行生物信息学分析,探究其mRNA组织表达特性。本研究以屠宰场采集的成年母牦牛心、肝、脾、肺、肾、卵巢、输卵管、子宫组织（n=5）,不同年龄（胎牛、1岁、 2岁）牦牛的卵巢（n=3）,不同发情周期（卵泡期、黄体期）的牦牛卵巢（n=3）,黄体期黄牛的卵巢（n=3）及实验室冻存的牦牛颗粒细胞为研究材料。以牦牛黄体期卵巢cDNA为模板,用逆转录PCR克隆StAR基因,并使用MEGA7.0和ExPASy-ProtParam等软件分析其生物信息学特性;采用实时荧光定量PCR技术分析牦牛StAR基因组织表达特性。结果发现,StAR基因CDS区长858 bp,编码285个氨基酸,StAR蛋白总体带正电荷,属于碱性亲水稳定蛋白,无跨膜结构及信号肽,主要存在于细胞质和线粒体;StAR基因具有较高的保守性,符合物种进化规律。牦牛StAR基因在卵巢表达水平最高（P<0.01）,且2岁时卵巢表达水平极显着高于胎牛和1岁龄（P<0.01）,黄体期卵巢表达水平极显着高于卵泡期（P<0.01）;黄体期黄牛卵巢中StAR基因的表达量极显着高于牦牛（P<0.01）;在颗粒细胞的体外培养过程中StAR基因表达量逐渐上升,在培养24 h时达到高峰（P<0.01）,随后显着降低。综上所述,StAR基因序列较为保守,在牦牛卵巢组织中表达最高,且表达水平随年龄与卵巢周期而变化,提示StAR基因可能参与牦牛卵巢及黄体功能相关的繁殖调控。
周凡莉,刘晓霞,何小强,李小伟,王燕文,谭雄,杨壮,罗光荣[3]（2021）在《牦牛同期发情技术研究》文中提出牦牛理论上具备1a1胎的繁殖潜力,但草场退化,草畜不平衡,加之母牦牛哺乳犊牛,部分牦牛乳用于牧民生产生活,使母牛营养不足,产犊当年不发情,一般为2a1胎或3a2胎,母牛繁殖力低下。同期发情是提高母牦牛繁殖力的重要技术手段,同期发情可将母牛群的发情期调整到一定时间内同时发生,便于进行人工授精,使犊牛在同一段时间出生,有利于母牛和犊牛的饲养管理。同期发情技术配合牦牛冻精、人工授精技术,可以提高母牛的繁殖力,使母牛的繁殖性能得到充分发挥。因此,研究牦牛同期发情技术是十分必要的。
李瑞哲[4]（2021）在《低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制》文中指出牦牛（Bos grunniens）是青藏高原及其毗邻地区的特色畜种,对当地农牧民的生产生活具有重要的意义,被誉为“高原之舟”。牦牛繁殖的季节性明显,繁殖效率较低,严重制约了产业发展。利用胚胎体外生产等现代繁殖生物技术,能够提升牦牛的繁殖潜力,是提高牦牛产业效率的途径之一。卵母细胞是现代繁殖生物技术的基础材料,卵母细胞质量影响着后续胚胎质量。在人、牛、山羊和小鼠等物种上的研究表明,体外成熟过程中氧分压影响卵母细胞的质量和发育能力,而在牦牛上相关研究还较少。为此,本研究在分析不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力影响的基础上,分别从卵母细胞和卵丘细胞转录组层面探讨了低氧影响牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的机制。主要研究结果如下:1.不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了5%和20%O2对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平和GSH含量,孤雌胚胎和体外受精（IVF）胚胎发育的影响。结果表明:5%O2提高了卵母细胞体外成熟率（P<0.05）和GSH含量（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.01）,提高了孤雌囊胚和IVF囊胚质量。2.不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响研究了卵母细胞成熟液中添加半胱胺、褪黑素、白藜芦醇和维生素C对牦牛卵母细胞体外成熟率,卵母细胞ROS水平、GSH含量和线粒体分布,以及IVF胚胎发育的影响。结果表明:（1）半胱胺提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）;（2）褪黑素提高了卵母细胞的成熟率（P<0.05）、GSH含量（P<0.05）、线粒体均质分布比例（P<0.05）和IVF胚胎卵裂率（P<0.05）,降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）;（3）白藜芦醇和维生素C均提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）和降低了卵母细胞ROS水平（P<0.05）。3.不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛MⅡ期卵母细胞,分别进行单细胞转录组测序。鉴定出120个差异表达基因,其中37个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、细胞周期/细胞分裂、染色质构象与重塑和细胞骨架,83个基因在5%O2组下调,主要参与能量代谢、蛋白合成、氧化还原平衡和卵丘细胞调控。GO分析表明:上调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于核质、以DNA为模板的正向转录调控、ERK1和ERK2级联反应等7个条目;下调基因（5%O2 vs 20%O2,下同）富集于线粒体、线粒体呼吸链复合体Ⅰ、胞浆大核糖体亚单位和外泌体等7个条目等。KEGG分析表明:上调基因富集于缺氧诱导因子-1信号转导、神经营养因子信号转导、粘附斑、微丝细胞骨架调控和PI3K-Akt信号转导等11个通路;下调基因富集于氧化磷酸化等4个通路。4.不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响对5%和20%O2成熟培养的牦牛COCs,分别收集卵丘细胞,进行转录组测序。鉴定出270个差异表达基因,其中229个基因在5%O2组上调,主要参与缺氧反应、糖酵解、免疫/炎性反应和细胞凋亡,41个基因在5%O2组下调,主要参与抗凋亡和抗炎。GO分析表明:上调基因富集于缺氧反应、糖酵解过程、ATP代谢过程、炎症反应等26个条目;下调基因富集于蛋白同二聚化活性和受体结合2个条目。KEGG分析表明:上调基因富集于神经活性配体-受体互作、c AMP信号通路、糖酵解/糖异生等9个通路;下调基因没有得到富集。本研究分析了不同氧分压和抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及不同氧分压对牦牛卵母细胞和卵丘细胞转录组的影响,得出以下结论:与20%O2培养相比,5%O2培养时牦牛卵母细胞受到的氧化应激减少,卵丘细胞向卵母细胞提供能量代谢底物的能力增强,有利于牦牛卵母细胞的体外成熟和早期胚胎发育。研究结果为继续深入研究氧分压对牦牛卵母细胞成熟、发育能力及卵丘细胞-卵母细胞互作的影响及其作用机制提供了参考数据。
