一、中药PT液对衰老小鼠体内一氧化氮和血管紧张素Ⅱ（论文文献综述）
高焕佳[1]（2021）在《丹参酮ⅡA对DOCA-salt高血压大鼠的保护作用及其机制研究》文中研究指明目的:通过复制DOCA-salt高血压大鼠模型,研究丹参酮ⅡA对DOCA-salt高血压大鼠的平均动脉压的影响,研究丹参酮ⅡA对于DOCA-salt高血压大鼠心脏和肾脏炎症反应及氧化应激的作用,为丹参酮ⅡA治疗盐敏感性高血压提供一定的科学依据。方法:（1）中枢给予TNF-α对SD及Dahl大鼠PVN炎症介质表达的影响实验采用成年雄性SD大鼠,体重250g-280g,及周龄相同的Dahl大鼠,大鼠分为两组,予以侧脑室注射250ng TNF-α,对照组注射2.5μL的生理盐水,注射完成3h后处死大鼠,分别用于冰冻切片染色和real-time PCR检测,real-time PCR 检测 PVN 区 IL-6,IL-1β;CCL5、CCL12;iNOS;NF-κB1 的 mRNA 水平。进行免疫荧光染色检测PVN区IL-1β,CCL5,iNOS及NF-κB1的表达情况。（2）丹参酮ⅡA对大鼠原代神经细胞的保护作用培养SD大鼠的原代神经细胞,20ng/ml的TNF-α处理原代神经细胞,进行了不同时间（3h、6h、24h）的时间依赖研究;不同剂量（0.2ng/ml,2ng/ml,20ng/ml）的TNF-α处理6h的剂量依赖研究,检测IL-6、IL-1β、CCL5、CCL12、iNOS、P65 的 mRNA 水平。培养Dah1大鼠的原代神经细胞,使用20ng/mL的TNF-α处理6h,对比Dahl大鼠与SD大鼠的对照组基线水平及TNF-α处理6h后炎症介质基因的表达差异。分别使用不同浓度的丹参酮ⅡA（10uM、20uM、50uM）预处理Dah1大鼠原代神经细胞30min,而后用20ng/ml TNF-α处理,进行了 real time PCR检测,检测IL-6、IL-1β、CCL5、CCL12、iNOS、P65 及 NADPH 氧化酶亚基（Cyba、Cybb）的mRNA水平。使用50uM丹参酮ⅡA预处理SD大鼠原代神经细胞30min,而后用20ng/ml TNF-α处理,固定细胞进行免疫荧光染色检测IL-1β、CCL5、iNOS、pp65的蛋白表达水平。（3）丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对DOCA-salt高血压大鼠的保护作用将30只8周龄的SD大鼠随机分为5组,分别为:对照组、模型组、丹参酮ⅡA磺酸钠注射液低剂量组（10mg/kg.d）、丹参酮ⅡA磺酸钠注射液中剂量组（15mg/kg.d）、丹参酮ⅡA磺酸钠注射液高剂量组（25mg/kg.d）,每组各6只。除对照组外,其他大鼠皮下植入DOCA片剂,同日予以1%NaCl+0.2%KCL饮水。对照组及模型组每日给予等体积生理盐水腹腔注射,丹参酮ⅡA磺酸钠注射液低、中、高剂量组每日进行腹腔注射给药。采用智能无创尾动脉血压计测量血压,每周两次。每周测量1次体重。共连续处理21天。第22天使用10%水合氯醛腹腔麻醉,每组1只4%多聚甲醛灌流固定取大鼠肾脏用于HE染色观察大鼠肾脏形态,其余的各组大鼠麻醉后首先称体重,取出大鼠两侧肾脏及心脏,并迅速进行称重,得到肾脏质量与体质量比值、心脏质量与体质量比值;分别对心脏左心室和肾脏进行real-time PCR 检测 IL-6、IL-1β、CCL5、CCL12、p65、TNF-α及 NADPH 氧化酶亚基cyba,cybb的mRNA的表达水平。结果:1.TNF-α中枢给药增加成年SD及Dahl大鼠PVN区炎症介质的mRNA水平,并且Dahl大鼠的炎症反应更为显着TNF-α中枢给药,SD 大鼠和 Dahl-S 大鼠的 CCL5、CCL12、IL-1β、IL-6、iNOS和NF-κB1的表达均显着升高（P<0.05）。与SD大鼠相比,Dahl-S大鼠中CCL12的增加更加显着（Dahl:115倍SD:24倍P<0.05）。与SD大鼠相比,Dahl-S中IL-1β的增加也更高,但没有达到统计学意义（P=0.087）,其他的基因未见显着差异。2.TNF-α处理引发SD及Dahl大鼠原代神经细胞炎症介质基因水平的剂量依赖性和时间依赖性增加,并且在Dahl大鼠原代神经细胞炎症反应更为显着。不同浓度（0.2ng/mL,2ng/mL,20ng/mL）处理 6h 及不同时间（3h,6h,24h）20ng/mL TNF-α处理明显增加 SD 大鼠 IL-1β、IL-6、CCL5、CCL12、iNOS 和 NF-κB1的mRNA水平;TNF-α（20ng/ml）处理6h对比SD及Dahl大鼠的炎症介质基因显示两者的IL-1β、CCL5、iNOS、NF-κB1的基线水平差异即存在统计学意义,6h处理后IL-1β、CCL5、iNOS仍存在统计学差异;TNF-α（20ng/ml）孵育6小时,固定细胞并进行免疫荧光染色,结果表明TNF-α处理显着增加IL-1β、CCL5和iNOS的免疫反应性并促进p65的活化。3.TanⅡA处理大鼠原代神经细胞可以降低由TNF-α处理引发的炎症反应及氧化应激水平。TanⅡA可以降低大鼠原代神经元细胞由TNF-α诱导的炎症反应和氧化应激水平。不同浓度的TanⅡA（10uM、20uM、50uM）预处理可以抑制TNF-α处理引起的p65活化,下调IL-1β、IL-6、CCL5、CCL12,iNOS等炎症介质及NADPH氧化酶亚基（Cyba、Cybb）的mRNA表达。免疫荧光结果表明TanⅡA可以一定程度减弱由TNF-α处理引发的IL-1β、CCL5和iNOS的免疫反应性的增强并抑制p65的活化。4.丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可以降低DOCA-salt高血压大鼠的平均动脉压,并减轻心脏及肾脏的炎症反应和氧化应激水平。模型组大鼠血压明显升高,各剂量TanⅡA磺酸钠注射液组均可一定程度上降低平均动脉压。治疗组大鼠与模型组相比心脏质量与体质量比值及肾脏质量与体质量比值降低,表明丹参酮ⅡA磺酸钠注射液可以减轻DOCA-salt大鼠左心室及肾脏的扩张,并且降低心脏左心室及肾脏IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL5、CCL12炎症介质的mRNA水平,降低P65的mRNA水平,及NADPH氧化酶亚基Cyba、Cybb的mRNA水平,说明丹参酮ⅡA磺酸钠可以抑制DOCA-salt高血压大鼠心脏左心室及肾脏的炎症反应及氧化应激水平。肾脏HE染色及离体照片显示治疗组较模型组的肾脏病理形态学改变减轻。结论:1.中枢给予TNF-α可以同时激发SD大鼠和Dah1大鼠PVN内炎症反应,且在Dahl盐敏感性高血压大鼠PVN炎症反应更加显着。2.TNF-α激发SD大鼠和Dah1大鼠原代神经细胞的炎症反应和氧化应激,并且在Dahl大鼠原代神经细胞内炎症反应更加显着,TanⅡA预处理可以抑制由TNF-α诱发的p65的活化,抑制IL-1β、IL-6、CCL5、CCL12、iNOS等炎症介质和Cyba、Cybb的表达,从而抑制炎症反应,并可以抑制氧化应激水平。3.TanⅡA磺酸钠注射液可以降低DOCA-salt高血压大鼠的平均动脉压,抑制DOCA-salt高血压大鼠左心室及肾脏p65的表达,抑制IL-1β、IL-6、TNF-α、CCL5、CCL12等炎症介质及Cyba、Cybb的表达,对DOCA-salt高血压大鼠起到保护作用。
张海泉[2]（2021）在《解毒活血方促进PCI术后冠状动脉血管内皮细胞损伤修复的机制研究》文中指出研究目的通过体外细胞培养观察解毒活血方对血管内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）的增殖和凋亡过程的影响,模拟解毒活血方对经皮冠状动脉介入术（percutaneous coronary intervention,PCI）后患者血管内皮祖细胞增殖、活力和凋亡机制的影响,探究解毒活血中药在防治PCI术后再狭窄（in stent restenosis,ISR）方面相关作用机制,为临床防治再狭窄提供理论基础。研究方法:本实验研究通过利用血管紧张素Ⅱ-1型受体自身抗体（AngiotensinⅡ-type 1Receptor Autoantibodies,AT1-AA）诱导血管内皮祖细胞产生细胞损伤,形成PCI术后内皮损伤细胞模型。1.不同浓度的AT1-AA、解毒活血方、辛伐他汀处理细胞后用MTT法检测细胞的活力,确定药物的最佳剂量。2.根据上一步结果,将实验分组为空白组、AT1-AA组、解毒活血方组、辛伐他汀组。3.分别用解毒活血方、辛伐他汀最佳剂量对细胞进行预先处理4h后再和AT1-AA对细胞进行复合处理12h,然后用MTT法检测细胞增殖及生存活力。4.进行流式细胞术确定EPCs凋亡率。4.荧光探针检测EPCs内活性氧（reactive oxygen species,ROS）情况,分析空白组、AT1-AA组、解毒活血方组、辛伐他汀组内皮祖细胞氧化情况。5.用western blot检测解毒活血方对Bcl-2、PERK、CHOP、Caspase-3蛋白表达的影响,探究解毒活血方能否通过调节细胞内质网的应激反应,抑制细胞凋亡机制的发生。研究结果:1.AT1-AA组细胞增殖活性与空白组对比明显减低（P<0.01）。与空白组相比,AT1-AA组可使EPCs生存活力明显减低,辛伐他汀组、解毒活血方组与AT1-AA组相比,二组均可使内皮祖细胞生存活力显着上升（P<0.01）;2.AT1-AA组细胞凋亡率与空白组对比具有显着性差异（P<0.01）。与空白组对比,AT1-AA组细胞凋亡率明显上升,辛伐他汀与解毒活血方单独处理内皮祖细胞后,结果显示二者对内皮祖细胞凋亡率影响无明显差异（P>0.05）,用辛伐他汀及解毒活血方最佳剂量分别对内皮祖细胞进行预先处理4h后,继续用AT1-AA对其进行复合处理12h,与AT1-AA组相比细胞凋亡率显着减低（P<0.01）;3.AT1-AA组细胞内ROS浓度与空白组对比具有显着性差异（P<0.01）。与空白组对比,AT1-AA组细胞内活性氧浓度明显升高,（P<0.01）,以解毒活血方、辛伐他汀最佳剂量分别对内皮祖细胞进行预先处理4h之后继以AT1-AA对其进行处理12h,结果显示细胞内活性氧浓度相对于AT1-AA组显着降低（P<0.01）。4.AT1-AA组较空白组PERK、CHOP、Caspase-3蛋白表达上调,较空白组Bcl-2蛋白表达下调,解毒活血方组和辛伐他汀组都可使PERK、CHOP、Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调。研究结论:1.AT1-AA使EPCs的活力降低,解毒活血方可拮抗此作用;2.AT1-AA可诱导EPCs的凋亡过程,解毒活血方可抑制其诱导凋亡的作用,效果稍弱于辛伐他汀片;3.AT1-AA使EPCs内活性氧水平上升,解毒活血方可抑制其作用;4.解毒活血方可下调细胞PERK、CHOP、Caspase-3蛋白表达,上调Bcl-2蛋白表达,抑制内皮祖细胞的凋亡。
