一、血管再狭窄的预防、治疗措施（论文文献综述）
帅芝琴,陈家蒙,刘滔滔,胡安玲,李利生,余丽梅,徐尚福[1]（2022）在《干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题》文中研究说明背景:血管再狭窄严重影响冠状动脉粥样硬化性心脏病介入治疗的远期疗效。干细胞的多向分化能力和分泌功能与再狭窄的发生发展和转归有密切关系,为血管再狭窄预防和治疗提供了新的思路,具有巨大的潜在优势。目的:对内皮祖细胞、间充质干细胞以及外泌体防治血管再狭窄的作用及机制作一综述。方法:检索CNKI和PubMed数据库,中文检索词为"干细胞""外泌体"和/或"再狭窄",英文检索词为"stem cell""exosomes"和/或"restenosis",筛选83篇文献进行分析总结。结果与结论:（1）再狭窄严重影响冠状动脉介入治疗的远期疗效,仍是临床上亟待解决的重要课题;（2）内皮祖细胞和间充质干细胞移植对血管再狭窄具有防治作用,其机制主要涉及直接分化修复血管内皮和旁分泌影响血管损伤微环境;（3）干细胞来源外泌体既可产生类似干细胞移植的作用,又可规避干细胞移植缺陷,在血管再狭窄防治中具有独特的潜在优势。
孙磊[2]（2021）在《“全—专科”协同管理模式在中重度颈动脉狭窄患者健康管理中的初步研究》文中研究指明背景:颈动脉狭窄是动脉粥样硬化发展的严重阶段,是缺血性脑卒中证据充分的可干预危险因素。颈动脉狭窄患者通常具有多个心血管疾病危险因素,其健康管理内容包括筛查、生活方式干预、药物治疗、手术治疗以及随访评估等连续性照顾,需要通过多学科协作以有效预防脑卒中的发生发展,减少脑血管病危害和疾病负担。目前,多数患者就诊于1个或多个专科,尚缺乏以人为中心的全人照顾和慢性病的系统化管理。全科医疗服务是以人为中心、以预防为导向的,具有连续性、综合性、协调性以及对服务对象长期负责式照顾的特点,全科医师与其他专科医师协同管理颈动脉狭窄患者应有助于提高颈动脉狭窄患者的健康管理服务效果。由于全科医学在我国起步较晚,全科医师参与颈动脉狭窄患者的多学科管理还有待进一步评价。为此,本研究构建了“全-专科”协同管理模式管理具有多重心血管疾病危险因素的颈动脉狭窄患者,并进行了初步评价。目的:为进一步提升颈动脉狭窄患者的健康管理服务质量,本研究基于全科医学“以人为中心”的服务理念,构建了“全-专科”协同管理模式,并对其有效性进行了初步评价。方法:选择2018年9月至2019年12月期间在中国医科大学附属第一医院全科医学科住院治疗的中重度颈动脉狭窄患者为研究对象,采用“全-专科”协同管理模式对患者进行健康管理,通过比较管理前后患者动脉粥样硬化性心血管疾病危险因素控制达标、患者积极度改善情况和管理后不良事件发生情况,初步评价了该模式的有效性,同时评价了患者对全科医师信任度情况。结果:1.纳入本研究患者主要为老年患者,所有患者均为慢性病共病患者,且每日服用药物数量均在3种及以上。2.经过1年的健康管理,患者“危险因素最佳控制”达标率与干预前比较改善了40.03%,其差异具有统计学意义（χ2=28.033,P<0.05）。低密度脂蛋白胆固醇、收缩压、控烟和控酒达标率分别改善了:28.57%（χ2=15.042,P<0.05）、57.14%（χ2=34.568,P<0.05）、42.86%（χ2=28.033,P<0.05）和38.57%（χ2=25.037,P<0.05）,与干预前比较均具有统计学意义。3.经过1年的健康管理,患者收缩压（t=9.152,P<0.05）、舒张压（z=-5.328,P<0.05）、糖化血红蛋白（t=3.603,P<0.05）、低密度脂蛋白胆固醇水平（t=3.339,P<0.05）均较干预前明显降低,其差异具有统计学意义。4.经过1年的健康管理,患者积极度水平明显提高,与干预前比较其差异具有统计学意义（z=-5.297,P<0.05）。5.经过1年的健康管理,所有患者脑卒中发生率为1.43%（1/70人）,术侧血管再狭窄率为2.86%（2/70人）。6.经过1年健康管理,本研究就患者对全科医师信任度进行了调查,结果显示80%的患者认可全科医师提供的健康管理服务。结论:“全-专科”协同管理模式有效改善了颈动脉狭窄患者危险因素控制达标率,提高了患者积极度水平,减少了不良事件的发生。患者对全科医师提供的健康管理服务信任度较高,全科医师在颈动脉狭窄患者的多学科协同管理中发挥了重要作用。
周阳[3]（2021）在《脂联素对冠脉搭桥术后静脉桥血管再狭窄的抑制作用及利用脂联素转基因家蚕蚕丝制备血管外支架的研究》文中研究指明第一部分脂联素抑制冠脉搭桥术后静脉桥血管再狭窄的研究目的冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）是如今患病人类死亡的重要原因,CABG是CAD的有效外科治疗手段。大隐静脉因取材方便、易于处理等优点而作为常用的桥血管之一,但其容易发生术后再狭窄或闭塞而难以维持通畅性。血栓形成、内膜增生、动脉粥样硬化等诸多机制导致大隐静脉再狭窄,如何预防再狭窄并维持其通畅性有着极其重要的临床意义。脂联素（ADP）是具有抗炎、抗动脉粥样硬化、抗凋亡、促血管生成作用的生物因子,由脂肪组织特异性分泌。最新研究表明,脂联素受体可在内皮细胞和成纤维细胞表面表达,并参与静脉移植术后再狭窄过程。本章拟通过建立大鼠自体静脉移植模型进而模拟CABG手术过程,使用不同剂量的ADP蛋白涂抹于移植静脉的血管表面,旨在探讨ADP对移植术后静脉桥血管再狭窄发生过程的影响。方法利用吻合袖带技术将SD大鼠自体颈静脉移植于颈动脉间,建立大鼠自体静脉移植模型。两组不同剂量的ADP（2.5μg和7.5μg）以30%Pluronic F-127凝胶作为载药材料,均匀涂抹于大鼠移植静脉血管表面,以不治疗组（仅自体移植）和涂抹30%Pluronic F-127凝胶组作为对照。观察并比较术后不同处理组间移植静脉管壁厚度,PCNA、VCAM-1和ICAM-1免疫组织化学表达及Western Blot检测等方法评价ADP对移植静脉的影响。结果各组手术均成功,术后28天采集标本对照组移植静脉增厚、管壁僵硬、周围组织粘连较明显,高剂量ADP组静脉无明显扩张,周围组织分离容易。术后从第3天起,ADP处理组移植血管内膜和外膜PCNA指数均明显低于对照组和胶水组（P<0.01）,移植后28天免疫组化检测表明ADP处理组移植静脉VCAM-1和ICAM-1表达明显下调（P<0.01）,Western Blot检测结果呈现相同趋势。术后28天,两组ADP处理组移植静脉的内膜、中膜和外膜厚度均低于对照组和胶水组（P<0.01）,且高剂量ADP相较于低剂量ADP抑制管壁增厚效果更明显（P<0.05）。结论本研究通过建立大鼠自体静脉模型,利用移植静脉表面局部涂抹不同剂量ADP的方式探究ADP对静脉再狭窄的抑制作用。结果显示,脂联素处理可达到抑制内膜和外膜细胞增殖的效果,并下调VCAM-1和ICAM-1的表达。该结果暗示ADP可减轻移植静脉内膜、中膜和外膜增生,并联合下调与再狭窄过程相关的VCAM-1和ICAM-1蛋白的表达,最终达到抑制移植静脉再狭窄的作用。本研究结果为深入研究ADP作用于血管再狭窄的过程奠定基础,为实验阶段研究血管再狭窄提供可行的操作方法。第二部分脂联素转基因家蚕品系的建立及蚕丝材料血管外支架制备目的为解决CABG术后移植静脉再狭窄问题,大量研究致力于明确再狭窄的机制及预防改善的措施。医学跨生物材料等学科交叉领域的兴起,为解决临床医学难题提供了新的视角。ADP在抑制静脉再狭窄方面的作用本研究前半部分已证明,此外,血管外支架也在抑制桥血管再狭窄维持通畅性方面具有重要意义。血管外支架可创造保护性环境促进静脉富含微血管的新外膜形成,还可限制移植静脉植入后的迅速扩张,并向血管施加对称性压力以减轻血管壁张力,形成层流并减少异常血流动力。联动ADP和血管外支架的作用共同抑制桥静脉再狭窄是本研究的主要问题。蚕丝优异的力学性能、良好的生物相容性和可调节的生物降解性等特点,符合防治移植静脉再狭窄的血管外支架材料应具备的条件。生物学领域,利用转基因技术以家蚕作为生物学反应器重组表达外源蛋白的技术日趋成熟。本章研究通过家蚕中部丝腺表达系统重组表达外源蛋白策略,构建可遗传的ADP转基因家蚕品系,高效、快速获得大量具有生物学活性的ADP;在此基础上,应用ADP转基因蚕丝制备非限制性ADP蚕丝血管外支架,并通过材料学研究方法分析其性能,为开发使用转基因蚕丝的血管外支架新型材料防治移植静脉再狭窄奠定研究基础。方法利用家蚕丝胶表达系统构建rh ADP转基因表达载体,通过显微注射技术注入Dazao家蚕蚕卵中,荧光筛选rh ADP转基因蚕茧。通过SDS-PAGE和Western Blot检测及定量rh ADP蛋白,获得稳定的rh ADP转基因家蚕品系。提取基因组以明确ADP基因的插入位点,通过免疫荧光实验检测rh ADP蛋白在蚕丝中的分布。调查rh ADP转基因家蚕品系的经济性状,比较rh ADP转基因蚕茧与WT蚕茧微观结构、二级结构及力学性能。提取并浓缩rh ADP蛋白,通过毒性实验、促细胞增殖及抗炎活性检测rh ADP的生物学活性。使用rh ADP转基因蚕茧作为材料制备血管外支架,并通过扫描电镜、FTIR、力学性能检测和吸水性检测对血管外支架进行表征。结果成功建立rh ADP转基因家蚕品系并在转基因蚕丝中检测到rh ADP蛋白的表达;通过Western Blot定量估算得到每克蚕丝中约含有7mg rh ADP蛋白,同时发现家蚕对rh ADP的表达存在修饰,蛋白存在聚体结构。鉴定rh ADP基因插入位点时发现ADP基因以单拷贝形式插入家蚕第10号染色体。从rh ADP转基因蚕茧中提取并浓缩蛋白,细胞水平实验结果显示家蚕表达的rh ADP蛋白无明显细胞毒性,可促进3T3-L1前脂肪细胞增殖,并可抑制LPS诱导巨噬细胞raw264.7的炎症反应。rh ADP转基因蚕丝与WT蚕丝相比,微观结构、二级结构及力学性能无明显差异,且不影响蚕茧产量。成功制备rh ADP转基因蚕茧制备的血管外支架,扫描电镜显示外支架纵切面成蜂窝状结构,二级结构分析外支架β-折叠含量明显升高,力学性能检测显示血管外支架断裂强度达到0.14MPa,吸水性检测显示外支架吸水随着时间延长逐渐饱和,未发生明显形变,最终重量达到初始重量的100倍左右。结论本研究以家蚕作为生物反应器利用ser-1表达系统在家蚕丝胶层表达rh ADP蛋白,建立rh ADP转基因家蚕品系。同时提取浓缩获得大量具有生物学活性的rh ADP蛋白。此外,鉴于蚕丝具备作为血管外支架的条件,创新性的利用rh ADP转基因蚕丝材料研制出非限制性血管外支架,通过医学与生物材料交叉研究初探其可行性与应用性。