高泽川[5]（2021）在《HAS2和PTGS2在牦牛卵巢中的定位表达及FGF10对其表达影响》文中进行了进一步梳理牦牛（Bos grunniens）起源于中国,是中国的原始物种,主要分布在青藏高原和周围海拔3000m以上的高原地区,牦牛适应高寒、低氧能力较强,但生育能力较为低下,流产率高,从而严重影响了牦牛的繁殖以及当地经济发展。本研究选取牦牛卵巢作为研究对象,探究透明质酸合成酶2（Hyaluronate synthase 2,HAS2）和前列腺素内过氧化物合酶2（Prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2）在牦牛不同时期卵巢的定位与表达以及探究FGF10处理牦牛颗粒细胞对HAS2和PTGS2的表达影响。采集使用临床健康牦牛不同时期（卵泡期、黄体期、妊娠期）的卵巢组织和使用浓度为0、0.5、1、5、10、20ng/m L的FGF10作用于颗粒细胞为研究对象,提取卵巢组织和颗粒细胞总RNA和蛋白,采用实时荧光定量PCR（Quantitative real time PCR,q RT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blotting,WB）方法检测牦牛不同时期卵巢中HAS2和PTGS2基因表达和体外培养颗粒细胞过程中添加外源FGF10后对HAS2和PTGS2基因的表达影响,采用免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）法检测HAS2和PTGS2在不同时期卵巢中的分布情况以及免疫荧光法检测HAS2和PTGS2在颗粒细胞定位表达。结果如下:（1）HAS2基因在黄体期卵巢的表达量显着高于卵泡期和妊娠期（P<0.05）,卵泡期卵巢表达量显着高于妊娠期（P<0.05）;PTGS2基因在黄体期卵巢表达量显着高于其他2个时期（P<0.05）,在卵泡期卵巢表达量显着高于妊娠期（P<0.05）。HAS2蛋白在3个时期的卵巢中均有表达,其中黄体期卵巢表达量显着高于其他2个时期（P<0.05）,妊娠期显着高于卵泡期（P<0.05）;PTGS2在黄体期表达量显着高于其他2个时期（P<0.05）,卵泡期显着高于妊娠期（P<0.05）。IHC试验表明,HAS2和PTGS2蛋白在黄体细胞、颗粒层和卵丘细胞中表达。（2）使用不同浓度0,0.5,1,5,10和20ng/m L的FGF10作用颗粒细胞之后,卵丘扩展相关基因HAS2和PTGS2表达与FGF10浓度呈正相关。HAS2基因表达量在FGF10浓度1ng/m L时表达量最高且显着高于其他处理组（P<0.05）,0.5ng/m L、5ng/m L和10ng/m L相比表达量差异性不显着（P>0.05）,但与对照组（0ng/m L）相比差异显着（P<0.05）。PTGS2基因在10ng/m L组表达量最高（P<0.05）,与对照组（0ng/m L）相比,0.5ng/m L和1ng/m L处理组中的表达差异性不显着（P>0.05）。HAS2蛋白在1ng/m L时表达量显着高于其他处理组,0.5ng/m L、5 ng/m L和10 ng/m L处理组表达差异不显着（P>0.05）,PTGS2蛋白在1ng/m L处理组中表达量显着高于其他组（P<0.05）。免疫荧光结果显示HAS2和PTGS2在细胞质与细胞核中均有表达。（3）体外培养牦牛颗粒细胞,经过鉴定,FSHR和LHR在牦牛颗粒细胞中均呈阳性表达。综上,结果表明HAS2和PTGS2在牦牛不同时期卵巢表达且具有显着差异性（P<0.05）,黄体期表达量与其他组相比最高且具有显着性差异（P<0.05）,推测HAS2和PTGS2可能参与牦牛卵母细胞发育成熟、黄体生成和退化以及胚胎早期发育有关。HAS2和PTGS2在不同浓度FGF10作用的颗粒细胞中表达具有一定差异性（P<0.05）,呈浓度依赖性表达,作用效果与FGF10浓度有关,HAS2和PTGS2基因在FGF10为1ng/m L时作用效果最佳,证明FGF10参与牦牛HAS2和PTGS2的表达调控,参与卵丘扩展生殖生理活动。以上研究结果为进一步研究生长因子对牦牛卵丘扩展生殖相关的影响机制提供了依据。
杨启林,徐尚荣,彭巍,张君[6]（2020）在《不同季节牦牛卵泡发育的研究》文中指出本研究利用组织学和酶联免疫法对,夏季和冬季牦牛卵巢状态变化进行研究。通过收集冬季和夏季的卵巢组织,分别测定卵巢含量、卵巢大小及重量,用Graphad软件统计各级卵泡的数量,并观察卵泡发育情况,同时测定血液中的褪黑素含量。结果表明,牦牛卵巢重量夏季（3.34g）明显高于冬季（0.16g）,夏季牦牛血液中褪黑素含量（37.6pg/mL）明显高于冬季牦牛血液褪黑素（19.3pg/mL）的含量,并发现冬季卵巢组织切片中出现多囊卵泡,表现为颗粒细胞异常。究其原因可能是牦牛冬季卵泡发育过程被打乱,导致前期卵泡积累异常。牦牛卵巢这些变化特征与牦牛发情症状和繁殖力息息相关,研究导致多囊卵泡的原因为后期卵泡积累异常提供理论依据。
谢建鹏[7]（2020）在《冷季补饲后牦牛卵巢miRNA和血清差异蛋白的筛选与鉴定》文中研究表明牦牛（Bos grunniens）主要分布在青藏高原及其毗邻高海拔地区,是当地牧民重要的生产和生活资料。由于青藏高原特殊的自然生态条件,牦牛主要以放牧为主,产区饲草料资源匮乏,严重制约着牦牛生产水平的提高。牦牛的生产水平低下与其繁殖力较低有着紧密关系。因此,为了提高牦牛的繁殖力,本研究在冷季补充混合饲料,提高牦牛的营养水平,并且结合遗传学方法从遗传本质上提高牦牛的繁殖效率,进而提高牦牛的生产水平。本研究选取20头年龄相近的空怀母牦牛,随机选取10头作为实验组（CS）,其余10头作为对照组（CON）。实验开展时间为寒冷季节（2-5月份）,冷季补充混合饲料实验结束之后,测定牦牛生产性状、血清生化指标和繁殖激素浓度变化。采用高通量测序技术对CS和CON牦牛的卵巢组织进行Small RNA测序,获取差异表达miRNA,预测差异表达miRNA靶基因,并进行GO功能和KEGG信号通路富集分析,筛选牦牛通过营养水平与繁殖力相关的miRNA。通过冷季补充混合饲料实验发现,部分实验组牦牛在非繁殖季节（6月份）也出现发情症状,为了了解这种非繁殖季节表现发情的分子调控机理,本实验通过同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,构建了非繁殖季节（6月份）和繁殖季节（8月份）发情牦牛血清组织文库,筛选由营养因素引起的差异表达蛋白。主要的研究结果如下:1.通过寒冷季节补饲,CS牦牛体重显着高于CON牦牛（P<0.05）,CS牦牛平均日增重（ADG）极显着高于CON（P<0.01）。