孙敬辉[3]（2021）在《miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究》文中研究说明心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是众多心血管疾病发展至后期常见的病理改变,常常引起心肌收缩和舒张功能障碍,是心室重构不断进展和不可逆的主要原因。MF的发病机制十分复杂,涉及到神经体液、生长因子、促炎性细胞因子和基因转录之间复杂的相互作用。心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）是MF最主要的效应细胞,可在缺血、炎性因子等促纤维化因素的刺激下分化为肌成纤维细胞。激活的肌成纤维细胞会分泌大量的细胞外基质蛋白,导致心室硬度增加,顺应性降低和心肌电信号传导异常,诱发难治性心力衰竭、恶性心律失常,严重影响心血管疾病的预后。目前MF的治疗尚缺乏特效药物,因此探寻MF发病机制的关键因子及安全可靠的治疗药物,对于MF的治疗刻不容缓。MircoRNAs（miRNAs）是一类在真核细胞中广泛表达的短链非编码RNA。它们可以直接与靶基因的3’UTR区域结合,诱导靶基因mRNAs分解或阻碍其翻译,从而调节多种生理功能和病理过程。miR-489在心肌细胞和CFs中广泛表达。在心肌细胞中miR-489过表达能够下调下游髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88,myd88）的水平,减轻血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌肥厚。重要的是,miR-489转基因小鼠体内AngⅡ诱导的MF明显减轻,说明miR-489能够抑制AngⅡ诱导的MF,miR-489可能是治疗MF的一个潜在靶点。然而,miR-489在MF中的调控机制尚不清楚,尤其是在心肌梗死诱导的MF中miR-489是否也具有同样作用值得进一步研究。中医学中没有MF的直接论述,但MF是众多心血管疾病发展至后期的病理改变,是一种相对慢性渐进性病变。中医传统理论认为“久病多虚”、“久病多瘀”,因此治疗当以补气活血为法。人参是传统医学中补气的要药,具有补益元气,健脾补肺,安神益智等功效,以及抗心肌缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化和抗纤维化等药理作用。人参皂苷Re是人参的主要活性成分之一,课题组前期研究发现,人参皂苷Re具有抗心肌梗死后MF的作用,并且可以调控Smad2/3的表达。既往研究证实,Smad3是miR-489的直接下游靶点,那么人参皂苷Re是否可以通过调节miR-489来发挥抗MF的作用,值得进行深入研究。本研究通过体外构建miR-489过表达和抑制的CFs模型,证实miR-489对MF和myd88/核因子κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路具有调控作用。在此基础上,以人参皂苷Re为干预手段,通过结扎左冠状动脉前降支构建心肌梗死小鼠模型和AngⅡ干预的乳鼠原代CFs模型,观察人参皂苷Re的抗MF作用,并探讨人参皂苷Re对miR-489及其下游myd88/NF-κB通路的调控作用,为中医药抗MF,改善心血管疾病患者的预后提供科学依据。研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究目的:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic和inhibitor观察miR-489模拟物和抑制物对CFs表型分化、迁移和分泌等细胞生物学行为的影响,并探讨其作用机制。方法:提取乳鼠原代CFs,经波形蛋白免疫荧光鉴定纯度后,按照如下分组:（1）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs分为3组:正常组（Normal）、miR-489过表达组（mimic）、miR-489阴性对照组（mimic-NC）。（2）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 mimic,构建miR-489过表达模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 过表达组（AngⅡ+mimic）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+mimic-NC）。（3）在正常培养条件下的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:正常组（Normal）、miR-489 抑制组（inhibitor）、miR-489阴性对照组（inhibitor-NC）。（4）在AngⅡ干预的CFs中转染miR-489 inhibitor,构建miR-489抑制模型。CFs 分为 3 组:AngⅡ组（AngⅡ）、AngⅡ+miR-489 抑制组（AngⅡ+inhibitor）、AngⅡ+miR-489 阴性对照组（AngⅡ+inhibitor-NC）。采用qPCR技术检测miR-489 mimic转染的CFs中miR-489的表达水平,验证转染效果。采用Western blot技术检测各组中α-SMA的表达情况,观察CFs的分化情况;检测Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ蛋白表达,观察CFs胶原蛋白的分泌情况;检测CFs中myd88、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况,观察miR-489的调控作用。结果:（1）经波形蛋白免疫荧光检测证实提取的CFs纯度在95%以上,符合实验要求。（2）与Normal组和mimic-NC组比较,mimic组miR-489的表达水平显着升高（P<0.01）,Normal组和mimic-NC组之间无显着性差异（P>0.05）,说明 miR-489 mimic 转染成功。与 Normal 组和 inhibitor-NC 组相比,inhibitor 组myd88表达显着上调（P<0.01）,Normal组和inhibitor-NC组之间无统计学差异（P>0.05）,说明miR-489 inhibitor转染成功。（3）在正常条件下培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中,miR-489过表达均能够显着抑制myd88、α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ的表达,降低p-NF-κB p65/p65的比值;抑制miR-489能够促进myd88、α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的表达,上调 p-NF-κBp65/p65 的比值。结论:在正常培养的CFs和AngⅡ干预的CFs中miR-489过表达均能够抑制下游myd88/NF-κB通路的活化,减轻CFs的纤维化反应;抑制miR-489能够激活下游myd88/NF-κB信号通路,促进CFs的纤维化反应。这表明在生理和病理情况下CFs中miR-489均可调节myd88/NF-κB信号通路,改善心肌纤维化反应。研究二人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究目的:观察人参皂苷Re对急性心肌梗死后小鼠心功能、血清学标志物、组织病理学改变和相关基因蛋白表达的影响,探讨人参皂苷Re改善梗死后MF的分子机制。方法:通过结扎左冠状动脉前降支构建C57BL/6小鼠心肌梗死后MF模型。小鼠被随机分为4组:假手术组（Sham）、模型组（Model）、低剂量人参皂苷Re组（L,19.5mg/kg/d）和高剂量人参皂苷Re组（H,39mg/kg/d）,每组10只。术后第二天开始灌胃给药,1次/天,连续灌胃四周。心脏超声检测各组小鼠左室射血分数（LVEF）和左室短轴缩短率（LVFS）,观察心功能情况;通过心重指数（HWI）、心胫比（HW/TL）以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达,观察心梗后心肌代偿性肥厚情况;通过ELISA方法检测血清中心肌损伤（CK-MB）、心力衰竭（BNP）、肝肾功能（ALT、S-Cr）和 RAAS（AngⅡ）等标记物的含量;通过HE和Masson染色,观察心梗后心肌组织及纤维化的病变情况;Western blot 检测 myd88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等相关蛋白表达;qPCR技术检测miR-489和myd88的表达形况。结果:（1）与Sham组相比,Model组LVEF和LVFS显着减低（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组LVEF和LVFS明显升高（P<0.01）。（2）与Sham组比较,Model组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着升高（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组CK-MB、BNP和AngⅡ水平显着下降（P<0.05）,ALT 和 S-Cr 无明显变化（P>0.05）。（3）与 Sham 组比较,Model组HWI、HW/TL以及心肌中ANP、BNP和β-MHC mRNA的表达显着升高（P<0.01）,给以低高剂量人参皂苷Re干预后,这些指标明显下降（P<0.05）。（4）与Sham组比较,Model组心肌结构排列紊乱,肌丝较粗,呈波状变化,伴有大量炎症细胞浸润和胶原蛋白沉积。给予人参皂苷Re干预后组织病理改变明显减轻。（5）与 Sham 组比较,Model 组 myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和CollagenⅢ的表达明显升高,miR-489的表达显着下调（P<0.01）;与Model组比较,低高剂量人参皂苷Re组myd88、p-NF-κB p65、α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达明显降低,miR-489的表达显着上调（P<0.05）。以上检测中低高剂量人参皂苷Re组之间无统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够改善心肌梗死后小鼠的心脏功能,抑制心肌代偿性肥厚,减轻心肌缺血损伤和胶原蛋白沉积,改善组织病理学病变,且未发现明显肝肾毒性。