卢晓峰[4]（2021）在《冠状动脉心肌桥患者的急性心肌梗死风险模型及不同手术预后对比的荟萃分析》文中认为目的与背景:冠状动脉心肌桥是一种先天性冠脉疾病,常合并严重的不良心血管事件,但目前尚缺乏对冠状动脉心肌桥患者发生急性心肌梗死的风险预测模型。药物疗效不佳的冠状动脉心肌桥患者往往需要手术治疗（外科手术与介入手术）,但目前并没有对比两种术式确切的临床研究结果。方法:利用Cite Space软件对冠状动脉心肌桥领域进行文献计量学分析。然后收集我院2013-2019年冠状动脉心肌桥住院患者数据,以70%和30%随机分为训练集和验证集。通过训练集数据筛选出冠状动脉心肌桥发生心肌梗死的危险因素,纳入多因素Logistics回归分析。完成建模后采用列线图进行可视化评分,并通过绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积以及C统计量以评估模型区分度。并绘制Calibrate校正曲线,采用Hosmer-Lemeshow检验进行拟合优度检验。然后用临床决策曲线分析法与临床影响曲线评估模型效力。最后通过系统性检索文献,对外科手术与介入手术治疗冠状动脉心肌桥患者的疗效与预后进行荟萃分析。结果:1.文献计量学分析共纳入2081篇文献,48900条参考文献。可视化分析显示近30多年来冠状动脉心肌桥的研究文献总体呈增长趋势,领域内顶级期刊发文量较大,心肌梗死是该领域的主要研究热点。2.共计获取399条MB患者住院记录,排除重复、缺失和陈旧性心肌梗死案例,有347例符合条件的MB患者。其中243例纳入训练数据集,104例患者纳入验证数据集。两个数据集的患者基本临床信息无统计学差异。单因素Logistics回归分析提示共有15个影响因素p值小于0.10,包括性别、身高、心功能异常、冠心病病史、糖尿病病史、吸烟史、左室舒张功能障碍、EF值、中性粒细胞数、NLR、LDH、D二聚体、HDL、TG/HDL、TCHO/HDL。相关性分析提示身高与性别、中性粒细胞数与NLR、TG/HDL与TCHO/HDL具有显着相关性。15个潜在预测因素纳入LASSO回归分析,经过压缩后所选取的最简模型共纳入8个影响因素,包括EF值、LDH、D二聚体、冠心病病史、吸烟史、左室舒张功能障碍、中性粒细胞数与TCHO/HDL。根据入选的8个预测因素构建多因素Logistics回归模型,并绘制列线图。从模型区分度、校准度检验模型的有效性。训练数据集的ROC分析显示AUC值为0.956（95%CI:0.912-0.999）,特异性为0.885,敏感性为0.923;验证数据集的ROC分析显示AUC值为0.862（95%CI:0.758,0.965）,特异性为0.898,敏感性为0.750。训练数据集与验证数据集的校正曲线显示该模型校准度良好。基于训练数据集的决策曲线分析显示该模型在各类人群中均有良好的临床净获益;根据临床影响曲线分析可知当预测阈值概率为0.8时预测阳性病人数与实际阳性病人数基本一致。3.通过系统性文献搜索共获取3584篇英文文献,1678篇中文文献,去除重复后共计4019篇文献。最终纳入33项研究,共计1286例患者进行定性分析。其中26项研究共计572例患者纳入Meta分析。单个率的Meta分析显示:手术治疗冠状动脉心肌桥的总体症状缓解率为88.00%（95%CI:81.31%～93.56%）,总体术后血管再狭窄率为9.09%（95%CI:4.30%～15.05%）,术中并发症及术后心血管事件率分别为0.59%（95%CI:0.00%～1.83%）、0.46%（95%CI:0.00%～1.63%）。Meta回归分析显示术后症状缓解率、血管再狭窄率与不同手术方式具有相关性（p<0.001）,而与样本量、发表年份、国家无关（p>0.1）。亚组分析显示外科手术术后症状缓解率（95.45%vs 67.21%,p<0.001）、血管再狭窄（3.89%vs 24.33%,p<0.001）与术后心血管事件（0.01%vs 2.91%,p<0.001）均优于介入手术,外科手术和介入手术在术中并发症发生率（1.65%vs 0.00%,p=0.1405）无明显差异。结论:1.冠状动脉心肌桥作为先天性冠脉疾病之一,心肌梗死是其主要研究热点,仍值得进一步探索研究。2.本研究模型通过采集MB患者的基本病史,结合常规临床化验结果与心脏彩超数据,通过绘制列线图可以方便地计算出MB患者发生急性心肌梗死的风险概率,进而为临床的精准诊疗提供决策建议。3.当前证据表明,外科手术相对于介入手术在治疗冠状动脉心肌桥具有较高的术后症状缓解率和较低的血管再狭窄率,不过仍需开展更高质量的大样本随机对照研究加以验证。
曹丽娟[5]（2020）在《基于miR-1183/PTEN/Akt信号通路探讨苏木提取物在血管再狭窄中的抗炎机制》文中研究表明目的:通过生物信息学挖掘血管再狭窄的潜在靶点,并构建内皮细胞损伤模型和血管再狭窄大鼠模型,应用苏木提取物进行干预,探讨苏木提取物抑制血管炎症及血管再狭窄的作用机制。方法:第一部分:生物信息学挖掘血管再狭窄相关靶点:由美国NCBI的GEO公共数据平台获取血管再狭窄miRNA芯片GSE60959数据,利用在线分析工具矩阵,探针注释文件筛选差异miRNA。选取芯片中差异显着miRNA为研究目标。第二部分:苏木提取物对内皮细胞增殖的影响。将HUVECs分为空白组、miR-1183过表达组、miR-1183过表达加苏木含药血清组。采用基因转染内皮细胞进行模型复制,其中空白组内皮细胞完全培养基孵育48h;miR-1183过表达组细胞转染36h+内皮细胞完全培养基孵育12h;miR-1183过表达加苏木含药血清组转染36h+1μg/ml苏木含药血清12h;应用RT-PCR法检测miR-1183m RNA的表达,MTT法检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16水平;通过在线工具Targctscan分析靶基因,通过双荧光素酶实验进行验证,将预测到的基因进行功能分析;RT-PCR法检测PTEN m RNA的表达;Western-blot法检测PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κB p65蛋白的表达。第三部分:苏木提取物对血管再狭窄的影响及其分子机制研究。本实验选取SD大鼠40只随机分为空白组、模型组、苏木提取物组和阿托伐他汀组,除空白组外,其余三组通过钢丝接触法构建大鼠股动脉再狭窄模型。从模型复制的第28日起,各组给予相应的药物干预,其中空白组和模型组给予等体积的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,苏木提取物组和阿托伐他汀组分别给予苏木提取物混悬液和阿托伐他汀混悬液灌胃治疗,均每日一次,连续灌胃28天。灌胃结束后观察各组大鼠的一般状态及体重变化;RT-PCR法检测股动脉组织中miR-1183m RNA的表达水平;HE染色观察大鼠股动脉病理形态,管腔直径及内膜厚度;免疫组化法检测股动脉组织中PTEN、Akt、p-Akt蛋白的表达水平;ELISA法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16水平;Western blot检测股动脉组织中PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κB p65蛋白的表达。结果:第一部分:通过生物信息学预测,芯片数据库中共筛选198个差异性表达miRNAs,其中89个miRNAs表达水平显着上调;109个miRNAs表达水平显着下调,本研究中取差异明显的miR-1183进行研究。第二部分:1.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着抑制HUVECs中miR-1183m RNA的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。2.miR-1183过表达加苏木含药血清组能够显着增加HUVECs的细胞活力,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。3.miR-1183过表达加苏木含药血清组能够显着抑制HUVECs的总凋亡水平,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。4.通过在线工具Targctscan分析靶基因,发现miR-1183与PTEN存在结合位点,取预测到的基因进行功能分析,双荧光素酶报告基因实验证实PTEN基因是miR-1183作用的潜在靶基因。5.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着抑制HUVECs中Bax蛋白的表达水平,上调Bcl-2蛋白的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。6.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着降低HUVECs细胞上清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16的含量,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。7.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着抑制HUVECs中NF-κB p65蛋白的表达水平,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。8.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着抑制HUVECs中p-Akt蛋白的表达,升高PTEN蛋白的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;而对Akt蛋白的表达水平无明显影响,与miR-1183过表达组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。9.miR-1183过表达加苏木含药血清组能显着升高HUVECs中PTEN m RNA的表达,与miR-1183过表达组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。第三部分:1.苏木提取物组能够改善血管再狭窄模型股动脉病理形态的改变。2.苏木提取物组能够下调动物模型中miR-1183m RNA的表达,与模型组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。3.苏木提取物组能显着抑制大鼠股动脉Bax蛋白的表达水平,上调Bcl-2蛋白的表达,与模型组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。4.苏木提取物组能显着降低大鼠股动脉血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18及细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16的含量,与模型组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。5.苏木提取物组能显着抑制大鼠股动脉NF-κB p65蛋白的表达水平,与模型组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。6.苏木提取物组能显着抑制大鼠股动脉p-Akt蛋白的表达,升高PTEN蛋白的表达,与模型组比较,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;而对Akt蛋白的表达水平无明显影响,与模型组比较,差异无统计学意义（P>0.05）结论:1.miR-1183在血管再狭窄患者中呈高水平表达。2.miR-1183可以促进血管内皮细胞凋亡,并促进炎症因子和细胞因子的分泌。3.苏木提取物能够下调内皮细胞中miR-1183的表达,进而通过PTEN/Akt信号通路抑制内皮细胞凋亡,达到抑制血管再狭窄的作用,这可能是其防治血管再狭窄的作用机制之一。