两组牦牛血清生化指标:血糖（GLU）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、甘油三酯（TRIG）、胆固醇（CHOL）浓度,CS牦牛显着高于CON（P<0.05）。两组牦牛血清中繁殖激素浓度变化,CS牦牛血清中促性腺激素释放激素（Gn RH）、促卵泡激素（FSH）、促黄体生成激素（LH）、雌激素（E2）和孕酮（PROG）浓度显着高于CON（P<0.05）。2.总共鉴定了1074个miRNA（670个已知miRNA和404个新miRNA）,对其表达量进行了显着性统计分析,共有51个差异表达miRNA,CS组和CON组比较后发现,其中26个miRNA表达上调、25个miRNA表达下调。3.GO功能富集分析发现,差异表达miRNA靶基因主要富集在蛋白质代谢过程（protein metabolic process）,代谢过程的调节（regulation of metabolic process）,细胞对氨基酸刺激的反应（cellular response to amino acid stimulus）,蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）等一些与代谢相关的GO功能。KEGG信号通路分析发现了一些可能与牦牛繁殖间接相关的代谢通路,如β-丙氨酸代谢（beta-alanine metabolism）,色氨酸代谢（tryptophan metabolism）,鞘脂类代谢（sphingolipid metabolism）,丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢（alanine,aspartate,and glutamate metabolism）,肌醇磷酸代谢（inositol phosphate metabolism）等。4.成功构建靶基因VEGFA和KLF7的野生型和突变型双荧光素酶载体（p GL3-pr omoter-wt VEGFA-3′UTR、p GL3-promoter-mt VEGFA-3′UTR、p GL3-promoter-wt KLF7-3′UTR、p GL3-promoter-mt KLF7-3′UTR）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,靶基因VEGFA和KLF7的野生型载体+mimics组荧光素酶活性极显着低于野生型载体+mimics NC组（P<0.01）,突变型载体+mimics组与突变型载体+mimics NC组荧光素酶活性差异不显着（P>0.05）;pGL3-promoter+mimics组与pGL3-promoter+mimics NC组荧光素酶活性差异不显着（P>0.05）。VEGFA是miR-200b的靶基因;KLF7是miR-223的靶基因。5.利用iTRAQ技术对非繁殖季节和繁殖季节牦牛血清进行蛋白质组学分析,共发现了25个差异表达的蛋白质,其中16个差异蛋白表达上调,9个差异蛋白表达下调。GO和KEGG分析表明,钙信号传导途径和β-丙氨酸代谢可能是营养调控季节性发情的候选通路。使用平行反应监测技术（PRM）验证了差异蛋白表达,并最终筛选了α-2-巨球蛋白（A2M）,胰岛素样生长因子II（IGF2）和α-1B糖蛋白（A1BG）为候选蛋白。通过寒冷季节补饲后提高牦牛的生长性状和繁殖水平,并且结合高通量测序技术和iTRAQ蛋白组学技术,经过生物信息学预测和功能分析,筛选到了6个关键的miRNA（miR-483、miR-449a、miR-223、miR-200b、miR-200a和miR-2431-5p）和3个候选差异蛋白（A2M、IGF2和A1BG）。它们与提高牦牛营养水平进而提高牦牛繁殖效率的生物学过程密切相关,今后需在细胞水平以及更深层次的验证它们的具体调控机制,该研究为冷季通过补饲进而提高牦牛的繁殖效率提供了一定的理论依据。
马晓玲,黄荣,舒适,张君[8]（2020）在《围产期牦牛酮体对繁殖性能影响的研究进展》文中研究指明围产期是经产牦牛生产周期中最关键的时期,处于每年的枯草期,此时的营养状况是影响牦牛繁殖性能的关键因素之一。围产期牦牛由于传统放牧模式、冷季饲草缺乏,加上没有补饲条件易出现能量负平衡。在对奶牛的研究中,酮体是机体发生能量负平衡时的重要产物。然而,目前对于牦牛围产期酮体的研究,及酮体对繁殖性能的影响鲜见报道,因此本文就围产期牦牛酮体对繁殖性能影响的研究进展进行了综述,以期为牦牛的生产与繁殖性能的研究提供参考。
马睿[9]（2020）在《EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响》文中提出细胞自噬和胞吞是细胞进行正常生命活动所必须的生理程序,其活性受到诸多因素的影响。生长因子作为哺乳动物体内的重要调节因子,可通过多种作用方式参与动物的卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育,但其对哺乳动物生殖相关细胞自噬及胞吞程序调控的相关研究目前仍十分少见。牦牛（Bos grunniens）作为高原地区重要经济畜种,其季节性发情、繁殖力低下的特征是牧区经济发展困难的主要原因之一,卵丘细胞紧紧围绕卵母细胞生长,它自身的自噬和胞吞活动对卵泡发育及卵母细胞成熟具有重要作用。本研究选取牦牛卵丘细胞为研究对象,探究表皮生长因子（Epidermal gr owth factor,EGF）和胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor,IGF-1）对其自噬和胞吞活动的影响。使用浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的EGF和适宜浓度（10μmol/L）表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制剂Gefitinib以及浓度为0（对照组）、50、100、150、200 ng/mL的IGF-1作用于牦牛卵丘细胞,提取细胞总RNA和总蛋白。利用qRT-PCR及Western-blot等技术分别测定各浓度下自噬相关基因5（Autophagy related gene 5,Atg5）、Bcl-2同源结构域蛋白（Bcl-2homologous domain protein,Beclin1）、微管相关蛋白轻链3（Microtubule-associated protein light chain 3,LC3）以及胞吞相关蛋白小窝蛋白1（Caveolin1,Cav1）、小窝蛋白2（Caveolin2,Cav2）的相对表达量,并结合免疫荧光技术对5种蛋白在细胞的表达定位进行比较分析。结果如下:1)成功体外培养牦牛卵丘细胞,经鉴定,自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3及胞吞相关蛋白Cav1、Cav2在牦牛卵丘细胞均有表达,且主要分布在胞质中。