其机制可能与调节心肌梗死后小鼠心肌中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究目的:采用AngⅡ诱导C57BL/6乳鼠原代CFs,观察人参皂苷Re对CFs分化、迁移和分泌等生物学行为的影响,并探讨其相关机制。方法:提取乳鼠原代CFs后,通过CCK-8法筛选人参皂苷Re的安全浓度范围。CFs被随机分为5组:正常组（Normal）、模型组（Model）和人参皂苷Re低、中、高剂量组。给以相应药物处理后,收集细胞进行相关检测。采用Transwell实验和划痕实验检测各组CFs的迁移情况;采用免疫荧光和Western blot技术检测α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的表达情况,观察CFs分化为肌成纤维细胞和胶原蛋白的分泌情况;通过qPCR技术和Western blot技术检测miR-489、myd88、NF-κB p65 和 p-NF-κBp65 的表达情况。结果:（1）经 CCK-8 法选定 50μmol/L、100μmol/L 和 200μmol/L 为人参皂苷Re的干预浓度。（2）与Normal组比较,Model组穿过Transwell小室的CFs数量显着增多,迁移距离明显增长（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能减少穿过Transwell小室的CFs数量,缩短迁移距离（P<0.01）。（3）与 Normal 组比较,Model 组α-SMA、Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量均明显升高（P<0.01）;与Model组相比,低中高剂量人参皂苷Re均能降低α-SMA、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ的荧光强度和蛋白表达量（P<0.01）。（4）与Normal组比较,Model组miR-489水平显着降低,myd88的表达和p-NF-κB p65/p65比值显着升高（P<0.01）,低中高剂量人参皂苷Re均能抑制这种趋势（P<0.05）。以上检测中低中高剂量人参皂苷Re组之间未发现统计学差异（P>0.05）。结论:人参皂苷Re能够抑制AngⅡ诱导的CFs迁移、表型分化和分泌等生物学行为的改变;其机制可能与调节AngⅡ诱导的CFs中miR-489/myd88/NF-κB信号通路有关。
汪杰[4]（2020）在《基于网络药理学的“瓜蒌薤白半夏汤”治疗冠心病的作用机制研究》文中研究说明目的筛选瓜蒌薤白半夏汤中治疗冠心病的主要活性成分,预测其活性成分的作用靶点,建立药物-成分-靶点-疾病网络,探讨瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的作用机制。方法在TCMSP数据库中筛选出药物的活性成分和靶点。利Uniprot数据库筛除药物的非人类靶点并校正为官方名称。通过TTD数据、Gene Cards数据库、Dis Ge NET数据库获取瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的潜在靶点。利用Cytoscape构建瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的化合物-靶点-疾病网络。使用Cytoscape软件的Cyto NCA插件对网络进行拓扑学分析,筛选出瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的核心活性成分。在String数据库获取交集靶点蛋白的高置信度交互作用关系,在Cytoscape软件中构建交集靶点蛋白的相互作用网络。使用Cyto NCA插件对网络进行拓扑学分析,筛选出瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的核心靶点。从PDB数据库获取靶点蛋白的结构,利用Autodock软件进行分子对接模拟验证,并将结果可视化。利用David数据库对潜在作用靶点进行GO功能、KEGG通路Up＿Tissue组织分布的富集分析,并在Cytoscape软件中构建化合物-靶点-通路网络。结果1 瓜蒌薤白半夏汤的活性成分和作用靶点:利用TCMSP平台共筛选到满足OB>30%、DL>0.18同时有预测靶点的活性成分33种。瓜蒌含有10种活性成分,薤白含有11种活性成分,半夏含有13种活性成分,其中β-谷甾醇（MOL000358）在薤白和半夏中均有分布。在TCMSP平台上共收集到活性成分的预测靶点137个,瓜蒌的活性成分有30个作用靶点,薤白的活性成分有119个作用靶点,半夏的活性成分有83个作用靶点。2 冠心病相关靶点和交集靶点:基于TTD数据库、Gene Cards数据库和Dis Ge NET数据库筛选冠心病的相关靶点共1221个。药物与疾病的交集靶点共有68个。3 瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的化合物-靶点-疾病网络:基于Cytoscape软件构建瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的化合物-靶点-疾病网络。网络共含有105个节点和390条边,包括了1个疾病节点,3个药物节点,33个活性成分节点,68个靶点节点。Cyto NCA插件的拓扑学分析结果显示,度值Degree中位数为6,介度中心数BC中位数为24.706522,紧密中心数CC中位数为0.37313432,共有6个活性成分满足核心活性成分的筛选条件,分别为槲皮素（MOL000098）、β-谷甾醇（MOL000358）、胞嘧啶核苷（MOL002670）、豆甾醇（MOL000449）、柚皮素（MOL004328）、黄芩苷（MOL002714）。4 靶点蛋白PPI网络:基于String数据库反馈的交集靶点蛋白的高置信度交互作用信息,在Cytoscape软件中构建瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的靶点蛋白PPI网络。去除与其他靶点蛋白没有相互作用的靶点后,网络共有67个节点、244条边。节点的直径越大、颜色越深代表节点Degree值越高、与之相互作用的靶点蛋白越多,边越粗、颜色越深代表两靶点蛋白间的相互作用越强。Cyto NCA插件的拓扑学分析结果如表3所示,度值Degree中位数为5,介度中心数BC中位数为17.139444,紧密中心数CC中位数为0.15456675,共有16个靶点满足核心靶点的筛选条件,IL6、MAPK1、VEGFA、TP53、IL1B、PTGS2、CCL2、EGF、EGFR、HMOX1、NOS3、MAPK14、ESR1、MMP2、CAT、AR。5 分子对接模拟验证:从PDB数据库获取靶点蛋白的信息。利用Autodock＿vina软件计算的靶点蛋白与活性成分间的最低结合能,所有的最低结合能结果均小于-5k J?mol-1,说明受体蛋白与活性成分具有结合活性,能够形成较为稳定的构象。核心活性成分与受体蛋白的最低结合能大部分大于阿司匹林分子与受体蛋白的最低结合能,验证了靶点蛋白受体及配体选择的合理性。分子对接模拟验证显示,活性成分分子与周围分子通过氢键等分子间作用力形成较为稳定的构象。6 富集分析结果:通过David数据库获取部分富集分析结果。GO生物学富集分析共富集到307个GO条目,包括219个生物过程（Biological Processes,BP）条目、36个细胞组分（Cellular Component,CC）条目和52个分子功能（Molecular Function,MF）条目,涉及一氧化氮生物合成过程的正调控（positive regulation of nitric oxide biosynthetic process）、对缺氧的反应（response to hypoxia）、MAPK活性的激活（activation of MAPK activity）等。KEGG通路富集分析共富集到30条通路,涉及低氧诱导因子-1信号通路（HIF-1 signaling pathway）、肿瘤坏死因子信号通路（TNF signaling pathway）、雌激素信号通路（Estrogen signaling pathway）、PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）等通路。组织分布富集分析共富集到10个条目,主要涉及纤维母细胞、肝、血小板、心、外周血、白细胞、血等部位。7 化合物-靶点-通路网络:在Cytoscape软件中构建瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的化合物-靶点-通路网络。化合物-靶点-通路网络共有122个节点和437条边,涉及3种药物、33种活性成分、56个潜在靶点、30条KEGG通路,体现了瓜蒌薤白半夏汤对冠心病的治疗作用有着多成分、多靶点、多途径的特点。结论:（1）通过数据库检索发现瓜蒌薤白半夏汤具有多种化合物成分,瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病是多种活性成分共同发挥作用,其中槲皮素、柚皮素、黄芩素、黄芩苷等可能为瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的核心成分（2）通过活性成分的靶点预测筛选发现瓜蒌薤白半夏汤的活性成分可作用于多个靶点,瓜蒌薤白半夏汤主要通过IL6（白细胞介素-6）、MAPK1（丝裂原活化蛋白激酶1）、TP53（细胞肿瘤抗原p53）、VEGFA（血管内皮生长因子）、IL-1β（白细胞介素-1β）、PTGS2（前列腺素G/H合酶2）、CCL2（C-C基序趋化因子2）、EGF（表皮生长因子）、HMOX1（血红素加氧酶1）、NOS3（内皮型一氧化氮合酶）等靶点作为瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的核心靶点（3）通过GO分析和KEGG分析发现瓜蒌薤白半夏汤主要通过调节一氧化氮生物合成过程（positive regulation of nitric oxide biosynthetic process）、抗缺氧（response to hypoxia）、血红素结合（heme binding）、血管生成（angiogenesis）、血管舒张阳性调节（positive regulation of vasodilation）等生物过程和分子功能发挥治疗冠心病的作用。涉及的信号通路包括了低氧诱导因子-1信号通路（HIF-1 signaling pathway）、雌激素信号通路（Estrogen signaling pathway）、PI3K-Akt信号通路（PI3K-Akt signaling pathway）、钙信号通路（Calcium signaling pathway）、血管内皮生长因子信号通路（VEGF signaling pathway）等通路。