唐琴,郭毅佳,胡任重,唐镱方,王晓庆,张玉娇,林亚鹏,郝军莉,杨杰[6]（2020）在《颈动脉内膜切除术围手术期抗血小板治疗：系统评价和meta分析》文中研究指明目的评估颈动脉内膜切除术（carotid endarterectomy,CEA）患者围手术期使用双重抗血小板治疗（dual antiplatelet treatment,DAPT）或单一抗血小板治疗（single antiplatelet treatment,SAPT）的有效性及安全性。方法检索PubMed、Embase、Cochrane、Web of Science、中国知网、万方、维普和相关临床试验注册平台（检索时间为建库至2020年1月）,纳入评估CEA围手术期患者使用DAPT和SAPT的队列研究或随机对照试验。卒中、心肌梗死、血管再狭窄及复合终点指标（卒中或心肌梗死或血管再狭窄）为有效性结局指标,死亡、任何出血性事件为安全性结局指标。使用Review Manager 5.3、STATA 15.1软件进行meta分析。结果检索出11篇符合入选标准文献,共纳入123 748例患者。Meta分析结果显示:与SAPT相比,CEA患者围手术期DAPT未显着降低卒中[相对危险度（relative risk,RR）=0.82,95%置信区间（confidence interval,CI）（0.66,1.01）,P=0.06]、心肌梗死[RR=1.31,95%CI（0.92,1.87）,P=0.13]、血管再狭窄[RR=0.55,95%CI（0.18,1.68）,P=0.29]和复合终点事件[RR=0.90,95%CI（0.59,1.37）,P=0.62]的风险。两组间死亡率[RR=0.99,95%CI（0.44,2.22）,P=0.97]差异无统计学意义,DAPT组发生任何出血性事件风险更高[RR=1.64,95%CI（1.08,2.50）,P=0.02]。结论 CEA患者围手术期DAPT未能显着降低复发血管事件,但可能增加任何出血性事件风险。因此,CEA围手术期使用SAPT可能优于DAPT。
杨博文[7]（2020）在《急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊植入药物洗脱支架后支架内再狭窄发生的相关因素分析》文中指出目的:通过观察急诊药物洗脱支架植入后,急性ST段抬高型心肌梗死（ST segment elevation myocardial infarction,STEMI）患者复查时出现支架内再狭窄情况,探究支架内再狭窄发生的相关性因素。方法:通过回顾性研究,选取2014年01月01日至2016年12月31日因STEMI在长海医院急诊PCI植入药物洗脱支架且术后按时服药的病例,手术均由同一个手术团队完成,所有患者术后在10-14个月按时来院复查冠脉造影,对比急诊支架植入时和复查造影时同一个造影体位内支架内血管的情况。最终纳入研究的病例共计250例,按照检查结果分为再狭窄组和非再狭窄组2组。需要收集的观察指标包括:1.STEMI的危险因素,包括性别、年龄、高血压史、2型糖尿病史、吸烟史等;2.所有研究患者急诊术中情况,包括病变部位、侵犯的血管位置、血管阻塞情况、支架的参数、是否进行支架内高压后扩张、是否存在血栓负荷、术中是否发生慢血流或无复流等;3.相关影像学及实验室检查结果,包括支架植入处的再狭窄程度、发病时及复查时甘油三酯（TG）、发病时及复查时低密度脂蛋白胆固醇等（LDL-C）。结果:研究对象选自2014年01月01日至2016年12月31日因STEMI在长海医院急诊PCI植入药物洗脱支架且术后按时服药的患者,最终纳入的250个病例中,男性203例,占81.2%;女性47例,占18.8%。年龄区间为29岁-91岁,平均年龄62.6±11.9岁。根据血管再狭窄情况发生与否将所有病例分为再狭窄组和非再狭窄组2组,其中再狭窄组患者共有33例,非再狭窄组患者217例。统计结果显示,在本次研究中,性别、年龄、吸烟史、2型糖尿病史、高血压史对STEMI治疗后再狭窄情况的出现没有统计学影响（P>0.05）。再狭窄组33例中,有17例术中进行了高压后扩张处理,16例未进行高压后扩张处理,术中是否进行高压后扩张处理对支架内再狭窄无统计学相关（P=0.969）。33例患者中27例未发现明显的血栓负荷,占总样本10.8%,6例术中发生可见血栓负荷,占总样本2.5%,血栓负荷对于患者在复查时发生支架处血管再狭窄无统计学相关（P=0.457）。所有样本中,未出现慢血流或无复流发生的病例共222例,其中发生再狭窄者29例,占比13.06%;出现慢血流或无复流的病例28例,其中再狭窄发生4例,占比14.28%,慢血流或者无复流与支架内再狭窄无统计学相关（P=0.857）。通过心电图诊断病变部位,所有患者中前壁心肌梗死患者66例,占总样本26.4%;前间壁心肌梗死患者8例,占总样本的3.2%;下壁心肌梗死患者58例,占总样本的23.2%;广泛性心肌梗死患者人数最多,为114例,占比45.6%;另有后壁心肌梗死患者1例,右室心肌梗死患者3例,统计结果显示,2组患者在病变部位方面不存在统计学差异（P=0.087）。关于病变侵犯的血管位置,左前降支（LAD）112例,左回旋支（LCX）47例,右冠状动脉（RCA）84例,左主干（LM）4例,钝缘支（OM）2例,2组在病变侵犯的血管位置方面不存在统计学差异（P=0.297）。血管闭塞程度方面,完全闭塞者105例,占比42.0%;不完全闭塞者145例,占比58.0%,再狭窄组与非再狭窄组在血管闭塞程度方面不存在统计学差异（P=0.481）。发病时,再狭窄组的LDL-C为2.53±0.73mmol/L,非再狭窄组为2.84±0.84mmol/L,独立样本检验显示两组间存在统计学差异（P<0.01）,提示发病时LDL-C水平与再狭窄呈负相关;复查时,再狭窄组的LDL-C为1.73±0.71mmol/L,非再狭窄组为1.86±0.61mmol/L,独立样本检验显示两组间无统计学差异（P=0.606）。发病时,再狭窄组的TG值为2.65±3.11mmol/L,非再狭窄组为1.66±0.83mmol/L,独立样本检验提示两组存在显着统计学差异（P<0.01）;复查时,再狭窄组TG为1.80±1.55mmol/L,非再狭窄组为1.39±0.78mmol/L,独立样本检验提示两组存在显着统计学差异（P<0.01）,提示发病和复查时的TG水平与支架处血管再狭窄情况的发生呈正相关。多因素分析结果提示,发病时的TG水平是发生术后再狭窄的独立影响因素。发病时的TG水平是发生STEMI术后再狭窄的独立危险因素,在一定范围内,TG每升高1个单位,患者发生STEMI术后再狭窄的概率即上升为之前的1.498倍。植入支架的参数包括支架个数、支架长度和支架直径,统计结果表明,在支架个数、长度和直径方面,再狭窄组与非再狭窄组均未发现统计学差异（P>0.05）,说明在本研究中STEMI患者术后是否发生再狭窄与支架参数之间未发现相关性。结论:1.STEMI术后支架内再狭窄与是否进行支架内高压后扩张、术中是否发生慢血流或无复流、术中是否存在血栓、病变部位、侵犯血管的位置和血管阻塞程度,以及支架个数、长度、直径等相关参数无明显相关性。2.STEMI术后支架内再狭窄与患者性别、吸烟史、高血压病史、2型糖尿病病史之间无明显相关性。3.发病时的甘油三酯水平是发生STEMI术后再狭窄的独立危险因素,在一定范围内,TG每升高1个单位,患者发生STEMI术后再狭窄的概率即上升为之前的1.498倍。
吴玉婷[8]（2020）在《木犀草素通过转化生长因子β受体1抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移及血管内膜增生的作用研究》文中进行了进一步梳理研究背景及目的:既往研究显示,血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）由中膜迁移至内膜并异常增殖与血管再狭窄及所致相关疾病的发生、发展关系密切。相关临床及基础研究均提示补阳还五汤是防治冠状动脉粥样硬化性心脏病及血管再狭窄的有效药物,木犀草素（Luteolin）是补阳还五汤红花中所含黄酮类化合物之一,具有多种心血管保护作用,但其具体作用机制尚未完全阐明。本研究旨在通过体内外实验探索及验证木犀草素通过转化生长因子 β 受体 1（Transforming growth factor β receptor 1,TGFBR1）抑制 VSMC 增殖、迁移及血管内膜增生的作用,进一步明确补阳还五汤发挥防治血管再狭窄及相关疾病的物质基础,为中医中药防治血管再狭窄及所致相关疾病的临床应用提供科学依据。方法:体外实验:用不同浓度木犀草素（10,20,40μM）处理大鼠胸大动脉血管平滑肌细胞（A7r5）和人主动脉血管平滑肌细胞（HASMC）后,采用MTS、EdU染色、Transwell、细胞划痕实验、Western blot等实验方法检测木犀草素对VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路激活的影响。并进一步通过分子对接及分子动力学模拟、表面等离子共振技术、TGFBR1体外酶活性等实验验证木犀草素与TGFBR1间的相互作用;使用过表达TGFBR1腺病毒（Ad-TGFBR1）在A7r5和HASMC中过表达TGFBR1,构建过表达TGFBR1细胞模型,进一步验证TGFBR1在木犀草素抑制VSMC增殖及迁移中的作用。体内实验:结扎小鼠左侧颈总动脉模拟损伤血管内膜增生,采用HE染色及免疫组化等实验技术检测木犀草素对损伤血管内膜增生的抑制作用及对TGFBR1的调控。并进一步通过构建过表达TGFBR1腺相关病毒载体,在血管组织中制备过表达TGFBR1基因的左侧颈总动脉结扎内膜增生模型,验证TGFBR1在木犀草素抑制损伤血管内膜增生中的作用。结果:体外实验:与对照组比,木犀草素能浓度依赖性的抑制VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路的激活（P<0.05）;过表达TGFBR1后,木犀草素抑制VSMC增殖、迁移及TGFBR1信号通路激活的作用被部分抑制（P<0.05）。体内实验:与模型组比,木犀草素能抑制损伤血管内膜增生及TGFBR1信号通路的激活（P<0.05）;过表达TGFBR1后,木犀草素抑制损伤血管内膜增生及TGFBR1信号通路激活的作用被部分抑制（P<0.05）。此外,分子对接及分子动力学模拟、表面等离子共振技术、TGFBR1体外酶活性等实验亦提示:木犀草素可直接靶向作用TGFBR1,可作为潜在的TGFBR1抑制剂。结论:木犀草素可通过抑制TGFBR1信号通路的激活,抑制VSMC增殖、迁移及血管内膜增生,进而发挥防治血管再狭窄及相关疾病的作用。