2)经不同浓度EGF处理的牦牛卵丘细胞,自噬基因Atg5表达量较对照组（0 ng/mL）下降,且Atg5蛋白和Atg5-Atg12复合物表达量与EGF浓度负相关,各处理组表达量均显着低于对照组（0 ng/mL）（P<0.05）,自噬基因Beclin1、LC3及蛋白Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达先下降后回升,均在100 ng/mL处达到最低（P<0.05）;Cav1、Cav2 mRNA与蛋白的相对表达均与EGF浓度正相关,在200 ng/mL处最高（P<0.05）。3)抑制EGFR后,LC3 mRNA和蛋白相对表达量均显着增高（P<0.05）,其他自噬基因及蛋白表达无显着变化（P>0.05）;Cav1、Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均显着升高（P<0.05）。4)经不同浓度IGF-1处理的牦牛卵丘细胞,自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3及蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ相对表达量均先下降而后上升,在100 ng/mL处理组均达到最低,与其他处理组差异显着（P<0.05）;Cav1和Cav2 mRNA和蛋白相对表达量均与IGF-1呈浓度依赖,随IGF-1浓度增大,表达量先下降后回升。综上,体外培养牦牛卵丘细胞时添加EGF和IGF-1均可影响自噬及胞吞相关基因和蛋白的表达,且作用效果与EGF和IGF-1浓度相关;两种生长因子均可抑制牦牛卵丘细胞自噬,100 ng/mL为最佳作用浓度;胞吞相关小窝蛋白Cav1、Cav2表达量与EGF和IGF-1浓度呈现一定的正相关关系,两种生长因子均在作用浓度为150 ng/mL时对Cav1、Cav2表达均有很好的促进作用。EGF和IGF-1参与牦牛卵丘细胞自噬及胞吞的生物学功能调控,以上研究结果为进一步研究生长因子参与动物生殖相关细胞自噬与胞吞作用,及其对卵母细胞成熟和胚胎发育的作用机制提供理论依据。
马富龙[10]（2020）在《LHR/PRLR和GH/IGF-1基因在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达与定位》文中研究指明睾丸发育和精子发生在哺乳动物体中是受多基因调控的复杂过程;睾丸发育和精子发生过程是否正常直接关系到精液品质的好坏,而精液品质则直接影响雄性动物的繁殖性能。研究报道促黄体素受体、催乳素受体基因在哺乳动物生殖发育中扮演重要角色,广泛存在于各种组织。但现有研究主要集中在雌性动物的卵巢和子宫等生殖器官上,对雄性动物睾丸中表达的研究少之甚少。而GH和IGF-1基因是动物生长轴上的关键基因,因此,大量研究主要集中在提高动物生长速度和产肉性能上,对繁殖性能的研究相对较少。但LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在雄性动物精子发生和睾丸发育及其功能维持方面具有重要作用,而在青藏高原特有畜种牦牛睾丸不同发育阶段上的研究仍处于空白阶段。因而探究LHR、PRLR、GH和IGF-1基因在牦牛睾丸发育中的调控作用,对揭示公牦牛精子发生和睾丸功能维持的分子调控机制具有重大意义。本研究分别采集幼年期（6月龄）、初情期（24月龄）、性成熟期（36月龄）、成年期（72月龄）牦牛睾丸组织和公牦牛肾脏、肝脏、肺脏、心脏、脾脏、骨骼肌、皮下脂肪等器官组织为试验材料,每个组织分别采集5头。对LHR、PRLR、GH、IGF-1基因采用qRT-PCR技术、Western blot、免疫组织化学技术进行mRNA检测和蛋白定位。主要研究结果如下:1.LHR基因的表达量从幼年期到性成熟期逐渐增加,性成熟期达到表达高峰,成年期略有下降。其中,在性成熟期的表达量极显着高于初情期和幼年期（P<0.01）,跟成年期差异不显着。检测的7个成年牦牛组织中LHR mRNA均有表达,LHR基因在睾丸中表达量最高（P<0.05）,其次为肾脏、骨骼肌,肝脏中表达量最低（P<0.05）。免疫组化结果发现LHR蛋白表达主要定位在间质细胞和生精细胞中表达。2.PRLR基因的表达量从幼年期到成年期逐渐升高。其中,成年期和性成熟期差异不显着,但都极显着高于初情期和幼年期（P<0.01）。PRLR基因在肾脏的表达量最高,显着高于骨骼肌、睾丸和脾脏（P<0.05）,在肝脏中表达最低。在肝脏、肺脏、心脏和脾脏中的表达水平均较低,且差异不显着。免疫组化结果发现PRLR蛋白在幼年期睾丸部分间质细胞中表达,初情期、性成熟期和成年期在睾丸支持细胞、间质细胞、初级精母细胞和次级精母细胞中表达。PRLR蛋白表达量随着月龄先迅速上升,初情期表达量显着高于幼年期（P<0.05）,性成熟期显着高于初情期（P<0.05）,到性成熟期达到稳定的趋势。3.GH基因的表达量在初情期和性成熟期达到表达高峰,成年期略有下降。其中,性成熟期和初情期的表达量极显着高于成年期,成年期又极显着高于幼年期（P<0.01）。GH基因在脾脏相对表达量最高,为2.81,其次是睾丸,两者的表达量差异未达到显着性水平（P>0.05）;GH基因在脾脏、睾丸中的相对表达量显着高于心脏、肝脏、肾脏、皮下脂肪和骨骼肌（P<0.05）;骨骼肌相对表达量最低,心脏略高,二者与肺脏中的表达量也存在显着差异（P<0.05）。Western blot结果显示,GH蛋白在初情期和性成熟期表达量显着高于其他发育期,并且mRNA和蛋白的表达趋势基本相似。免疫组化结果显示:在幼年期,GH蛋白信号存在于部分睾丸间质细胞的细胞质中,在性成熟期和成年期睾丸精母细胞、精原细胞、精子细胞中均有GH的阳性反应。GH阳性反应积分光密度值性成熟期显着高于成年期,成年期显着高于幼年期（P<0.05）。4.IGF-1基因的表达量从幼年期到性成熟期逐渐升高,成年期略有下降。其中,性成熟期表达量极显着高于成年期（P<0.01）,成年期显着高于初情期,初情期显着高于幼年期（P<0.05）。IGF-1 mRNA在已检测的8个组织样中均有表达;在肝脏相对表达量为12.97,表达丰度最高,其次为脾脏、睾丸、皮下脂肪、肺脏、心脏、骨骼肌（P<0.05）,其中心脏和骨骼肌与肾脏差异不显着（P>0.05）。Western blot结果显示,IGF-1蛋白在性成熟期表达量显着高于其他发育期,并且表达量趋势与mRNA基本一致。免疫组化结果显示:在幼年期,IGF-1蛋白信号存在于部分睾丸间质细胞的细胞质中,在性成熟期和成年期睾丸精母细胞、精原细胞、精子细胞中均有IGF-1的阳性反应。IGF-1阳性反应积分光密度值性成熟期显着高于成年期,成年期显着高于幼年期（P<0.05）。