黄雅娜[5]（2020）在《基于AKT和MAPK信号通路探讨丹酚酸B对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞氧化应激的调控作用》文中研究表明目的通过建立血管紧张素II（Angiotensin II,Ang II）诱导的人脐静脉内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC）氧化应激模型,采用丹酚酸B（Salvianolic acid B,SalB）干预观察治疗效果,分析其抑制该氧化应激反应的过程,并探讨SalB的药理机制。方法1.采用MTT法筛选对HUVEC无毒性的SalB药物干预浓度;后采用Ang II干预HUVEC建立氧化应激反应模型,用相对应的荧光探针检测活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）和细胞内钙离子浓度变化,TAB法检测丙二醛（MDA）含量;2.Western Blot法检测细胞内p-ERK1/2、ERK1/2、p-JNK、JNK、p-p38、p38、PI3K、p-AKT、AKT、p-NRF2、NRF2、NOX2、HO-1蛋白的表达水平。结果1.MTT检测显示,25μM、50μM、100μM的SalB干预HUVEC对细胞活力影响无统计学差异,表明所采用浓度对HUVEC无毒性。与Control组比较,HUVEC经1μM Ang II诱导后,细胞内ROS水平和MDA含量显着增加,而NO含量则显着降低。与Ang II组比较,给予SalB预处理后,细胞内ROS和MDA含量显着减少,NO含量明显升高,细胞内钙离子的释放增加。2.Western Blot法检测显示,1μM Ang II诱导能上调NOX、p-ERK、p-p38、p-JNK的蛋白表达,且下调PI3K、p-AKT、p-NRF2、HO-1的蛋白表达;SalB预处理能显着上调HUVEC细胞内的ERK1/2、p38、JNK、PI3K、AKT、NRF2的磷酸化水平与HO-1的蛋白表达,并抑制NOX2蛋白表达。结论1.SalB可通过抑制Ang II诱导的ROS和MDA含量的增加,并提高HUVEC内NO的水平,从而起到抗氧化的作用。2.SalB可增加Ang II刺激下的HUVEC内钙离子浓度的释放。3.SalB可进一步增强Ang II诱导的PI3K/AKT及MPAK（ERK1/2、p38、JNK）信号通路的活化,通过激活NRF2/HO-1信号通路抑制Ang II诱导的HUVEC氧化应激反应,减轻内皮细胞损伤,从而保护内皮细胞。
秦田雨[6]（2020）在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中认为[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液（Shenkang,SK）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药（ARB）组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组（n=6）。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL（生药0.13 g）/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.08 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.04 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.02 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK（0,1,2,4mg/mL）干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:（1）肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低（p<0.05或p<0.01）;与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低（p<0.05）。（2）肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加（p<0.05或p<0.01）。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低（p<0.01或p<0.001）,其中以SK中剂量组最为显着（p<0.001）。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加（p<0.001）;与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少（p<0.05或p<0.01）。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。（3）Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组p-STAT3（Try705位点）/STAT3比例显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中（p<0.01）、低剂量（p<0.001）组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2（Try1007位点）/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度（p<0.05）,（4）PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平（p<0.05 或p<0.01）。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3（Try705位点）/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高（p<0.05）,p-JAK2（Try1007位点）/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义（p>0.05）;与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高（p<0.05或p<0.001）;与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平（p<0.001）,与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK（p<0.05）及 4 mg/mL SK（p<0.01）显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平（p<0.05）。[结论]（1）系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。（2）SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。（3）SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
宋晶[7]（2020）在《基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用》文中认为目的:以盐酸异丙肾上腺素腹腔注射法复制大鼠心肌纤维化（Myocardial fibrosis,MF）模型,用细胞分子生物学技术和方法,观察TGF-β1/LIMK1信号通路在心肌纤维化过程中的表达情况,观察解毒通络方对TGF-β1/LIMK1信号通路的调控方式及干预MF的作用机制。方法:实验一:50只SD雄性大鼠随机分为5组,正常对照组、3d组、7d组、14d组、28d组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,分别于3天、3天、7天、14天、28天时,记录大鼠体重并乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量后,取出心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE染色,免疫组化法测α-肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）阳性表达面积,取出心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测羟脯胺酸含量。实验二:根据实验一结果,将60只SD雄性大鼠分为正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低、中、高剂量组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,中药组每日按10g、20g、30g.kg-1灌胃解毒通络方冲剂悬液;卡托普利组每日按5mg.kg-1灌胃卡托普利片悬液;正常对照组每日给予以等体积自来水灌胃。记录大鼠体重后乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量计算心重指数;心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测定羟脯胺酸含量。将心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE及MAasson染色,免疫组化法测I型胶原蛋白（Col I）、III型胶原蛋（Col III）、α-SMA、Vim、单丝氨酸蛋白激酶（LIMK1）阳性表达面积;眼球采血,收集血清并置于-20℃冰箱,收集的血清进行细胞分组培养。实验三:用提前制备的动物血清分正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组培养成纤维细胞,Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白相对表达量;实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量;MTT法检测TGF诱导成纤维细胞增殖时相;用TGF刺激成纤维细胞后,实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量。结果:实验一:大鼠心肌纤维化模型构建:1.HE染色结果:正常对照组心肌细胞横纹清晰,细胞和大小、间隙一致,胞浆染色清晰,注射异丙肾上腺素后3天、7天、14天、28天大鼠心肌组织细胞均出现细胞排列紊乱,坏死区细胞核固缩,胞浆减少或缺失,结缔组织增生。