朱兴兴[9]（2020）在《苦豆碱诱导自噬减轻球囊损伤后血管再狭窄》文中进行了进一步梳理研究背景:血管再狭窄是血管成形术后再狭窄等多种心血管疾病的病理基础,而血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）的增殖与迁移在血管再狭窄等心血管疾病中起着关键的病理生理作用。血管平滑肌细胞是构成血管壁结构的主要细胞成分,血管平滑肌细胞异常增殖被认为是血管再狭窄等心血管疾病的病理基础。在某些因子刺激下,血管平滑肌细胞能够表现出异常增殖,呈现与肿瘤细胞相似的生物学行为,且二者许多信号转导途径一致。因此,将抗肿瘤药物用于治疗血管增生性疾病可能是一种新的治疗策略正在被大量研究。而苦豆碱（Aloperine）,来源于苦豆子（Sophoraalopecuroides L.）,具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗肿瘤、抗氧化应激等药理作用,而且还对肾脏、神经元、肺血管重构有保护作用,预示了苦豆碱可能作为防治心血管疾病的潜在药物。研究目的:血管再狭窄的病理生理过程中血管平滑肌细胞的异常增殖和迁移起到了关键的作用。而苦豆碱最近已被证实可以抑制肺动脉血管平滑肌细胞的增殖,因此能够抑制肺动脉血管重构,从而改善肺动脉高压。但是,苦豆碱对球囊损伤后的血管平滑肌细胞的增殖及迁移的影响及作用机制尚不明确。因此,产生了对苦豆碱对球囊损伤后的血管平滑肌细胞的增殖及迁移的作用研究的浓厚兴趣,而且有必要阐明其中的作用及机制。研究方法:本研究中应用苏木精/伊红（HE）染色和免疫组织化学染色测定大鼠颈动脉组织的增殖及收缩表型,使用CCK8和EdU染色测定血管平滑肌细胞的增殖水平,蛋白印迹法测定自噬以及增殖、收缩表型相关蛋白的表达水平,通过透射电子显微镜、共聚焦显微镜定位自噬体,应用划痕实验评估苦豆碱对血小板衍生生长因子（PDGF-BB）刺激的血管平滑肌细胞的迁移能力的作用。而且,还使用特异性自噬抑制剂评估苦豆碱对自噬的影响。研究结果:动物实验中,BI+ALO组的颈动脉壁面积比BI组明显降低（P<0.05）,表明球囊损伤后予以苦豆碱处理能够减轻血管内膜增生。与BI组相比,BI+ALO组的PCNA蛋白表达减少（P<0.01）,证明苦豆碱能够抑制球囊损伤后血管的增殖,SM22α蛋白的表达显着升高（P<0.01）,证实苦豆碱可以抑制血管平滑肌细胞表型转换,LC3-Ⅱ蛋白表达明显升高（P<0.05）,表明苦豆碱可以上调血管平滑肌细胞的自噬。细胞实验中,与PDGF组比,PDGF+ALO组的EdU结果显示苦豆碱可以抑制血管平滑肌细胞的增殖（P<0.01）,PCNA的表达水平降低（P<0.05）,进一步验证苦豆碱抑制血管平滑肌细胞的增殖,LC3-Ⅱ蛋白的表达增加（P<0.01）,p62蛋白的表达也明显增加（P<0.05）,进一步证实苦豆碱可以上调血管平滑肌细胞的自噬,迁移面积百分比明显降低（P<0.05）,证实苦豆碱可以抑制血管平滑肌细胞的迁移。而加了 3-MA共同处理后,能够逆转苦豆碱抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移的作用,以及诱导自噬的作用。研究结论:我们的研究结果表明,苦豆碱能够改善球囊损伤后血管再狭窄,通过诱导自噬抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞的增殖和迁移。
张润军[10]（2019）在《pH和ROS双响应性靶向纳米药物的构建及其防治血管再狭窄的应用研究》文中提出研究背景:心血管疾病（CVD）是全世界发病率和死亡率的主要原因。据估计,心血管病每年可导致1790万人死亡,约占全球死亡总数的31%。研究表明,血管炎症与多种心血管疾病的发病机制密切相关,如动脉粥样硬化、心肌梗死、再狭窄、颅内动脉瘤和主动脉瘤、卒中和外周动脉疾病。通过调节参与炎症反应的不同分子和细胞过程,已经有大量的治疗方法被研究用来预防和治疗心血管病。尽管在临床前研究方面取得了重大成果,但大多数已检测的抗炎药物的理想疗效尚未在临床实践中得到充分证明。在很大程度上,这可能与治疗分子递送到血管炎症部位的效率低下有关,这是由于它们的非特异性分布和从循环中被快速消除造成的。即使是炎症血管内局部吸收的药物,由于扩散不受控制,滞留时间也很短。近年来,基于纳米粒的靶向治疗被认为是一种很有前景的策略,可以特异性地递送不同的治疗和成像药物,用于检测或治疗血管炎症。尤其广泛的纳米粒已被设计作为靶向载体治疗动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭、缺血再灌注损伤、严重的肢体缺血、再狭窄、腹主动脉瘤和缺血性卒中。在这些例子当中,聚合脂质纳米粒、脂质体、重组高密度脂蛋白、来源于细胞的囊泡、无机纳米粒和金属纳米粒以及混合纳米粒被用于递送治疗药物,从小分子药物、多肽/蛋白质到核酸,治疗与血管炎症相关的心血管疾病。除了通过受损的内皮细胞层或EPR效应被动靶向到血管病变部位,纳米粒还可通过调节它们的物理性质（如几何结构和顺应性）,分子基团的修饰或特殊细胞膜的功能化,使血管靶向效率得到进一步提高。另一方面,可以根据血管炎症部位异常变化的生物化学信号,设计合成纳米粒的组成成份,有针对性地释放药物载荷。然而,这些血管靶向纳米治疗的转化仍然具有很大的挑战性。虽然直接调控抗原特异性亲和力可以增强纳米粒在血管的聚集,但仅用分子基团修饰后,纳米粒的靶向效率仍然非常有限。对于以细胞膜为基础的仿生策略衍生的纳米药物治疗,其相对复杂的配方流程和不明确的成分可能会妨碍其后续的大规模生产和临床研究。此外,需要进一步改进对感兴趣的血管病变部位的不可控的释放。越来越多的证据表明,双重或多重刺激响应性纳米粒能够在其作用的部位更精准地控制负载药物的释放,大大提高了药物的递送效率。在这方面,对多种生物化学信号或生物化学/物理信号敏感的纳米粒已被广泛用于肿瘤、糖尿病、炎症等多种疾病的靶向治疗。然而,基于这些响应性纳米粒治疗的临床转化并不简单,在很大程度上主要是由于更复杂的药物研发,尤其是在可重复性和质量控制方面。此外,针对目前大多数靶向血管的响应性纳米载体,体内安全性是另外一个重要的问题,尤其对于慢性疾病的治疗,因为大多数静脉注射纳米粒被单核吞噬细胞系统清除并聚集于肝脏和脾脏等器官。因此,亟待开发能够响应与血管炎症相关的生物化学信号,具有理想的靶向能力和良好的药物控释性能且更为有效和安全的纳米药物递送平台。通过对环糊精的化学功能化,最近开发了一系列在酸性和氧化应激条件下具有高度可调控水解行为的响应性材料。体外细胞培养和不同动物模型的在体实验研究结果证明,基于这些载体材料构建的纳米粒对低pH值和高ROS刺激具有较好的响应性及良好的生物安全性。鉴于血管内皮损伤后局部存在炎症微酸性环境和增高的氧化应激,通过整合优化活性氧和pH响应性的环糊精材料的比例,构建活性氧和pH双响应性纳米粒,可以作为一种新型有效和安全的纳米平台,用于血管炎症部位的药物递送。此外,结合分子靶向策略还可以进一步增强血管的靶向性和体内双响应性纳米粒治疗的有效性。本研究课题基于前期合成的pH响应性和活性氧（ROS）响应性的载体材料,以雷帕霉素为模型药物,构建了pH和ROS双响应的纳米药物递送系统,在大鼠颈动脉球囊损伤的血管炎症模型中,通过与非响应性、pH或ROS单一响应性纳米粒治疗比较,考察和评价了pH和ROS双响应性纳米粒的治疗优势以及双响应性主动靶向载药纳米粒在体防治血管再狭窄的效果。研究内容:1.基于β-CD的载体材料的合成1.1 pH响应性β-环糊精材料（ACD）的合成先将1 g β-CD 溶解在8 mL无水DMSO中,然后加入4 mL的2-甲氧基丙烯（MP）,磁力搅拌溶解并与有机试剂充分混匀,最后加入16 mg的吡啶对甲苯磺酸盐（PTS）。室温条件下反应3 h,然后加入0.3 mL三乙胺终止反应。得到的产物加超纯水沉淀,离心,洗涤3次冻干得到白色粉末。1.2 活性氧响应性β-环糊精材料（OCD）的合成将5.55 g 4-PBAP加入到36 mL无水二氯甲烷（DCM）中充分溶解,然后加入7.65 g 1,1’-羰基二咪唑（CDI）。室温条件下磁力搅拌反应0.5 h,再加入40 mL DCM,用30 mL超纯水洗涤三次。再用饱和NaCL洗涤有机相,无水Na2SO4干燥,真空浓缩得到 CDI 活化的 PBAP（CDI-PBAP）。随后,将 250 mg β-CD 和 1.52 g CDI-PBAP 加入至20 mL无水二甲基亚砜中,再加入800 mg DMAP反应过夜。最后,加入超纯水沉淀、离心收集,洗涤三次后冻干得到白色粉末。采用FT-IR和1H NMR对合成的上述两种响应性载体材料进行表征。2.不同纳米粒的制备采用纳米沉淀/自组装法制备基于不同材料的载RAP纳米粒。具体过程如下:精确称取 50 mg PLGA,ACD,OCD或ACD/OCD以不同的质量比混合（80:20、60:40、50:50、40:60、20:80）的载体材料和10 mg RAP共同溶于2 mL有机溶剂中,得到有机相。对于PLGA和ACD纳米粒,使用乙腈;OCD纳米粒,使用无水甲醇;ACD/OCD采用1:1（v/v）无水甲醇和乙腈混合溶剂制备有机相。另将0.6 mL卵磷脂无水乙醇溶液（10mg/mL）和9 mg DSPE-PEG2000溶解在10 mL的去离子水中,油浴加热至65℃ 1 h。然后,将有机相缓慢加入至上述的预热溶液中,磁力搅拌2 h。最后获得的纳米粒溶液用去离子水透析24 h,冻干后即得到不同的载RAP纳米粒（RAP/ACD NP,RAP/AOCD NP,RAP/OCD NP及RAP/PLGA NP）。空白纳米粒,Cy5或Cy7.5荧光标记的纳米粒均通过类似的方法制备获得3.不同纳米粒的表征不同NPs在水溶液中的粒径及粒径分布,Zeta电位通过马尔文粒径仪检测。取新鲜制备的纳米混悬液,滴加到载膜铜网上,室温晾干后透射电子显微镜下观察纳米粒子形态并拍照采集图像。同样将制备好的纳米粒混悬液滴加至云母片,喷金晾干后采用透射电子显微镜观察纳米粒形态并拍照采集图像。载RAP纳米粒在加入适量无水甲醇和乙腈混合溶液后离心,取上清通过高效液相色谱法（HPLC）检测RAP载药量。此外,Cy5或Cy7.5的含量通过荧光光谱仪测定。4.不同空白纳米粒体外水解实验将不同的纳米粒分别分散于pH 5、pH 6、pH 7.4以及加入1 mM H202 0.01 M的PBS缓冲液中。37℃孵育不同时间后,于设定时间点采集样品测定纳米粒溶液在500 nm波长处的透光率。最后,根据透光率计算纳米粒的水解百分比。5.载雷帕霉素纳米粒的体外药物释放实验将新鲜制备冻干的pH/ROS双响应性载RAP纳米粒5 mg分别分散在8 mL不同pH值（pH 5、pH 6、pH 7.4）以及加入 1 mM H2O2 0.01 M 的 PBS 缓冲液中,置于37℃孵箱内震荡混匀。在既定的不同时间点,将含有纳米粒的溶液以19118 g离心,取适量上清液并补充等量相同介质。HPLC检测RAP药物浓度,绘制纳米粒的药物累积释放曲线。单一响应性载药纳米粒RAP/ACD NP和RAP/OCD NP仍用相同的方法检测其不同时间点的累积药物释放量,绘制相应药物释放曲线。6.纳米粒的细胞吞噬实验将鼠主动脉血管平滑肌细胞株（MOVAS）以2×105个/孔的密度接种于12孔板中,孵育24小时后,去除培养基并加入相同浓度的Cy5荧光标记的不同纳米粒,在37℃条件下与平滑肌细胞孵育不同的时间。观察前,用溶酶体探针LysoTracker Green染色标记晚期核内体和溶酶体,DAPI染色细胞核。采用共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）观察并采集荧光图像。