二、影响牦牛繁殖力的因素（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、影响牦牛繁殖力的因素（论文提纲范文）
（2）牦牛StAR基因克隆及其生物信息学与组织表达特性的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物及样品采集 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 RNA提取和cDNA合成 |
| 1.4 StAR基因引物设计合成 |
| 1.5 牦牛StAR基因克隆与测序 |
| 1.6 StAR基因生物信息学分析 |
| 1.7 牦牛StAR基因表达特性分析 |
| 1.8 统计分析 |
| 2 结 果 |
| 2.1 牦牛StAR基因克隆 |
| 2.2 牦牛StAR基因生物信息学分析 |
| 2.2.1 牦牛StAR基因核苷酸序列分析 |
| 2.2.2 StAR基因编码氨基酸序列同源性分析 |
| 2.2.3 牦牛StAR蛋白理化性质分析 |
| 2.2.4 StAR蛋白二、三级结构预测 |
| 2.2.5 蛋白相互作用分析 |
| 2.2.6 牦牛StAR基因系统进化树分析 |
| 2.3 牦牛StAR基因表达差异分析 |
| 2.3.1 牦牛StAR基因在各个组织中的表达差异分析 |
| 2.3.2 StAR基因在卵巢的表达分析 |
| 2.3.3 StAR基因在颗粒细胞中的时序表达分析 |
| 3 讨 论 |
| 4 结 论 |
（3）牦牛同期发情技术研究（论文提纲范文）
| 1 同期发情 |
| 2 牦牛同期发情研究 |
| 3 麦洼牦牛的同期发情研究 |
| 4 九龙牦牛的同期发情研究 |
| 5 大通牦牛的同期发情研究 |
| 6 建议 |
（4）低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 哺乳动物卵母细胞成熟研究进展 |
| 1.1 卵母细胞的发育与成熟过程 |
| 1.2 卵母细胞与外界环境的物质、信息交流途径 |
| 1.3 卵母细胞成熟的分子调控机制 |
| 1.4 影响卵母细胞成熟和发育能力的因素 |
| 2 促进卵母细胞体外成熟和发育能力的措施 |
| 2.1 筛选发育能力较高的卵母细胞 |
| 2.2 增强卵丘细胞-卵母细胞互作 |
| 2.3 优化卵母细胞的培养环境与培养程序 |
| 3 氧分压和ROS对卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 4 牦牛卵母细胞体外成熟研究进展 |
| 5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 不同氧分压对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试验试剂及其配制 |
| 1.3 试验耗材 |
| 1.4 试验仪器 |
| 1.5 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同氧分压对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同氧分压对牦牛卵母细胞ROS水平和GSH含量的影响 |
| 2.3 不同氧分压对牦牛孤雌胚胎发育的影响 |
| 2.4 不同氧分压对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 2.5 不同氧分压对牦牛IVF囊胚基因表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞成熟率的影响 |
| 2.2 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞ROS水平的影响 |
| 2.3 不同抗氧化剂对卵母细胞GSH含量的影响 |
| 2.4 不同抗氧化剂对牦牛卵母细胞线粒体分布的影响 |
| 2.5 不同抗氧化剂对牦牛IVF胚胎发育的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 单细胞测序分析不同氧分压对牦牛卵母细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 基因表达分析 |
| 2.4 差异表达基因GO分析 |
| 2.5 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.6 差异表达基因验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 高通量测序分析不同氧分压对牦牛卵丘细胞转录组的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 卵巢来源 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 试验仪器 |
| 1.4 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 测序数据质量分析 |
| 2.2 比对分析 |
| 2.3 转录本组装与新转录本预测 |
| 2.4 基因表达分析 |
| 2.5 差异表达基因GO分析 |
| 2.6 差异表达基因KEGG分析 |
| 2.7 差异表达基因验证 |
| 2.8 不同氧分压对卵母细胞和卵丘细胞转录组影响的对比分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论、创新与不足 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足之处 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附表1 不同氧分压条件下牦牛卵母细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 附表2 不同氧分压条件下牦牛卵丘细胞DEGs(5% O_2 vs20% O_2) |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（5）HAS2和PTGS2在牦牛卵巢中的定位表达及FGF10对其表达影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词 |
| 主要仪器 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 牦牛简介 |
| 2 雌性动物生殖周期 |
| 2.1 卵泡期 |
| 2.2 黄体期 |
| 2.3 妊娠期 |
| 3 颗粒细胞在雌性动物生殖中作用 |
| 3.1 卵泡发育及卵泡闭锁 |
| 3.2 卵丘扩展 |