在3d组这种改变最明显,7d组、14d组相对减轻,28d组有所改善。2.心重指数:与正常对照组比较,3d组心重指数无明显差异,P>0.05。7d组、14d组、28d组心重指数下降,P<0.05。3.羟脯氨酸含量测定:与正常对照组比较,3d组、7d组、14d组、28d组羟脯胺酸含量明显增加,P<0.05,且随时间变化呈递增趋势。4.免疫组化结果:与正常对照组比较,3d组、7d组的大鼠心肌组织中,可见明显α-SMA、Vim蛋白阳性表达,且P<0.05。14d、28d组与正常对照组比较无显着差异P>0.05。实验二:解毒通络方动物体内药效学观察:1.心重指数:应用异丙肾上腺素制备大鼠心肌纤维化模型,采用注射后3天的造模方法。与正常对照组比较,模型组大鼠心重指数无明显增加,且P>0.05,与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组心脏指数无明显改变,且P>0.05。2.羟脯胺酸含量测定结果:与正常对照组比较,模型组羟脯氨酸含量明显增加,P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组羟脯氨酸含量明显下降,且P<0.05。3.HE染色:正常对照组细胞排列整齐,细胞间隙大小均一,胞浆染色均匀,模型组、卡托普利组以及各剂量中药组则出现不同程度的心肌纤维化表现,主要以细胞核固缩、心肌纤维溶解、断裂为主,细胞排列不规则,细胞结构破坏,细胞浆染色不均匀为主,卡托普利组与不同剂量中药组心肌纤维化程度较轻。4.Masson染色:与正常对照组比较,模型组、卡托普利组以及不同剂量中药组均出现不同程度的心肌组织损伤,具体表现为细胞核固缩,细胞排列紊乱,细胞间隙不规则,并出现大量蓝染的纤维胶原,并破坏心肌细胞,坏死部分有少量炎症浸润。与模型组比较,卡托普利组以及各剂量中药组心肌纤维化程度较轻。大鼠心肌组织中胶原纤维容积比（CVF）,与正常对照组比较,模型组明显增加,且P<0.05,与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组明显减少,且P<0.05。5.免疫组化法测定ColI、ColIII、α-SMA、Vim、LIMK1蛋白阳性表达面积:（1）I型胶原蛋白及III型胶原蛋白在免疫组化染色中显示为棕色,与正常对照组比较,模型组I型胶原蛋白及III型胶原蛋白阳性表达面积明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组及中药低、中、高剂量组阳性表达面积明显低于模型组。P<0.05。（2）α-SMA、Vim蛋白阳性表达表现为棕色,与正常对照组比较,模型组中α-SMA、Vim蛋白表达面积明显高于正常对照组,且P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组α-SMA、Vim蛋白表达面积明显下降,P<0.05;（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组明显低于模型组,P<0.05。实验三:解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的作用1.Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白含量:（1）与正常对照组比较,模型组α-SMA、Vim蛋白表达量有所升高,有统计学差异P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,具有显着差异,P<0.05;（2）与正常对照组比较,模型组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组、中药低、中剂量组与中药高剂量组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显下降,有统计学差异,P<0.05。（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量有所升高,有统计学差异,P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,且具有统计学差异,P<0.05;2.荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1mRNA含量:（1）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中TGF-β1的mRNA表达量,与正常对照组比较,模型组中TGF-β1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中TGF-β1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（2）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量:与正常正常对照组比较,模型组中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoA、ROCK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（3）应用荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中LIMK1mRNA的表达量,结果显示,与正常对照组比较,模型组中LIMK1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中LIMK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。3.MTT法检测TGF-β1诱导成纤维细胞增殖时相:用不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞后,根据吸光值计算细胞增殖率,结果显示不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞时,细胞表现出增殖现象,低浓度组、中浓度及高浓度组TGF-β1对细胞增殖均表现为24小时后出现增殖,48小时达到高峰,72小时后出现下降。而低浓度组在不同时间点均表现为最强的增殖率。中浓度组在各个时间点增殖率最低。所以在成纤维细胞增殖的研究中,选择低浓度(0.025 ng.ml-1)的TGF-β1为药物剂量,以48小时为时间点干预成纤维细胞。4.用TGF-β1刺激成纤维细胞后,荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量:结果显示,（1）与正常对照组比较,模型组中RhoAmRNA含量明显增高。P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoAmRNA含量明显减少。P<0.05。（2）与正常对照组比较,模型组中ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显减少,P<0.05。结论:1.应用盐酸异丙肾上腺素注射液5mg.kg-1腹腔注射大鼠,3天后大鼠心肌组织病理形态改变,心肌组织中羟脯胺酸含量增加,心肌组织中α-SMA、Vim蛋白表达量增多,说明注射异丙肾上腺素3天后大鼠心肌纤维化模型制备成功。2.在应用解毒通络方干预大鼠心肌纤维化模型时,心肌纤维化有明显的改善。并通过抑制心肌胶原蛋白的分泌及沉积而实现抑制心肌纤维化。3.在体外应用解毒通络方干预大鼠成纤维细胞时,可通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子,抑制成纤维细胞中α-SMA、Vim蛋白表达,从而抑制心肌纤维化。4.在TGF-β1诱导大鼠成纤维细胞增殖时,解毒通络方可以抑制成纤维细胞增殖,并通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子而实现的。
孔芳艳[8]（2020）在《复方天麻降压颗粒治疗阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者的临床研究》文中研究说明目的:研究复方天麻降压颗粒治疗阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者的临床疗效方法:选取60例门诊及住院的阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者,随机分为对照组（单纯西药组）30例及治疗组（中药+西药组）30例,两组患者均给予常规降压药物（氨氯地平+厄贝沙坦）,治疗组另予以复方天麻降压颗粒口服,两组疗程8周。观察两组治疗前后的偶测血压（CBP）、动态血压评估数值（24h SBP、24h DBP、DSBP、DDBP、NSBP、NDBP）、匹茨堡睡眠质量指数（PSQI）评分以及睡眠障碍疗效评价、中医疗效评价、血管紧张素II（AngⅡ）、肾素（RENIN）、醛固酮（ALD）、内皮素-1（ET-1）、血清NO浓度（NO）、一般安全性指标疗效评价。结果:1.血压比较:1.1 CBP比较:两组CBP水平治疗后较治疗前明显下降,且有统计学差异（P<0.05）,治疗后治疗组较对照组下降更明显（P<0.05）。1.2动态血压评估数值比较:两组动态血压相关数值,24h SBP、24h DBP、DSBP、DDBP、NSBP、NDBP治疗后较治疗前下降（P<0.05）,且组间比较,数据差异有统计学意义（P<0.05）。2.PSQI评分及睡眠障碍疗效比较:两组PSQI评分治疗后,均较治疗前有所降低,数据差异有意义（P<0.05）,治疗组与对照组相比,评分降低更明显,且有统计学差异（P<0.05）。治疗组治疗后睡眠障碍疗效优于对照组,且数据差异有统计学意义（P<0.05）。3.中医疗效评价比较:两组治疗前后的中医证候积分均降低（P<0.05）,其中对照组总有效率为80.00%,治疗组总有效率为96.67%,治疗后,治疗组中医证候积分明显低于对照组,经组间比较,且数据有统计学差异（P<0.05）。4.相关实验室指标比较:治疗组与对照组RENIN治疗前后结果无意义（P>0.05）,组间比较也无统计学意义（P>0.05）。与对照组相比,治疗组AngⅡ,ET-1,ALD指标均降低（P<0.05）,NO指标升高,且结果数据有统计学差异（P<0.05）,同组间治疗前后数据对比也有差异（P<0.05）。结论:复方天麻降压颗粒能够明显降低阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者血压,延长患者睡眠时间,能够有效降低AngⅡ,ALD,ET-1水平,升高NO水平,改善临床症状。