同样,在平滑肌细胞孵育24小时后,加入不同浓度梯度的Cy5标记基于不同载体制备的纳米粒与细胞共同孵育6小时后,考察细胞对纳米粒的剂量依赖性吞噬。另外,通过流式细胞术定量细胞对Cy5标记的不同纳米粒的吞噬,荧光活化细胞分选（FACS）测定荧光强度。考察孵育时间及纳米粒剂量对血管平滑肌细胞吞噬行为的影响。7.不同载雷帕霉素纳米粒体外抑制rVSMCs增殖和迁移的作用研究MOVAS细胞以5000个/孔的密度接种于96孔板,37℃孵箱培养24 h后,改为含有0.5%FBS的新鲜DMEM培养基,同时加入血小板源生长因子PDGF-BB（20 ng/mL）及RAP终浓度为1 μM的不同载RAP纳米药物（RAP,RAP/PLGA NP,RAP/ACD NP,RAP/OCD NP及RAP/AOCD NP）。正常对照组加入培养基,阳性对照组仅加入PDGF-BB,继续培养24h后,用CCK-8法检测细胞活性。采用8 μm孔径的Transwell小室评价载不同RAP纳米粒对PDGF-BB诱导的大鼠VSMCs迁移的影响。将MOVAS细胞以2×105个/孔的密度接种于12孔板中。37℃卵孵箱培养24 h后,改为含有0.5%FBS的新鲜DMEM培养基,同时加入血小板源生长因子PDGF-BB（20 ng/mL）及RAP终浓度为1 μM的不同载RAP纳米药物（RAP,RAP/PLGA NP,RAP/ACD NP,RAP/OCD NP 及 RAP/AOCD NP）与平滑肌细胞共同孵育。阳性对照组加入PDGF-BB,而正常对照组不加PDGF-BB和游离的雷帕霉素。6 h后,胰酶消化收集细胞,200μL培养基重悬,将不同治疗组的细胞分别加至Transwell上室,下室则加入600 μL含0.5%FBS和20 ng/mL PDGF-BB的培养基。孵箱内静置8 h后,用棉签轻轻擦去Transwell膜上方未迁移的细胞。4%多聚甲醛固定细胞,0.1%结晶紫染色。最后光学显微镜下观察拍照,随机选取5个视野计数染色细胞的数量并进行统计学分析。8.细胞周期检测MOVAS细胞以5×105个/孔的密度接种于6孔板,37℃孵箱培养24 h后,改为含有0.5%FBS的新鲜DMEM培养基,同时加入血小板源生长因子PDGF-BB及RAP终浓度为1 μM的不同载RAP纳米药物（RAP,RAP/PLGA NP,RAP/ACD NP,RAP/OCD NP及RAP/AOCD NP）。正常对照组加入培养基,阳性对照组加入PDGF-BB。细胞与不同载药纳米粒共同孵育24 h后,胰酶消化并收集细胞,70%乙醇固定,4℃孵育过夜。通过洗涤后,将不同载药纳米粒干预的细胞与RNase在37℃条件下孵育30分钟,然后用碘化丙啶在4℃避光条件下进行细胞染色30分钟。最后通过流式细胞术检测平滑肌细胞在G1、S、G2/M期的比例并进行统计分析。9.免疫印迹分析将MOVAS细胞分别与不同载RAP纳米粒共同孵育24 h后,胰酶消化细胞,加入细胞裂解液,使细胞完全裂解,然后4℃条件下,12000 g离心30 min,收集上清,用BCA试剂盒测定蛋白浓度,进一步通过Western blotting检测细胞周期相关蛋白的表达水平。将含有50 μg蛋白的样本在10%十二烷基磺酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶上分离,电泳转移到硝酸纤维素膜上。5%脱脂牛奶封闭,在4℃条件下,将膜与一抗体孵育过夜:（1）Cyclin D1 抗体,稀释1:200;（2）p27kip1抗体,稀释1:250;（3）β-actin抗体,稀释1:1000。然后在37℃条件下,将膜与辣根过氧化物酶标记的二抗共同孵育1 h,二抗稀释倍数为1:1500。洗涤三次后,通过增强型化学发光试剂盒荧光成像显示特异性条带,同时进行半定量分析。10.不同纳米粒的细胞毒性实验研究将MOVAS细胞以10000个/孔的密度接种于96孔板,培养24 h后,加入不同浓度梯度的空白纳米粒（PLGA NP,ACD NP,OCD NP及AOCD NP）,共同孵育24 h后,CCK-8法检测细胞的活性。11.SD大鼠颈动脉球囊损伤再狭窄模型的建立雄性SD大鼠腹腔注射戊巴比妥麻醉起效后,颈部脱毛备皮,消毒,行颈前部正中切口,钝性分离皮下软组织及颈前肌肉组织,暴露颈动脉分叉,游离左侧颈总动脉及颈内、颈外动脉,将2F Fogarty取栓球囊导管由颈外动脉切口插入至颈总动脉近心端,PTCA压力泵以适当压力充盈球囊,旋转并回撤球囊至颈外动脉,重复三次,完全剥脱颈总动脉血管内皮。然后,尾静脉注射伊文思蓝评价血管内皮损伤情况。12.颈动脉损伤部位酸性炎症微环境和氧化应激水平的考察与评价采用细胞内pH荧光探针BCECF-AM对颈动脉损伤部位组织的pH值变化进行定性评价。在颈动脉球囊损伤模型建立后,于不同时间点取材损伤的颈动脉组织,O.C.T.包埋后,冰冻组织切片（8 pm）。然后,用10 μM ROS荧光探针DCFDA或5μM超氧阴离子荧光探针DHE分别对组织切片进行染色,检测球囊损伤局部组织ROS及超氧阴离子水平。另外,采用相应诊断试剂盒分别对损伤局部组织过氧化氢（H202）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性进行检测。ELISA试剂盒分别检测丙二醛（MDA）和髓过氧化物酶（MPO）的表达水平。同样,典型促炎细胞因子α-肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素1 β（IL-1 β）的表达水平也通过ELISA试剂盒分别检测。13.靶向Ⅳ型胶原的双响应性载RAP纳米粒的构建将靶向血管内皮下Ⅳ型胶原的多肽（KLWVLPKGGGC-Am）溶解在含有5 mmol/L EDTA的中性PBS缓冲液中,以二硫键/TCEP摩尔比1:1的比例,加入适量的TCEP断键溶液还原。然后,将多肽和DSPE-PEG-MAL以5:4的摩尔比,在4%乙醇溶液中,室温条件下磁力搅拌反应4h,合成KLWVLPKGGGC-DSPE-PEG三嵌段共聚物,未结合的游离肽通过透析去除。最后,将载体材料OCD/ACD以80:20质量比,DSPE-PEG-peptide/DSPE-PEG以1:9摩尔比混合,采用纳米沉淀自组装的方法,制备靶向IV型胶原的双响应性载RAP纳米粒。14.靶向纳米粒体外胶原结合实验的研究将Ⅳ型胶原溶解在0.25%醋酸中,配制浓度为0.5 mg/mL的胶原溶液。将100μL胶原溶液加入到96孔板中,4℃条件下孵育过夜。在胶原涂层或没有胶原涂层的孔板中先用50%血清封闭1 h后,再加入100μL用25%牛血清配制的Cy7.5荧光标记的双响应性靶向纳米粒（Cy7.5/TAOCD NP）,纳米粒浓度（0.2 mg/ml）。孵育1 h后,用包含0.05%吐温20的PBS缓冲液洗板3次。最后,通过IVIS光谱系统观察并拍摄孔板荧光图像。15.纳米粒体内靶向血管内皮损伤部位的研究大鼠颈动脉球囊损伤模型建立后,即刻经尾静脉分别注射Cy7.5荧光标记的不同纳米粒（Cy7.5/PLGA NP,Cy7.5/ACD NP,Cy7.5/OCD NP 及 Cy7.5/AOCD NP）,在体循环8 h后,取材完整的颈动脉及主要脏器,进行小动物活体荧光成像（IVIS）观察纳米粒在血管内皮损伤部位的荧光强度及组织分布情况并进行定量分析。另外,在颈动脉球囊损伤后,经尾静脉注射Cy7.5荧光标记的双响应性纳米粒（Cy7.5/AOCD NP）,在预设不同观察时间点取材损伤的颈动脉组织,离体成像观察和定量分析荧光强度,评价纳米粒的靶向和滞留时间变化情况。16.靶向纳米颗粒与损伤颈动脉的特异性结合的评价在大鼠颈动脉球囊损伤模型建立后,即刻经尾静脉注射Cy5荧光标记的靶向纳米粒（Cy5/TAOCD NP,25 μg/kg）。在体循环0.5 h后,给予安乐死,取材颈动脉组织,Tissue-Tek O.C.T.包埋,冰冻组织切片（5μm）,FITC标记的抗体染色血管内皮下IV型胶原,DAPI染核后,盖玻片封片,通过CLSM观察颈动脉组织荧光分布及靶向纳米粒与胶原共定位情况。17.不同载雷帕霉素纳米粒对SD大鼠颈动脉球囊损伤的疗效评价将30只雄性SD大鼠随机分为6组（n=5）,包括假手术组（正常组）、生理盐水治疗组（模型组）,以及RAP/PLGA纳米粒组、RAP/ACD纳米粒组、RAP/OCD纳米粒组及RAP/AOCD纳米粒组。除假手术组外,其余各组大鼠均按上述方法实施颈动脉球囊损伤。在颈动脉球囊血管成形术后,分别于术后即刻（0d）,4 d,8 d,12 d尾静脉注射RAP终浓度为1 mg/kg的不同载RAP纳米粒。在另一项单独设计的实验研究中,RAP/AOCD纳米粒或RAP/TAOCD纳米粒在大鼠颈动脉球囊损伤后即刻（0 d）,5 d,10 d分别以终浓度1 mg/kg的RAP经尾静脉注射给药。在血管成形术后第14 d,给予大鼠安乐死。原位灌注后取材损伤的颈动脉段及主要脏器,进行组织学和免疫组化研究,考察相关标志物表达水平。18.双响应性纳米粒的急性毒性和载雷帕霉素纳米药物治疗对SD大鼠的长期毒性评价实验12只雄性SD大鼠（180-250g）随机分为4组（n=3）。在AOCD纳米粒组,尾静脉注射不同剂量（250、500或1000 mg/kg）AOCD纳米粒。正常对照组给予尾静脉注射生理盐水。仔细观察各组动物的相关毒性症状和行为活动状况。在规定的时间点称量检测体重变化。在给药后第14 d,给予大鼠实施安乐死,即刻采集血样进行血液学和生化相关指标分析。收集主要脏器并称重,分析计算脏器指数（每只大鼠的器官重量与体重之比）,同时制作组织切片H&E染色观察其病理变化。健康雄性SD大鼠16只,体重（180-250 g）随机分为4组（n=4）。空白纳米粒组按11.5 mg/kg AOCD NP治疗（相当于RAP纳米粒的治疗剂量1 mg/kg）,另外两组分别按1 mg/kg RAP/AOCD NP或 3 mg/kg RAP/AOCD NP,尾静脉注射,每周 2 次,连续 12周。正常对照组大鼠则给予静脉注射生理盐水。治疗期间,每天动态观察各组动物死亡率、外貌、全身状况和行为异常等情况。每周记录食物和水的消耗以及体重变化情况。第12周,给予安乐死。采集血液样本,化验分析具有代表性的血液学和生化指标。取主要脏器包括心、肝、脾、肺、肾并称重计算脏器指数。同时制备组织学切片,H&E染色观察病理变化。另外,用抗CD3抗体和抗CD19抗体对脾脏组织切片进行免疫组化染色,评价长期载RAP纳米药物对SD鼠免疫功能的影响。19.双响应性载雷帕霉素纳米粒长期治疗后小鼠脾脏T、B淋巴细胞的定量研究实验将24只雄性C57BL/6J小鼠（18-22 g）随机分为4组（n=6）。正常对照组给予生理盐水,空白纳米粒组按11.5 mg/kg（相当于载RAP纳米粒治疗剂量1 mg/kg）剂量尾静脉注射AOCD NP。另外两组小鼠分别给予RAP/AOCD NP,1 mg/kg或3 mg/kg,尾静脉注射,每周2次,连续给药12周。在治疗期间,观察小鼠的一般身体状况的任何变化,包括外貌,摄食、饮水,行为活动及死亡率等。第12周,对小鼠实施安乐死。取脾脏并将分离的脾脏组切成小块,加入无菌PBS缓冲液,对组织进行彻底研磨,然后在淋巴细胞分离培养基中离心收集细胞。将FITC标记的抗CD3抗体及PE标记的抗CD19抗体在4℃条件下,与脾脏组织提取的淋巴细胞共同避光孵育30 min后,用流式细胞染色缓冲液洗涤细胞2次,PBS缓冲液重悬细胞。