| 3.3 颗粒细胞对卵母细胞的作用 |
| 4 FGF家族简介 |
| 5 HAS2和PTGS2 简介 |
| 6 研究目的与意义 |
| 第二部分 研究内容 |
| 第一章 HAS2和PTGS2 在牦牛不同时期卵巢中定位表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 总RNA提取和引物设计及特异性检验 |
| 1.4 HAS2和PTGS2的m RNA表达水平的检测 |
| 1.5 HAS2和PTGS2 蛋白表达水平检测 |
| 1.6 HAS2和PTGS2 蛋白在不同时期卵巢分布的检测 |
| 1.7 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 总RNA的质量与引物特异性的检测 |
| 2.2 牦牛不同时期卵巢中HAS2和PTGS2 基因m RNA的表达情况 |
| 2.3 牦牛不同时期卵巢中HAS2和PTGS2 蛋白的表达情况 |
| 2.4 牦牛不同时期卵巢中HAS2和PTGS2 蛋白的分布情况 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 FGF10 对牦牛HAS2和PTGS2 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 生长曲线测定 |
| 2.2 总RNA的质量与引物特异性的检测 |
| 2.3 FGF10 对牦牛颗粒细胞HAS2和PTGS2 基因表达的影响 |
| 2.4 FGF10 对牦牛颗粒细胞HAS2和PTGS2 蛋白表达的影响 |
| 2.5 牦牛颗粒细胞中LHR、FSHR、HAS2和PTGS2 蛋白的分布 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 在读期间发表论文和研究成果等 |
（6）不同季节牦牛卵泡发育的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验样品 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 试验结果 |
| 2.1 褪黑素的测定 |
| 2.2 卵巢重及各级卵泡数量统计 |
| 2.3 HE染色结果 |
| 3 结论 |
（7）冷季补饲后牦牛卵巢miRNA和血清差异蛋白的筛选与鉴定（论文提纲范文）
| 缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Summary |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 牦牛补饲研究现状 |
| 1.2 家畜繁殖调节机制研究进展 |
| 1.2.1 性腺轴生理功能的调控 |
| 1.2.2 卵巢生理功能的调控 |
| 1.2.3 卵巢局部因子的调节 |
| 1.3 营养对家畜繁殖性能的影响 |
| 1.3.1 能量对繁殖性能的影响 |
| 1.3.2 蛋白质对繁殖性能的影响 |
| 1.3.3 微量元素对繁殖性能的影响 |
| 1.4 牦牛季节性发情概述 |
| 1.5 miRNA的生物功能及研究进展 |
| 1.5.1 miRNA在真核生物中的生物合成过程 |
| 1.5.2 miRNA的作用机制 |
| 1.5.3 miRNA在肌肉中的作用研究 |
| 1.5.4 miRNA在脂肪中的作用研究 |
| 1.5.5 miRNA在垂体中的作用研究 |
| 1.5.6 miRNA对睾丸和精子发生的作用研究 |
| 1.5.7 miRNA对卵巢和卵母细胞的作用研究 |
| 1.6 蛋白质组学的研究进展及其在畜禽上的应用 |
| 1.6.1 蛋白质组学研究技术 |
| 1.6.2 蛋白质组学在畜禽上的应用 |
| 1.6.3 iTRAQ技术在血清蛋白组学上的应用 |
| 1.7 研究的目的与意义 |
| 第二章 冷季补饲对牦牛生长性状、血清生化指标和繁殖激素的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 试验动物的饲养管理 |
| 2.1.3 试验样品的采集 |
| 2.2 指标测定及方法 |
| 2.2.1 饲粮营养水平的测定 |
| 2.2.2 生长性状的测定 |
| 2.2.3 血清生化指标的测定 |
| 2.2.4 血清繁殖激素浓度的测定 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 冷季补充饲料对牦牛生长性状的影响 |
| 2.3.2 冷季补充饲料对牦牛血清生化指标的影响 |
| 2.3.3 冷季补充饲料对牦牛血清繁殖激素的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 牦牛卵巢组织差异表达miRNA的鉴定 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要仪器设备 |
| 3.1.3 主要试验试剂 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 试验动物的饲养管理 |
| 3.2.2 试验样品的采集 |
| 3.2.3 总RNA的提取及质量检测 |
| 3.2.4 文库的检测及高通量测序 |
| 3.2.5 miRNA生物信息学分析 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR检测miRNA的表达 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 总RNA样品检测结果 |
| 3.3.2 测序数据及其质量控制 |
| 3.3.3 小RNA的长度分布 |
| 3.3.4 小RNA序列的分类注释 |
| 3.3.5 miRNA碱基偏好性分布 |
| 3.3.6 miRNA差异表达分析 |
| 3.3.7 实时荧光定量对miRNA表达的验证 |
| 3.3.8 miRNA靶基因预测 |
| 3.3.9 差异表达miRNA靶基因GO注释和KEGG通路分析 |
| 3.3.10 潜在与繁殖相关miRNA和靶基因的筛选 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 bta-miR-200b、bta-miR-223 靶基因的初步鉴定 |
| 4.1 试验材料与方法 |
| 4.1.1 主要实验仪器 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 miRNA的靶基因预测 |
| 4.2.2 靶序列野生型p GL3-Promoter载体构建 |
| 4.2.3 突变型p GL3-Promoter载体构建 |
| 4.2.4 293T细胞的培养 |
| 4.2.5 293T细胞转染 |