吴信华[9]（2020）在《潜阳育阴颗粒高血压肾保护的功效物质基础研究》文中指出目的:系统分析潜阳育阴颗粒中的化学成分,研究潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害的功效物质及作用机制。方法:运用LC/Q-TOF-MS技术结合Peakview数据处理平台建立潜阳育阴复方水提液中化学成分的快速分析方法,构建潜阳育阴复方水提液质谱数据库,并对该复方的化学成分进行分类和归属,以此为基础指认潜阳育阴颗粒中的化学成分;采用网络药理学研究方法,筛选潜阳育阴颗粒的主要活性成分及作用靶点,挖掘高血压肾损害的相关靶点,根据网络拓扑分析和Metascape分析潜阳育阴颗粒的药效物质基础和作用机制,并对核心成分及靶点进行分子对接验证。结果:1.运用LC/Q-TOF-MS联用技术对潜阳育阴复方水提液中的化学成分进行分析,构建了潜阳育阴复方水提液质谱数据库。共鉴定了 133个化合物,包括18个黄酮类化合物、21个环烯醚萜类化合物、19个酚酸类化合物、32个三萜类化合物、11个苯丙素类化合物、5个蒽醌类化合物、5个二苯乙烯类化合物、4个甾酮类化合物和18个其他类化合物,并总结不同结构类型化合物的裂解规律;对其进行单味药来源归属,41个化合物来源于鬼针草,30个化合物来源于制首乌,44个化合物来源于酒萸肉,39个化合物来源于玄参,30个化合物来源于川牛膝,43个化合物来源于泽泻。在此基础上指认出潜阳育阴颗粒中的99个化学成分,结构类型与水提液中的化合物相似。2.应用网络药理学研究方法从潜阳育阴颗粒中筛选出没食子酸、大黄素、芦荟大黄素、肉桂酸、咖啡酸甲酯、木樨草素、阿魏酸、槲皮素、山奈酚等44个活性成分,以及VEGFA、AKT1、JUN、GNB1、TP53、APP、MAPK1等48个核心靶点,主要涉及血管生成、缺氧反应、一氧化氮的生物合成、炎症调节等252个显着相关生物过程,预测出MAPK、PI3K-Akt、TGF-β、Wnt、Jak-STAT等141条显着相关通路,分子对接结果进一步验证了网络药理学预测靶点的可靠性。结论:该研究初步阐明了潜阳育阴颗粒的潜在功效物质基础,揭示了临床上潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害多成分、多靶点、多途径的作用机制,为潜阳育阴颗粒的基础研究和临床应用提供科学依据。
贾敏[10]（2019）在《何首乌中二苯乙烯苷对Hcy诱导的血管舒缩功能障碍的拮抗作用及其机制研究》文中指出研究背景:何首乌（Polygonum multiflorumthunb）是我国传统补虚类中药,2015药典一部中对其具体描述是:补肝肾,益精血,乌须发,强筋骨,化浊降脂,用于血虚萎黄,眩晕耳鸣,须发早白,腰膝酸软,肢体麻木,崩漏带下,高脂血症等。结合现代药理学研究发现何首乌具有降血脂、抗动脉粥硬化,降血压,抗氧化和提高记忆等作用。但目前对其药效物质基础和作用机制并不十分清楚。国内外学者以及我们团队前期研究已证实,何首乌中的标志成分——二苯乙烯苷（2,3,5,4’-tetra-hydroxysilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG）的药理作用较为广泛,可通过抗炎、抗氧化、抑制血小板聚集、保护血管内皮细胞功能和抑制血管平滑肌细胞的表型转化等途径达到抗动脉粥样硬化、抗高血压等作用,但对其舒血管作用及其机制尚鲜见报道。另外,有研究表明,高同型半胱氨酸血症（Hyperhomocysteinemia,HHcy）与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病的发病呈正相关。血中同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）≥15μmol/L就可直接损伤血管内皮细胞和平滑肌细胞,引起血管重构、平滑肌舒缩功能障碍,诱发HHcy型高血压,目前HHcy已成为新的引起心血管疾病的独立风险因子。虽然何首乌在以往的研究中表现出明确的抗动脉粥样硬化、降血压等作用,但是否可降低Hcy水平对抗HHcy型高血压引起的血管损伤目前尚不清楚。为了揭示何首乌及其标志成分TSG的舒血管作用和对HHcy诱发的高血压及血管损伤的保护作用及其作用机制,本课题主要完成了以下三个方面的研究:证实了何首乌中的标志成分——TSG具有显着的舒血管作用;明确了TSG的舒血管作用一方面依赖于抑制血管内皮细胞cox-2活性降低内皮细胞TXA2的释放,引起血管扩张。另一方面,则是直接作用于血管平滑肌细胞上的电压依赖性K+通道以及阻断细胞内Ca2+释放和外Ca2+内流,发挥舒血管作用;证实TSG可通过抑制MAPK/NF-кB/ETB信号轴,下调HHcy诱导的血管平滑肌细胞异常ETB受体的表达,发挥其舒张血管,降低HHcy型高血压的作用。研究方法:1、选用微血管张力检测系统在体外记录大鼠肠系膜上动脉血管环张力。观察何首乌提取物PME（二苯乙烯苷含量为71.2%）和高纯度TSG（二苯乙烯苷含量为98.1%）对基础状态大鼠肠系膜上动脉舒缩的影响;检测内皮完整和去内皮的微动脉血管在缩血管物质高钾和PE的诱导下PME对微动脉的舒张率;检测在缩血管物质高钾、PE和5-HT的刺激下TSG对微动脉的舒张率,并用血管压力直径测定系统实时观察二级动脉外径的变化。2、利用微血管张力检测仪在体外进一步观察内皮细胞在TSG舒张肠系膜上动脉血管中的作用;利用内皮细胞舒张血管通路和血管平滑肌细胞K+、Ca2+离子通道拮抗剂,检测血管环张力,观察TSG通过内皮细胞和血管平滑肌细胞舒张血管的作用途径;小鼠尾静脉注射垂体后叶素后复制急性血管收缩模型,实时监测其左颈总动脉平均血流量的变化,用ELISA法测定各组小鼠血中TXA2、PGI2、cox-1、cox-2的浓度。3、选用体外器官培养方法,利用微血管张力测定系统观察TSG对血管平滑肌在缩血管物质及内皮素受体激动剂ET-1、S6c作用下的舒张作用;Western Blot法检测血管平滑肌ETA、ETB受体表达及MAPK信号通路相关蛋白的表达。4、建立HHcy小鼠动物模型,TSG连续给药4周,无创血压测量分析系统动态监测各组小鼠血压变化;ELISA法检测血中Hcy、AngⅡ、ET-1、AD、NE、5-HT浓度;HE、masson、间苯二酚品红染色对主动脉和微动脉动脉血管进行病理组织学检查,观察血管形态结构变化、平滑肌纤维和胶原蛋白沉积;Western Blot法检测微动脉血管平滑肌ETA、ETB受体表达及MAPK信号通路相关蛋白及其磷酸化的变化。研究结果:1、何首乌提取物——PME（二苯乙烯苷含量为71.2%）可以浓度依赖的方式舒张PE或KCl预收缩的大鼠肠系膜上动脉,且PME对PE（10μM）或高钾（60m M）预收缩的内皮完整的大鼠肠系膜上动脉的舒张作用显着强于去除了内皮的大鼠肠系膜上动脉;TSG（二苯乙烯苷含量为98.1%）对KCl、PE或5-HT预收缩的大鼠肠系膜上动脉的舒张作用更明显;二者均对基础状态的大鼠肠系膜上动脉血管环（完整内皮）无明显的收缩或舒张作用,且实验前后,血管收缩能力无明显改变,因此推测TSG对血管无直接毒性。2、TSG对高钾、PE或5-HT预收缩的内皮完整的大鼠肠系膜上动脉的舒张作用显着强于去除了内皮的血管;L-NAME和ODQ并不能够影响TSG的舒张血管作用。提示,TSG诱导的血管舒张作用与NO无关;但TSG引起的血管舒张能够被Indo抑制,且选择性cox-2抑制剂尼美舒利显着增强TSG的血管舒张作用。同时在整体实验中:80mg/kg、160mg/kg TSG可降低垂体后叶素引起的急性小鼠血管收缩引起的平均血流量增加,间接反映TSG具有舒血管作用。TSG还可降低模型小鼠血清中TXA2、cox-2浓度。提示TSG可抑制cox-2活性,降低缩血管物质TXA2水平从而产生血管舒张作用增强;此外,4-AP可抑制TSG诱导的血管舒张,而Gli、Bacl2和TEA则没有抑制,表明TSG的舒血管作用与电压敏感K+通道有关。最后,还发现TSG可抑制PE诱导的血管平滑肌细胞肌浆网内Ca2+释放和K+诱导的细胞外Ca2+内流。3、体外培养24h后血管平滑肌对缩血管物质（KCl、PE或5-HT）及ETB受体激动剂S6c的敏感性显着增加,并引起血管平滑肌异常的ETA、ETB受体的表达上调,经TSG孵育24h后,可显着抑制上述物质对血管平滑肌的收缩作用,降低ETB受体的表达;Hcy孵育后使血管平滑肌对缩血管物质及ETB受体激动剂S6c的敏感性增加更为显着,可引起血管平滑肌异常的ETB受体的表达上调,经TSG与Hcy共孵育24 h后,可显着下调Hcy诱导的异常的ETB受体的表达,且对缩血管物质及ETB受体特异性激动剂——S6c诱发的血管收缩产生显着的拮抗作用,但对ETA受体的表达和ET-1诱发血管收缩并无影响。TSG也能够降低MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、JNK的表达。经TSG（10-4M,10-3.5M,10-3M）孵育24h后可显着抑制ETB受体特异性激动剂——S6c诱发的血管收缩,但对ET-1诱发血管收缩并无影响。Hcy体外诱导24h后,血管平滑肌ERK1/2蛋白的表达显着增加,但JNK、P38蛋白表达变化不明显,经TSG与Hcy共孵育24 h后,可显着下调血管平滑肌ERK1/2、JNK蛋白的表达,但对P38蛋白表达并无影响。4、TSG可降低HHcy小鼠血压,降低模型小鼠血中AngⅡ和ET-1浓度,并对HHcy引起主动脉和微动脉损伤有保护作用,可使主动脉胶原纤维沉积明显减少弹力纤维排列规则,断裂情况有所缓解,胶原纤维沉积减少;使微动脉胶原纤维沉积明显减少,弹力纤维大幅度增多,胶原纤维沉积明显减少。TSG可显着降低HHcy小鼠血管平滑肌p65蛋白的表达,抑制HHcy诱导增加的p65蛋白磷酸化,进而抑制MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、JNK蛋白表达,并抑制ERK1/2、JNK、P38蛋白磷酸化,阻断MAPK信号通路激活。下调血管平滑肌异常表达的ETB受体。研究结论:（1）二苯乙烯苷（TSG）是何首乌中主要的具有舒张血管作用的活性成分。（2）TSG一方面可通过内皮途径,抑制血管内皮细胞cox-2活性,降低TXA2的释放;另一方面,具有阻断血管平滑肌细胞上的电压依赖性K+通道和抑制细胞内Ca2+释放和外Ca2+内流。可分别影响血管内皮细胞和平滑肌细胞的功能,发挥舒血管作用。（3）TSG表现出良好的抗HHcy的作用。在体外TSG可能通过抑制血管平滑肌ERK1/2、JNK蛋白表达,下调ETB受体水平,降低Hcy诱发的血管平滑肌对缩血管物质的反应性,舒张血管;在体内TSG可通过降低血中Hcy水平,降低HHcy诱导升高的AngⅡ和ET-1水平,发挥其保护血管损伤,降低血压的作用;还可通过抑制MAPK/NF-кB/ETB信号轴,下调血管平滑肌细胞异常ETB受体的表达,发挥其舒张血管降低HHcy型高血压的作用。
二、中药PT液对衰老小鼠体内一氧化氮和血管紧张素Ⅱ（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中药PT液对衰老小鼠体内一氧化氮和血管紧张素Ⅱ（论文提纲范文）