最后,采用流式细胞仪对脾脏组织中T细胞和B细胞的百分率进行定量分析,评价RAP/AOCD NP治疗对适应性免疫系统的影响。研究结果:1.pH和ROS双响应性纳米粒的制备基于β-环糊精（β-CD）,通过单步缩醛化反应合成pH响应性的载体材料（ACD）,傅里叶红外光谱和核磁共振氢谱检测证实ACD被成功合成。根据ACD 1H NMR谱计算,环缩醛与线性缩醛的摩尔比约为0.62,缩醛化度约为90%。此外,（OCD）通过在β-CD分子上将氧化敏感性苯硼酸酯单元4-PBAP以羰基键合的方式引入β-CD合成ROS响应性载体材料,1H NMR谱证实,每个β-CD分子大约有7个PBAP单元。采用改良的纳米沉淀/自组装法制备基于上述两种不同响应性的载体材料的双响应性纳米粒,将ACD和OCD以不同重量配比,构建了 pH/ROS双响应性纳米粒。基于ACD/OCD的不同纳米粒,在质量比为 100:0、80:20、60:40、50:50、40:60、20:80、0:100 时,分别命名为 ACD NP、AOCD8020 NP、AOCD6040 NP、AOCD5050 NP、AOCD4060 NP、AOCD2080 NP和OCD NP。透射电镜（TEM）观察,在不考虑组成分差异的情况下,所制备的纳米粒均为球形,形态规则,粒径均一。马尔文粒径电位检测显示所有制备的纳米粒Zeta-potential均为负值,平均流体力学粒径变化范围从121±2到186±4 nm。不同纳米粒的粒径分布相对较窄。提示ACD与OCD载体材料具有良好的混合相容性。2.不同双响应性纳米粒的体外水解特性基于载体材料ACD和OCD构建的pH/ROS双响应纳米粒的体外水解,在含有1mM H2O2及不同pH值的PBS缓冲液中进行。对于ACD NP,在pH 5或pH 6的微酸性条件下均表现出明显的快速水解,而H2O2的存在对其水解几乎无任何影响,具有良好的响应低pH的特性。相对于ACD NP,OCD NP的水解则与pH无关,在H202存在的条件下,OCD NP水解迅速。相比在不同的pH值,OCD NP在pH值为5、6或7.4时均表现出类似的水解特性。基于载体材料ACD和OCD构建的双响应性纳米粒,它们的水解行为依赖于pH和H202,通过在含有1 mM H2O2及不同pH条件的PBS缓冲液中,比较基于不同比例ACD和OCD载体材料制备的双响应性纳米粒水解试验的结果,提示基于ACD/OCD的纳米粒具有pH和ROS双重响应的能力。AOCD2080 NP和AOCD8020 NP在1 mM H2O2和pH 5、6或7.4环境中,表现出更为理想的双响应的特性。此外,在H202存在的情况下,AOCD2080 NP在不同pH值条件下表现出较好的水解行为,因此,AOCD2080纳米粒进一步被用于后续的课题研究。采用基于ACD和OCD的复合材料,成功地构建了 pH/ROS双响应性纳米药物递送平台。值得注意的是,通过改变ACD/OCD的质量比,可以很容易地调控制备得到的纳米载体的精确的水解敏感性。3.pH和ROS双响应性载药纳米粒的制备和表征通过不同响应性空白纳米粒制备响应的载RAP纳米粒。同时,利用PLGA制备了非响应性载药纳米粒作为对照。与相应的空白纳米粒相似,四种载药纳米粒Zeta-potential均为负值,平均流体力学粒径变化范围从121±2到179±6 nm。RAP/PLGA纳米粒、RAP/ACD纳米粒、RAP/OCD纳米粒、RAP/AOCD纳米粒的载药量分别为4.5±0.4%、9.4±0.2%、8.2±0.1%、8.7±0.4%。通过体外药物释放实验研究检测了不同纳米药物的响应性释放行为。对于RAP/AOCD NP,与中性（pH=7.4）PBS缓冲液相比,RAP的释放在微酸性（pH=5或pH=6）PBS缓冲液中明显加快。同时,无论在上述三种不同pH值的PBS缓冲液中,在1mM H2O2存在的条件下都显着增加了载药纳米粒的药物释放速度。因此,RAP/AOCD NP表现出理想的pH/ROS双响应的释药能力,这与相应的空白纳米粒AOCD2080 NP的双响应性水解特性相吻合。另外,单一响应性载药纳米粒RAP/ACD NP和RAP/OCD NP药物释放也同样符合相应纳米载体的水解性能。通过利用基于pH响应性和ROS响应性材料设计的纳米复合材料可以简单、成功地构建出pH/ROS双响应性载RAP纳米粒。4.体外rVSMCs对双响应纳米粒的摄取Cy5标记的双响应性纳米粒（Cy5/AOCD NP）与VSMCs孵育1 h后,VSMCs中的荧光信号随着Cy5/AOCD纳米粒的剂量的增加而明显增强,提示细胞对纳米粒的内吞呈现剂量依赖性的特点。与激光共聚焦显微镜观察结果一致,流式细胞术荧光激活细胞分选（FACS）定量进一步证实了 VSMCs对Cy5/AOCD NP的有效细胞摄取呈剂量依赖的方式。在相同剂量的Cy5/AOCD NP下,随着孵育时间的延长,Cy5荧光在VSMCs中的分布也随之增加。而且,通过溶酶体探针Lysotracker对晚期核内体和溶酶体进行染色,发现血管平滑肌中内吞Cy5/AOCD NP从核内体/溶酶体转运到细胞质中（核内体/溶酶体逃逸现象）。同样,FACS的分析表明,随着孵育时间的增加,VSMCs内吞Cy5/AOCDNP的作用增强。这些结果充分表明,大鼠VSMCs可以有效地内吞基于ACD和OCD材料构建的pH/ROS双响应性纳米粒。在酸性和氧化应激微环境的亚细胞细胞器中,与pH响应性或ROS响应性的纳米粒相比,双响应性纳米粒能够更快地释放负载的药物分子。5.双响应性载药纳米粒的体外生物学效应不同响应性纳米粒的细胞毒性均较PLGA纳米粒低。载雷帕霉素纳米粒在相对低剂量下具有较低的细胞毒性。经RAP原料药和不同的RAP纳米粒治疗24小时,可显着抑制VSMCs的迁移。值得注意的是,与游离RAP相比,所有载药纳米粒都显示出明显更强的抑制VSMCs迁移效果。此外,响应性载药纳米粒对VSMCs迁移的抑制作用比非响应性载药纳米粒（RAP/PLGA NP）更为显着。值得注意的是,双响应性纳米药物治疗（RAP/AOCD NP）的抑制血管平滑肌细胞增殖的效果最好,与单一响应性纳米粒治疗相比差异显着。而且,不同载药纳米粒治疗对细胞周期的影响的实验表明,载RAP纳米粒主要通过抑制细胞G1/S的转化从而抑制VSMCs的增殖。载RAP纳米粒使细胞周期停滞在G1期的机制研究表明,双响应性载RAP纳米粒抑制VSMCs增殖通过上调p27Kip1和下调cyclin D1表达使细胞停滞于G1期。6.双响应性载RAP纳米粒在体靶向治疗血管再狭窄以大鼠颈动脉球囊损伤为模型,建立大鼠血管炎症性疾病模型,并通过Evan’s蓝染色证实明显的内皮剥脱损伤。pH敏感性荧光探针检测颈动脉损伤局部pH值的变化显示:正常动脉显示明显的绿色荧光,而球囊损伤后第1、7、14天分离的动脉组织荧光信号明显较弱,表明损伤动脉中存在相对酸性的微环境。用DHE和DCFHDA荧光探针对大鼠颈动脉冰冻组织切片进行染色,与正常动脉相比,球囊损伤后第1天颈动脉荧光强度轻度升高。而在损伤后第7天和第14天,可以观察到明显的增强荧光。这些结果证实动脉损伤部位存在氧化应激,很大程度与炎症的进展有关。双响应性纳米粒对损伤颈动脉的靶向性研究表明,纳米粒对内皮损伤的颈动脉具有靶向性,定量分析显示,非响应性纳米粒和响应性纳米粒治疗组间差异并无统计学意义。载RAP纳米粒给血管再狭窄治疗带来不同程度的获益,颈动脉管腔面积显着增加,而内膜面积和增殖指数明显减少,中膜面积无明显变化。在各组载RAP纳米粒的治疗中,双响应性载药纳米粒疗效最佳。在不同的载RAP纳米粒治疗后,免疫组织化显示:总α-SMA阳性细胞数量明显减少。此外,所有纳米药物治疗组的PCNA均显着降低,但以RAP/AOCD NP组的效果最好。MMP-2结果与PCNA相似。而且,在给予响应性载药纳米粒治疗的大鼠动脉中的8-OHdG表达显着降低。定量分析显示,在双响应性载药纳米粒治疗后,动脉组织中典型的氧化应激相关标志物,包括H202、MDA和MPO的水平显着降低。另一方面,损伤颈动脉SOD活性明显降低,经RAP/AOCD NP治疗后,SOD活性得到有效恢复。同时,与模型组相比,组织损伤部位的促炎细胞因子包括肿瘤坏死因子（TNF-α）和白介素（IL）1 β的表达水平在RAP/AOCD NP治疗后也发生了显着降低。7.pH和ROS双响应性靶向Ⅳ型胶原的载药纳米粒的制备与表征通过巯基-马来酰亚胺键合,将多肽KLWVLPKGGGC与DSPE-PEG结合。通过类似改良的纳米沉淀法/自组装法成功构建了靶向Ⅳ型胶原、p H-/RO S-双响应性纳米粒（TAOCDNP）。经TEM和SEM检测,TAOCDNP呈球形,具有较窄的粒径分布。平均流体力学直径131 nm,Zeta电位-27.2±0.3 mV。雷帕霉素可以包载到TAOCD NP中,形成一种靶向、双响应性载药纳米粒（RAP/TAOCD NP）,球形结构、粒径分布窄,能够有效负载雷帕霉素。8.TAOCD NP的体内外靶向能力评价与非靶向NPs（AOCD NP）相似。共聚焦显微镜观察和流式细胞术定量分析均显示VSMCs对Cy5/TAOCD NP的吞噬呈剂量依赖性和时间依赖性方式。这些结果证实了靶向肽的加入对AOCD NP的细胞摄取行为没有显着影响。Cy7.5/TAOCD NP在体外对ⅣV型胶原的粘附表明,引入到TAOCD NP上的靶向肽维持了其对ⅣV型胶原的特异性结合能力。TAOCD NP在体靶向能力表明,Cy7.5/TAOCD NP组在血管内皮损伤部位的荧光强度明显高于Cy7.5/AOCD NP组。动脉组织切片的显微镜观察也显示Cy5/TAOCD NP有相对较强的荧光。大鼠颈动脉冰冻组织切片Ⅳ型胶原抗体免疫荧光染色显示损伤动脉中Ⅳ型胶原（绿色荧光）与红色Cy5荧光共定位,而正常动脉中未见Cy5荧光。总之,这些结果证明,经靶向Ⅳ型胶原多肽修饰可显着增强pH和ROS双响应性纳米载体对损伤颈动脉的被动靶向聚集。9.双响应性载RAP靶向纳米粒靶向治疗血管再狭窄颈动脉H&E染色显示,RAP/AOCD NP或RAP/TAOCD NP治疗均能明显抑制血管新生内膜增生。与RAP/AOCD NP治疗组相比,RAP/TAOCD NP组在增加管腔面积、减少内膜面积及降低增殖指数方面均有显着差异。同样,免疫组化分析显示,与RAP/AOCD NP相比,RAP/TAOCD NP能更有效抑制VSMCs在血管内膜的增殖,显着降低了 MMP-2和8-OHdG的表达。这些结果表明,pH-/ROS-双响应性纳米药物治疗的体内防治血管再狭窄效果可以通过靶向单元修饰进一步增强。10.安全性评价将不同浓度的AOCD NP与红细胞孵育2 h,即使在浓度为2 mg/mL时,直接观察和定量分析均未见溶血。体内急性毒性试验显示,所有AOCD NP组均正常摄食和饮水,无异常行为。所有AOCD NP治疗大鼠的脏器指数（主要脏器）均与生理盐水组相当。此外,AOCD NP组血常规及肝功能,生化等相关指标与生理盐水组比较,各组间差异无统计学意义此外,对主要脏器的病理组织切片H&E染色表明,AOCD NP治疗的大鼠没有明显的病理改变。另外,对双重响应性载药纳米粒（RAP/AOCD NP）也进行了体内安全性研究。生理盐水组与空白纳米粒（AOCDNP）组及RAP/AOCDNP组脏器指数无显着差异。同样,经AOCD NP或RAP/AOCD NP治疗的大鼠在血常规及肝肾功能相关的生物标志物方面与生理盐水组比较,各组间差异无统计学意义。