| 4.2.6 双荧光素酶报告基因检测 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 bta-miR-200b、bta-miR-223 的靶基因预测 |
| 4.3.2 野生型pGL3-Promoter载体构建 |
| 4.3.3 突变型pGL3-Promoter载体构建与鉴定 |
| 4.3.4 不同靶序列与miRNA作用验证结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 营养诱导牦牛季节性发情血清差异蛋白的鉴定 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 试验动物 |
| 5.1.2 主要仪器设备 |
| 5.1.3 主要试验试剂 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 试验动物的饲养管理 |
| 5.2.2 牦牛的发情鉴定 |
| 5.2.3 试验样品的采集 |
| 5.2.4 iTRAQ蛋白组学技术方法 |
| 5.2.5 生物信息学分析 |
| 5.2.6 平行反应监测(PRM)技术方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 蛋白的提取 |
| 5.3.2 蛋白的质控 |
| 5.3.3 差异蛋白的表达分析 |
| 5.3.4 差异蛋白GO功能注释 |
| 5.3.5 差异蛋白KEGG功能注释 |
| 5.3.6 差异蛋白的验证 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第6 章 结论 |
| 创新点与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 论文发表情况 |
| 导师简介 |
（8）围产期牦牛酮体对繁殖性能影响的研究进展（论文提纲范文）
| 1 酮体 |
| 1.1 酮体概念、代谢与调控 |
| 1.2 酮体的研究进展 |
| 2 营养状况对繁殖性能的研究 |
| 2.1 营养状况对繁殖性能的影响 |
| 2.2 酮体对繁殖性能的影响 |
| 3 小结 |
（9）EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 缩略词 |
| 主要仪器 |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 卵丘细胞在雌性哺乳动物早期生殖事件中的作用 |
| 1.1 卵泡发生发育及卵泡闭锁 |
| 1.2 卵丘细胞的发生及分化 |
| 1.3 卵丘细胞对卵母细胞发育及成熟的影响 |
| 1.4 卵丘细胞在卵母细胞受精和早期胚胎发育中的作用 |
| 1.5 牦牛卵丘细胞的研究意义 |
| 2 细胞自噬的研究进展 |
| 2.1 细胞自噬概念及相关信号通路 |
| 2.2 细胞自噬与哺乳动物生殖的关系 |
| 3 小窝蛋白介导的胞吞研究进展 |
| 3.1 小窝蛋白和胞吞简介 |
| 3.1.1 胞吞的结构基础——小窝 |
| 3.1.2 胞吞的功能使者——小窝蛋白 |
| 3.2 小窝蛋白在哺乳动物生殖中的相关研究 |
| 3.3 胞吞与自噬的联系 |
| 4 EGF和 IGF-1 的研究进展 |
| 4.1 EGF简介及相关研究进展 |
| 4.2 IGF-1简介及相关研究进展 |
| 5 本研究的目的及意义 |
| 第二部分 试验研究 |
| 实验一 自噬及胞吞相关蛋白表达在牦牛卵丘细胞中的表达定位 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 牦牛卵巢样品的采集 |
| 1.1.2 主要试剂及配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 牦牛卵丘细胞的分离培养及冻存 |
| 1.2.2 间接免疫荧光检测自噬及胞吞相关蛋白在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 牦牛卵丘细胞培养 |
| 2.2 自噬相关蛋白Atg5、Beclin1、LC3 在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 2.3 胞吞相关蛋白Cav1、Cav2 在牦牛卵丘细胞中的分布 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验二 EGF 对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 PCR检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关基因mRNA的表达 |
| 1.3 Western-blot检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白的表达 |
| 1.4 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 普通PCR验证引物及模板 |
| 2.2 EGF对牦牛卵丘细胞自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.3 EGF对牦牛卵丘细胞胞吞相关基因Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 2.4 EGF对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.5 EGF对牦牛卵丘细胞胞吞相关蛋白Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 实验三 IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 PCR检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关基因mRNA的表达 |
| 1.3 Western-blot检测牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白的表达 |
| 1.4 数据统计分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 普通PCR验证引物及模板 |