（1）丹参酮ⅡA对DOCA-salt高血压大鼠的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 第一节 盐敏感性高血压的现代研究进展 |
| 一. 盐敏感性高血压定义 |
| 二. 盐敏感性高血压的严重性 |
| 三. 盐敏感性高血压的发病机制 |
| 四. 盐敏感性的判定方法及临床特点 |
| 第二节 中医对盐敏感性高血压的认识 |
| 一. 中医古籍对高血压的认识 |
| 二. 中医对盐敏感性高血压的认识 |
| 三. 盐敏感性高血压与脏腑之间的关系 |
| 第三节 丹参酮ⅡA的相关研究进展 |
| 一. 丹参酮ⅡA来源 |
| 二. 丹参酮ⅡA临床研究 |
| 三. 丹参酮ⅡA基础研究 |
| 第四节 血压的调节因素 |
| 一. 交感神经系统活性 |
| 二. PVN与血压调节 |
| 三. 炎症反应与血压调节 |
| 四. 氧化应激与血压调节 |
| 第五节 盐敏感性高血压动物模型现代研究进展 |
| 一. DOCA-salt模型 |
| 二. 感觉损伤性盐敏感性高血压大鼠 |
| 三. Dah1盐敏感性高血压大鼠 |
| 四. 部分肾切除盐敏感性高血压动物模型 |
| 五. DOCA-salt高血压动物模型的研究进展 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第一节 中枢给予TNF-α对大鼠PVN神经元炎症介质表达的影响 |
| 一. 实验材料 |
| 二. 实验方法 |
| 三. 实验结果 |
| 四. 讨论 |
| 五. 结论 |
| 第二节 丹参酮IIA对原代神经细胞的保护作用 |
| 一. 实验材料 |
| 二. 实验方法 |
| 三. 实验结果 |
| 四. 讨论 |
| 五. 结论 |
| 第三节 丹参酮ⅡA对DOCA-salt大鼠的保护作用 |
| 一. 实验材料 |
| 二. 实验方法 |
| 三. 实验结果 |
| 四. 讨论 |
| 五. 结论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校发表论文情况 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）解毒活血方促进PCI术后冠状动脉血管内皮细胞损伤修复的机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 西医学对PCI术后再狭窄的研究 |
| 2 中医学对PCI术后再狭窄的认识 |
| 3 中医药对于PCI术后再狭窄的治疗进展 |
| 4 毒瘀理论探析 |
| 5 毒瘀互结是血管再狭窄的病理机制 |
| 6 解毒活血法防治血管内再狭窄的理论依据 |
| 第二部分 解毒活血方抑制AT1-AA影响EPCs凋亡的机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 2 方法和步骤 |
| 2.1 内皮祖细胞复苏、传代及冻存 |
| 2.2 MTT法检测内皮祖细胞增殖及生存活力 |
| 2.3 流式细胞术测定内皮祖细胞的凋亡状况 |
| 2.4 内皮祖细胞细胞内ROS水平检测 |
| 2.5 蛋白印迹 |
| 3 统计学处理 |
| 4 结果 |
| 4.1 内皮祖细胞镜下形状及生长特点 |
| 4.2 AT1-AA降低EPCs生存活力,解毒活血方可拮抗该效应 |
| 4.3 AT1-AA诱导EPCs凋亡,解毒活血方可抑制其效应 |
| 4.4 AT1-AA诱导EPCs活性氧浓度增加,解毒活血方可抑制此效应 |
| 4.5 AT1-AA调控EPC凋亡相关蛋白表达,解毒活血方可抑制此效应 |
| 5 讨论 |
| 5.1 PCI术后再狭窄西医治疗的现状 |
| 5.2 PCI术后再狭窄中医治疗的特点 |
| 5.3 PCI术后再狭窄内皮损伤模型的建立 |
| 5.4 内皮祖细胞在PCI术后再狭窄过程中的作用 |
| 5.5 内皮祖细胞在再狭窄过程中的细胞凋亡机制 |
| 5.6 解毒活血方方药分析 |
| 5.7 解毒活血方对内皮祖细胞生存活力的影响 |
| 5.8 解毒活血方对内皮祖细胞细胞凋亡率的影响 |
| 5.9 解毒活血方对EPCs氧化应激及凋亡的影响 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（3）miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人参皂苷Re药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验研究 |
| 研究一 miR-489调节心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 CFs形态学观察与纯度检测 |
| 2 过表达miR-489抑制CFs分化和分泌 |
| 3 过表达miR-489抑制myd88/NF-κB通路的活化 |
| 4 抑制miR-489促进CFs分化和分泌 |
| 5 抑制miR-489促进myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究二 人参皂苷Re调节心肌梗死后心肌纤维化的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re改善AMI后心脏功能 |
| 2 人参皂苷Re抑制AMI后心肌代偿性肥厚 |
| 3 人参皂苷Re减轻AMI后心肌损伤 |
| 4 人参皂苷Re改善AMI后心脏组织病理学改变 |
| 5 人参皂苷Re抑制AMI后纤维化相关蛋白的表达 |
| 6 人参皂苷R调控AMI后miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 7 人参皂苷Re抑制AMI诱导的myd88/NF-κB通路活化 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究三 人参皂苷Re干预AngⅡ诱导CFs生物学行为改变的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 1 人参皂苷Re干预CFs的浓度筛选 |
| 2 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs分化 |
| 3 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs迁移 |
| 4 人参皂苷R抑制AngⅡ诱导的CFs中胶原蛋白的表达 |
| 5 人参皂苷Re抑制AngⅡ诱导的CFs中myd88/NF-κB通路活化 |
| 6 人参皂苷Re调节CFs中miR-489和myd88 mRNA的表达 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究结语 |
| 创新点 |
| 基金项目 |
| 主要仪器设备 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
（4）基于网络药理学的“瓜蒌薤白半夏汤”治疗冠心病的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章理论研究 |
| 1.1 冠状动脉粥样硬化性心脏病的中医研究进展 |
| 1.1.1 疾病的命名和历史沿革 |
| 1.1.2 病因病机 |
| 1.1.3 治疗 |
| 1.1.4 小结 |
| 1.2 冠状动脉粥样硬化性心脏病的现代医学研究进展 |
| 1.2.1 病因 |
| 1.2.2 病理生理 |
| 1.2.3 发病机制 |
| 1.2.4 诊断标准 |
| 1.2.5 治疗 |
| 1.2.6 小结 |
| 1.3 瓜蒌薤白半夏汤的药理作用研究进展 |
| 1.3.1 单味药研究 |
| 1.3.2 瓜蒌薤白半夏汤的复方研究 |
| 1.3.3 小结 |
| 第二章瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的作用机制的网络药理学研究 |
| 2.1 研究一瓜蒌薤白半夏汤的活性成分筛选及靶点预测 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.2 结果 |
| 2.1.3 小结 |
| 2.2 研究二冠心病靶点的筛选和化合物-靶点-疾病网络的构建与分析 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.2 结果 |
| 2.2.2.1 冠心病靶点 |
| 2.2.2.2 Venn 图及潜在作用靶点 |
| 2.2.2.3 瓜蒌薤白半夏汤治疗冠心病的化合物-靶点-疾病网络 |
| 2.2.3 小结 |
| 2.3 研究三潜在作用靶点PPI网络的构建与分析 |
| 2.3.1 材料与方法 |
| 2.3.2 结果 |
| 2.3.3 小结 |
| 2.4 研究四潜在作用靶点的分子对接模拟验证 |
| 2.4.1 材料与方法 |
| 2.4.2 结果 |
| 2.4.3 小结 |
| 2.5 研究五潜在作用靶点的生物功能富集分析 |
| 2.5.1 数据库和软件 |
| 2.5.2 方法 |
| 2.5.3 结果 |
| 2.5.4 小结 |
| 2.6 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 PI3K/AKT 信号通路在冠心病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（5）基于AKT和MAPK信号通路探讨丹酚酸B对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞氧化应激的调控作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞株 |
| 1.2 药物与制备 |
| 1.3 实验试剂及耗材 |
| 1.4 实验仪器 |
| 1.5 实验使用试剂的配制方法 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 HUVEC传代和换液 |
| 2.2 HUVEC冻存 |
| 2.3 HUVEC复苏 |
| 2.4 HUVEC实验分组 |
| 2.5 HUVEC计数和接板 |
| 2.6 MTT实验 |
| 2.7 活性氧(ROS)测定方法 |
| 2.8 一氧化氮(NO)测定方法 |
| 2.9 丙二醛(MDA)含量测定方法 |
| 2.10 激光共聚焦实验检测细胞内钙离子的变化 |
| 2.11 蛋白免疫印迹法(Western Blot) |
| 3 统计学处理 |
| 实验结果 |