主要脏器的H&E染色切片显示几乎没有损伤。此外,鉴于RAP的免疫抑制活性,长期应用双响应载RAP纳米粒对大鼠脾脏T、B淋巴细胞数量无明显影响。而且,对C57BL6J小鼠进行类似的纳米粒长期给药治疗后,流式细胞术检测小鼠脾脏中T细胞和B细胞的数量,结果显示在RAP/AOCD NP作用下,小鼠脾脏中T细胞和B细胞的数量并没有显着变化。这些结果提示,相对低剂量的RAP/AOCD NP治疗对适应性免疫系统没有显着的负面影响。总体而言,AOCDNP和RAP/AOCD NP均具有出良好的生物安全性。研究结论:1.通过联合基于β环糊精合成的pH响应性和ROS响应性材料,同时设计了一种简单和有效的方法成功构建了 pH和ROS双响应的纳米载体。2.通过优化pH响应性材料（ACD）和ROS响应性材料（OCD）的投料质量比,制备了最佳的pH和ROS响应能力的纳米粒。3.双响应性纳米粒AOCD NP能够有效地负载RAP,在低pH值或ROS较高的环境下,触发RAP/AOCD NP释放负载的RAP。RAP/AOCD NP可以通过被rVSMCs有效内吞并在亚细胞细胞器的敏感释放,增强药物分子在细胞内的递送。相比于游离RAP,非响应性和单响应性载RAP纳米粒,RAP/AOCD NP显着的抑制了血管平滑肌细胞的增殖和迁移。4.AOCD NP能够靶向聚集在大鼠颈动脉球囊损伤的部位,通过在动脉损伤部位被动靶向和触发释放RAP,与其他载药纳米粒比较,RAP/AOCD NP在大鼠中表现出更理想的抗再狭窄作用。5.通过靶向ⅣV型胶原多肽的修饰,进一步提高了AOCD NP的靶向能力,成功制备了 pH/ROS双响应的靶向纳米递送平台TAOCD NP。负载RAP的TAOCD NP比相比RAP/AOCD NP,更有效地抑制了大鼠颈动脉球囊损伤后新生内膜的形成。6.AOCD NP和RAP/AOCD NP均具有良好的生物安全性。本课题研究设计的pH/ROS双响应纳米载体和构建的纳米药物递送系统有望进一步用于治疗血管再狭窄和其他与血管炎症相关的心血管疾病。
二、血管再狭窄的预防、治疗措施（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血管再狭窄的预防、治疗措施（论文提纲范文）
（1）干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 资料筛选 |
| 1.3 资料提取与文献质量评价 |
| 2 结果Results |
| 2.1 血管再狭窄形成 |
| 2.2 干细胞移植防治血管再狭窄 |
| 2.2.1内皮祖细胞防治血管再狭窄的研究 |
| 2.2.2 间充质干细胞防治血管再狭窄的研究 |
| 2.3 干细胞来源外泌体防治血管再狭窄的研究 |
| 2.3.1 内皮祖细胞来源外泌体及其对血管再狭窄的作用 |
| 2.3.2 间充质干细胞来源外泌体及其对血管再狭窄的作用 |
| 3 展望Prospects |
（2）“全—专科”协同管理模式在中重度颈动脉狭窄患者健康管理中的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 诊断标准 |
| 2.1.2 入选标准 |
| 2.1.3 排除标准 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.2.1 构建“全-专科”协同管理模式 |
| 2.2.2 本研究的干预方法 |
| 2.2.3 本研究的结局指标 |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 患者基本资料 |
| 3.1.1 社会人口学和经济收入特征 |
| 3.1.2 颈动脉狭窄患者疾病史特征 |
| 3.2 健康管理前后患者危险因素控制达标情况比较 |
| 3.3 健康管理前后患者生理指标比较 |
| 3.4 健康管理前后患者积极度水平比较 |
| 3.5 患者术侧血管再狭窄和CVD不良事件发生情况 |
| 3.6 健康管理后患者对全科医师的信任度调查 |
| 4 讨论 |
| 4.1 “全-专科”协同管理模式有助于改善患者的健康管理效果 |
| 4.2 “全-专科”协同管理模式提高了患者积极度水平 |
| 4.3 全科医师在“全-专科”协同管理模式中发挥重要作用 |
| 5 结论 |
| 6 创新性与局限性 |
| 6.1 创新性 |
| 6.2 局限性 |
| 参考文献 |
| 附录 全科医学科颈动脉狭窄患者健康管理手册 |
| 综述 颈动脉血运重建术后危险因素管理的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）脂联素对冠脉搭桥术后静脉桥血管再狭窄的抑制作用及利用脂联素转基因家蚕蚕丝制备血管外支架的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 脂联素抑制冠脉搭桥术后静脉桥血管再狭窄的研究 |
| 1 前言 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 再狭窄机制研究 |
| 1.3 脂联素 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠手术及存活状况 |
| 3.2 脂联素抑制移植静脉内膜、中膜和外膜增生 |
| 3.3 脂联素抑制静脉移植PCNA表达 |
| 3.4 脂联素下调静脉移植后VCAM-1和ICAM-1的表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 脂联素转基因家蚕品系的建立及蚕丝材料血管外支架制备 |
| 1 前言 |
| 1.1 脂联素 |
| 1.2 血管外支架 |
| 1.3 蚕丝生物材料及家蚕生物反应器 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 rhADP转基因品系构建 |
| 3.2 转基因蚕茧rhADP表达检测 |
| 3.3 rhADP基因插入位点的鉴定 |
| 3.4 rhADP蛋白的分离浓缩 |
| 3.5 rhADP毒性实验及促增殖作用 |
| 3.6 rhADP抑制LPS诱导巨噬细胞raw264.7的炎症反应 |
| 3.7 rhADP转基因家蚕品系经济性状调查 |
| 3.8 rhADP转基因家蚕品系特性分析 |
| 3.9 rhADP转基因蚕丝血管外支架的制备及特性分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 冠心病危险因素和治疗方法的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）冠状动脉心肌桥患者的急性心肌梗死风险模型及不同手术预后对比的荟萃分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 部分英文缩略词表 |
| 第一部分:基于Citespace的冠状动脉心肌桥研究可视化分析 |
| 1 前言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 数据来源 |
| 2.2 分析方法与参数设置 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 发表年份和期刊 |
| 3.2 文献合作情况 |
| 3.2.1 国家及机构合作分析 |
| 3.2.2 作者合作分析 |
| 3.3 共现关键词分析 |
| 3.4 文献共被引分析 |
| 3.5 流行趋势 |
| 4 展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分:冠状动脉心肌桥患者的急性心肌梗死风险预测模型 |
| 1 前言 |
| 2 研究对象与方法 |
| 2.1 纳入病人 |
| 2.2 收集临床指标 |
| 2.3 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 纳入研究患者基本临床特征 |
| 3.2 纳入模型的预测因素筛选 |
| 3.2.1 单因素Logistics回归分析 |
| 3.2.2 相关性分析 |
| 3.2.3 LASSO回归筛选变量 |
| 3.3 多因素Logistics回归模型与列线图 |
| 3.3.1 多因素Logistics回归分析 |
| 3.3.2 基于列线图的MB患者发生急性心梗风险模型 |
| 3.4 风险模型的验证 |
| 3.4.1 区分度检验 |
| 3.4.2 校准度检验 |
| 3.4.3 决策曲线分析与临床影响曲线 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分:外科与介入手术治疗冠状动脉心肌桥临床疗效和预后的系统评价和Meta分析 |
| 1 引言 |
| 2 资料和方法 |
| 2.1 纳入与排除标准 |
| 2.1.1 研究类型 |
| 2.1.2 研究对象 |
| 2.1.3 干预措施 |
| 2.1.4 评级指标 |
| 2.1.5 排除标准 |
| 2.2 文献检索策略 |
| 2.3 文献筛选和信息提取 |
| 2.4 纳入研究的偏倚风险评价 |
| 2.5 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 文献筛选 |
| 3.2 纳入研究的基本特征与偏倚风险评价结果 |
| 3.3 Meta回归结果 |
| 3.4 Meta分析结果 |
| 3.4.1 术后症状缓解率的Meta分析 |
| 3.4.2 术后血管再狭窄率的Meta分析 |
| 3.4.3 术中并发症发生率的Meta分析 |
| 3.4.4 术后心血管事件发生率的meta分析 |
| 3.5 发表偏倚 |
| 3.6 敏感性分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分:冠状动脉心肌桥的病理生理及诊治研究进展 |
| 1 前言 |
| 2 病理生理 |
| 3 检查技术 |
| 3.1 有创性影像学检查 |
| 3.2 无创性影像学检查 |
| 3.3 其他检测技术 |
| 4 治疗 |
| 4.1 药物治疗 |
| 4.2 介入治疗 |
| 4.3 外科手术治疗 |
| 5 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（5）基于miR-1183/PTEN/Akt信号通路探讨苏木提取物在血管再狭窄中的抗炎机制（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 综述 |
| 1.中医学对血管再狭窄的认识及研究进展 |
| 1.1 古代医家对本病的认识 |
| 1.2 中医学对血管再狭窄病因病机的概述 |
| 1.3 中医学对血管再狭窄治疗的概述 |
| 2.现代医学对血管再狭窄的研究进展 |
| 2.1 血管再狭窄评价方法 |
| 2.2 血管再狭窄形成机制 |
| 2.3 血管再狭窄的治疗 |
| 3.miR-1183/PTEN/Akt信号通路的研究进展 |
| 3.1 miR-1183/PTEN/Akt信号通路的概述 |