| 2.2 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关基因Atg5、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.3 IGF-1 对牦牛卵丘细胞胞吞相关基因Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 2.4 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Atg5、Atg5-Atg12、Beclin1、LC3 表达的影响 |
| 2.5 IGF-1 对牦牛卵丘细胞自噬相关蛋白Cav1、Cav2 表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者介绍 |
（10）LHR/PRLR和GH/IGF-1基因在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达与定位（论文提纲范文）
| 项目基金来源 |
| 摘要 |
| Summary |
| 缩略词中英文对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 睾丸的组织结构和精子发生 |
| 1.1 睾丸的组织结构 |
| 1.2 精子发生过程 |
| 2 相关基因的国内外研究进展 |
| 2.1 LHR的结构与研究进展 |
| 2.2 PRLR的结构与研究进展 |
| 2.3 GH的结构与研究进展 |
| 2.4 IGF-1 的结构与研究进展 |
| 3 研究的目的与意义 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 LHR、PRLR基因在牦牛不同发育时期睾丸中的表达与定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 组织样采集 |
| 1.3.2 总RNA的提取 |
| 1.3.3 第一链c DNA合成 |
| 1.3.4 引物设计及合成 |
| 1.3.5 常规逆转录PCR(reversetranscriptionpoly-merasechain reaction,RT-PCR)检测 |
| 1.3.6 实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR) |
| 1.3.7 睾丸组织石蜡切片的制备 |
| 1.3.8 免疫组织化学染色 |
| 1.3.9 数据统计与结果分析 |
| 1.4 主要生物学数据库和生物学软件 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 睾丸和不同器官组织总RNA的提取 |
| 2.2 LHR和 PRLR基因的PCR扩增 |
| 2.3 内参基因、目的基因扩增产物特异性分析 |
| 2.4 LHR、PRLR基因在牦牛不同发育时期睾丸组织的差异表达 |
| 2.5 LHR、PRLR基因在牦牛不同器官中的表达差异 |
| 2.6 LHR和 PRLR蛋白在不同发育时期的免疫组化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 LHR、PRLR基因在不同发育时期牦牛睾丸组织的表达差异 |
| 3.2 LHR、PRLR基因在成年期牦牛不同器官组织中的表达差异 |
| 3.3 LHR、PRLR蛋白在不同发育期牦牛睾丸组织中的定位 |
| 试验二 GH、IGF-1 基因在不同发育时期牦牛睾丸中的表达与定位 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.3 试验方法 |
| 1.3.1 组织样采集 |
| 1.3.2 总RNA的提取 |
| 1.3.3 第一链c DNA合成 |
| 1.3.4 引物设计及合成 |
| 1.3.5 常规RT-PCR检测 |
| 1.3.6 半定量PCR |
| 1.3.7 qRT-PCR |
| 1.3.8 总蛋白提取与变性 |
| 1.3.9 Western blot |
| 1.3.10 免疫组织化学染色 |
| 1.3.11 数据统计与结果分析 |
| 1.4 主要生物学数据库和生物学软件 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 GH、IGF-1 基因的PCR扩增 |
| 2.2 GH、IGF-1 基因在牦牛睾丸组织和不同器官组织中半定量PCR分析 |
| 2.3 实时荧光定量PCR扩增产物特异性分析 |
| 2.4 GH、IGF-1 基因在牦牛不同发育时期睾丸组织的差异表达 |
| 2.5 GH、IGF-1 基因在牦牛不同器官中的表达差异 |
| 2.6 GH、IGF-1 蛋白在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达 |
| 2.7 GH、IGF-1 蛋白在不同发育时期牦牛睾丸中的免疫组化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 GH、IGF-1 基因在不同发育时期牦牛睾丸组织的表达差异 |
| 3.2 GH、IGF-1 基因在性成熟期牦牛不同器官组织中的表达差异 |
| 3.3 GH、IGF-1 蛋白在不同发育期牦牛睾丸组织中的定位 |
| 第三章 结论 |
| 本研究的创新点 |
| 本研究的不足之处 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
四、影响牦牛繁殖力的因素（论文参考文献）
- [1]提高天祝白牦牛繁殖力的措施[J]. 陈虹,廖博,樊江峰. 甘肃畜牧兽医, 2021(09)
- [2]牦牛StAR基因克隆及其生物信息学与组织表达特性的研究[J]. 刘宇,邬建飞,李恒,荆天,卢建远,字向东. 畜牧兽医学报, 2021(09)
- [3]牦牛同期发情技术研究[J]. 周凡莉,刘晓霞,何小强,李小伟,王燕文,谭雄,杨壮,罗光荣. 农业与技术, 2021(13)
- [4]低氧对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响及其作用机制[D]. 李瑞哲. 甘肃农业大学, 2021
- [5]HAS2和PTGS2在牦牛卵巢中的定位表达及FGF10对其表达影响[D]. 高泽川. 甘肃农业大学, 2021
- [6]不同季节牦牛卵泡发育的研究[J]. 杨启林,徐尚荣,彭巍,张君. 青海畜牧兽医杂志, 2020(06)
- [7]冷季补饲后牦牛卵巢miRNA和血清差异蛋白的筛选与鉴定[D]. 谢建鹏. 甘肃农业大学, 2020
- [8]围产期牦牛酮体对繁殖性能影响的研究进展[J]. 马晓玲,黄荣,舒适,张君. 青海畜牧兽医杂志, 2020(05)
- [9]EGF与IGF-1对牦牛卵丘细胞自噬及胞吞相关蛋白表达的影响[D]. 马睿. 甘肃农业大学, 2020
- [10]LHR/PRLR和GH/IGF-1基因在不同发育阶段牦牛睾丸中的表达与定位[D]. 马富龙. 西北民族大学, 2020(08)