| 1 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC氧化应激的作用 |
| 1.1 丹酚酸B对 HUVEC活力的影响 |
| 1.2 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC内 ROS表达情况的影响 |
| 1.3 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC上清液中MDA含量的影响 |
| 1.4 丹酚酸对Ang Ⅱ诱导的HUVEC内 NOX2 蛋白活化的影响 |
| 1.5 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC内 NO表达情况的影响 |
| 2 丹酚酸B调控Ang Ⅱ诱导的HUVEC相关信号通路活化 |
| 2.1 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC钙离子浓度变化的影响 |
| 2.2 丹酚酸B对 Ang Ⅱ诱导的HUVEC的PI3K/AKT信号通路相关蛋白活化的影响 |
| 2.3 丹酚酸对Ang Ⅱ诱导的HUVEC的MAPK信号通路活化的影响 |
| 2.4 丹酚酸对Ang Ⅱ诱导的HUVEC的NRF2/ HO-1 信号通路活化的影响 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（6）肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
| 1 病因研究 |
| 2 发病机制研究 |
| 3 治疗与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
| 1 病名研究 |
| 2 病因病机研究 |
| 3 防治研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果和讨论 |
| 3 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
| 个人简历 |
（7）基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化的现代研究 |
| 1 心肌纤维化概念 |
| 2 心肌纤维化发病机制 |
| 3 心肌纤维化的现代治疗 |
| 4 小结 |
| 综述二 心肌纤维化的中医研究进展 |
| 1 从中医角度探讨心肌纤维化病因病机 |
| 2 毒伤血络学说 |
| 3 中医药治疗心肌纤维化 |
| 4 解毒通络方药的现代研究 |
| 5 小结 |
| 实验研究 |
| 第一章 心肌纤维化大鼠模型的构建 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 解毒通络方对大鼠心肌纤维化抑制作用的体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的研究 |
| 1 实验材料 |
| 第一部分 解毒通络方对大鼠体外细胞的作用及机制 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 解毒通络方抑制大鼠成纤维细胞增殖机制 |
| 4 实验方法 |
| 5 实验结果 |
| 6 讨论 |
| 7 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（8）复方天麻降压颗粒治疗阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者的临床研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 研究资料与实验方法 |
| 1.临床资料来源 |
| 2.病例选择标准 |
| 3.实验分组 |
| 4.研究方法 |
| 5.观察指标 |
| 6.疗效判定标准 |
| 7.统计学处理 |
| 第二部分 研究结果与分析 |
| 1.一般资料分析 |
| 2.治疗前后血压水平比较 |
| 3.两组治疗前后 PSQI 评分变化 |
| 4.两组治疗后睡眠障碍疗效变化 |
| 5.中医证候积分比较 |
| 6.中医证候疗效比较 |
| 7.两组治疗前后NO、ET-1水平比较 |
| 8.两组治疗前后 RENIN、AngⅡ、ALD 水平比较 |
| 9.安全性指标比较 |
| 第三部分 研究讨论 |
| 1.西医对高血压合并睡眠障碍的认识 |
| 2.中医对高血压合并睡眠障碍的认识 |
| 3.复方天麻降压颗粒的临床疗效分析 |
| 4.复方天麻降压颗粒作用机制探讨 |
| 第四部分 结论与展望 |
| 1.结论 |
| 2.不足及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 中医药治疗高血压合并睡眠障碍的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附表 1 匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI) |
| 附表 2 中医症状分级量化表 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（9）潜阳育阴颗粒高血压肾保护的功效物质基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1. 高血压肾损害概述 |
| 1.1 高血压肾损害的发病机制 |
| 1.2 高血压肾损害的现代治疗 |
| 2. 潜阳育阴颗粒中单味药化学成分及药理作用研究进展 |
| 2.1 鬼针草 |
| 2.2 制首乌 |
| 2.3 川牛膝 |
| 2.4 酒萸肉 |
| 2.5 玄参 |
| 2.6 泽泻 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于LC/Q-TOF-S的潜阳育阴颗粒化学成分研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 药材 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 提取溶剂的考察 |
| 2.2 供试品溶液制备 |
| 2.3 对照品溶液制备 |
| 2.4 高效液相色谱条件 |
| 2.5 质谱条件 |
| 2.6 样品测定 |
| 3. 结果分析 |
| 3.1 潜阳育阴复方水提液化学成分的LC/Q-TOF-S分析 |
| 3.2 潜阳育阴复方水提液中各类化合物的质谱解析 |
| 3.3 潜阳育阴颗粒化学成分的LC/Q-TOF-MS分析 |
| 4. 本章小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于网络药理学探讨潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害的药效物质与作用机制 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 数据库 |
| 1.2 软件 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 潜阳育阴颗粒活性成分的收集与筛选 |
| 2.2 潜阳育阴颗粒活性成分靶点的筛选 |
| 2.3 高血压肾损害相关疾病靶点的筛选 |
| 2.4 蛋白相互作用(PPI)网络构建及靶点类型归属 |
| 2.5 潜阳育阴颗粒防治高血压肾损害作用靶点的功能富集分析和通路富集分析 |
| 2.6 潜阳育阴颗粒“活性成分-核心靶点-通路”网络图的构建 |
| 2.7 分子对接验证 |
| 3. 结果分析 |
| 3.1 潜阳育阴颗粒活性成分的筛选 |
| 3.2 潜阳育阴颗粒活性成分靶点的筛选 |
| 3.3 高血压肾损害相关疾病靶点的筛选 |
| 3.4 PPI相互作用网络构建与分析 |
| 3.5 作用靶点类型归属 |
| 3.6 GO生物功能及KEGG通路富集分析 |
| 3.7 潜阳育阴颗粒“活性成分-核心靶点-通路”网络图的构建 |
| 3.8 分子对接验证 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（10）何首乌中二苯乙烯苷对Hcy诱导的血管舒缩功能障碍的拮抗作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 何首乌提取物和二苯乙烯苷对大鼠肠系膜上动脉的舒张作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 二苯乙烯苷舒血管作用及其作用机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 二苯乙烯苷抑制HCY诱导ETB受体上调的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 二苯乙烯苷对HHCY小鼠血压及血管平滑肌ETB受体表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
四、中药PT液对衰老小鼠体内一氧化氮和血管紧张素Ⅱ（论文参考文献）
- [1]丹参酮ⅡA对DOCA-salt高血压大鼠的保护作用及其机制研究[D]. 高焕佳. 广州中医药大学, 2021(02)
- [2]解毒活血方促进PCI术后冠状动脉血管内皮细胞损伤修复的机制研究[D]. 张海泉. 江西中医药大学, 2021(01)
- [3]miR-489调控心肌纤维化的机制及人参皂苷Re的干预作用研究[D]. 孙敬辉. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]基于网络药理学的“瓜蒌薤白半夏汤”治疗冠心病的作用机制研究[D]. 汪杰. 成都中医药大学, 2020(02)
- [5]基于AKT和MAPK信号通路探讨丹酚酸B对血管紧张素Ⅱ诱导的血管内皮细胞氧化应激的调控作用[D]. 黄雅娜. 福建中医药大学, 2020(12)
- [6]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用[D]. 宋晶. 长春中医药大学, 2020(08)
- [8]复方天麻降压颗粒治疗阴虚阳亢型高血压合并睡眠障碍患者的临床研究[D]. 孔芳艳. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [9]潜阳育阴颗粒高血压肾保护的功效物质基础研究[D]. 吴信华. 南京中医药大学, 2020(08)
- [10]何首乌中二苯乙烯苷对Hcy诱导的血管舒缩功能障碍的拮抗作用及其机制研究[D]. 贾敏. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)