| 3.2 miR-1183/PTEN/Akt信号通路与血管再狭窄的关系 |
| 4.苏木的研究进展 |
| 4.1 苏木的功效作用及药物成分 |
| 4.2 苏木提取物的药理作用 |
| 第一部分 苏木提取物干预血管再狭窄的生物信息学研究 |
| 1.研究方法 |
| 1.1 miRNAs芯片数据收集 |
| 1.2 差异miRNA的筛选 |
| 2.结果 |
| 2.1 两组差异表达的miRNA |
| 第二部分 苏木提取物对内皮细胞增殖的影响 |
| 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 苏木提取物含药血清的制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 3.统计分析处理 |
| 结果 |
| 1.转染后各组HUVECs中 miR-1183m RNA的表达 |
| 2.MTT法检测细胞增殖 |
| 3.流式细胞检测细胞凋亡 |
| 4.Elisa法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16的含量 |
| 5.生物信息学软件预测miR-1183靶基因 |
| 6.双荧光素酶报告基因验证miR-1183靶向调控PTEN基因 |
| 7.RT-PCR法检测PTEN m RNA表达 |
| 8.Western Blot检测PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κBp65的蛋白表达 |
| 第三部分 苏木提取物对血管再狭窄的影响及其分子机制研究 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 动物模型的制备 |
| 2.3 实验动物的给药方法 |
| 2.4 标本取材 |
| 2.5 检测方法 |
| 3 统计分析处理 |
| 结果 |
| 1.大鼠的一般状态 |
| 2.RT-PCR法检测miR-1183m RNA表达 |
| 3.HE染色观察病变血管组织形态 |
| 4.免疫组化法检测细胞内PTEN、Akt、p-Akt蛋白含量 |
| 5.Elisa法检测大鼠血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18和细胞因子MCP-1、MMP-2、CXCL16水平 |
| 6.Western-blot法检测PTEN、Akt、p-Akt、Bax、Bcl-2、NF-κBp65的蛋白质表达 |
| 讨论 |
| 1.关于血管再狭窄大鼠模型的建立 |
| 2.生物信息学在血管再狭窄研究中的作用 |
| 3.对细胞活力及凋亡的影响 |
| 4.对炎性因子的影响 |
| 5.苏木对miR-1183/PTEN/Akt信号通路的影响 |
| 6.苏木防治血管再狭窄的探讨 |
| 7.创新点 |
| 8.问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 个人简历 |
（7）急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊植入药物洗脱支架后支架内再狭窄发生的相关因素分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 临床资料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 冠状动脉药物洗脱支架内再狭窄相关进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 致谢 |
（8）木犀草素通过转化生长因子β受体1抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移及血管内膜增生的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 木犀草素对血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响及作用机制研究 |
| 1.1 木犀草素对血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响 |
| 1.1.1 材料 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.1.3 结果 |
| 1.1.4 讨论 |
| 1.2 木犀草素对血管平滑肌细胞中TGFBR1信号通路激活的影响 |
| 1.2.1 材料 |
| 1.2.2 实验方法 |
| 1.2.3 结果 |
| 1.2.4 讨论 |
| 第二章 木犀草素与TGFBR1间的相互作用 |
| 2.1 分子对接及分子动力学模拟研究 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 结果 |
| 2.1.4 讨论 |
| 2.2 表面等离子共振技术及TGFBR1体外酶活性研究 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 结果 |
| 2.2.4 讨论 |
| 第三章 过表达TGFBR1,验证TGFBR1信号通路在木犀草素抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移中的作用 |
| 3.1 过表达TGFBR1后,木犀草素对TGFBR1信号通路激活的影响 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 结果 |
| 3.1.4 讨论 |
| 3.2 过表达TGFBR1后,木犀草素对血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 结果 |
| 3.2.4 讨论 |
| 第四章 木犀草素对血管内膜增生的影响及机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 过表达TGFBR1,验证TGFBR1在木犀草素抑制血管内膜增生中的作用 |
| 5.1 材料 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 缩写词表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（9）苦豆碱诱导自噬减轻球囊损伤后血管再狭窄（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 血管再狭窄的危害及其机制 |
| 1.2 苦豆碱的药理作用 |
| 1.3 自噬的概念及特征 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂与设备 |
| 2.2 主要试剂的配置 |
| 2.3 主要实验方法 |
| 2.4 数据分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 苦豆碱抑制球囊损伤后血管平滑肌细胞的增殖及表型转换 |
| 3.2 苦豆碱抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞的增殖 |
| 3.3 苦豆碱能够诱导血管平滑肌细胞的自噬 |
| 3.4 苦豆碱诱导自噬抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞的增殖 |
| 3.5 苦豆碱诱导自噬抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞的迁移 |
| 第四章 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间成果 |
| 致谢 |
（10）pH和ROS双响应性靶向纳米药物的构建及其防治血管再狭窄的应用研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 前言 |
| 第一章 pH和 ROS双响应性纳米粒的构建及其表征 |
| 1.1 pH响应性和ROS响应性β-环糊精载体材料的合成及其理化性质表征 |
| 1.2 pH和 ROS双响应性纳米粒的构建及其表征 |
| 1.3 pH和 ROS双响应性纳米药物的体外水解及药物释放 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 本章小结 |
| 第二章 pH和 ROS双响应性纳米药物的体外生物学功能评价 |
| 2.1 SD大鼠主动脉VSMCs对纳米粒的吞噬作用研究 |
| 2.2 双响应性载RAP纳米粒对SD大鼠VSMCs增殖和迁移的影响 |
| 2.3 双响应性载RAP纳米粒对PDGF-BB诱导大鼠的VSMCs相关蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 pH和 ROS双响应性纳米药物在SD大鼠颈动脉球囊损伤部位的靶向能力及抑制血管新生内膜增生的疗效评价 |
| 3.1 SD大鼠颈动脉球囊损伤模型的建立 |
| 3.2 p H和 ROS双响应性纳米粒对大鼠颈动脉内皮损伤部位的靶向能力评价 |
| 3.3 pH和 ROS双响应性载RAP纳米粒对SD大鼠颈动脉球囊损伤部位炎症及氧化应激水平的影响 |
| 3.4 pH和 ROS双响应性载RAP纳米药物在SD大鼠颈动脉球囊损伤模型中抑制血管新生内膜增生的疗效观察 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 pH和 ROS双响应性靶向纳米药物的构建、靶向性及其防治PTA术后再狭窄的疗效 |
| 4.1 pH和 ROS双响应性靶向纳米药物的构建及表征 |
| 4.2 pH和 ROS双响应性靶向纳米粒对SD大鼠颈动脉内皮损伤部位的靶向研究 |
| 4.3 pH和 ROS双响应性靶向纳米药物在SD大鼠颈动脉PTA术后血管再狭窄防治中的疗效评价 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 pH和 ROS双响应性载RAP纳米药物的初步安全性评价 |
| 5.1 pH和 ROS双响应性空白纳米粒的急性毒性评价 |
| 5.2 pH和 ROS双响应性纳米药物的长期毒性评价 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 第六章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 纳米药物递送系统在血管再狭窄防治中的应用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
四、血管再狭窄的预防、治疗措施（论文参考文献）
- [1]干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题[J]. 帅芝琴,陈家蒙,刘滔滔,胡安玲,李利生,余丽梅,徐尚福. 中国组织工程研究, 2022(01)
- [2]“全—专科”协同管理模式在中重度颈动脉狭窄患者健康管理中的初步研究[D]. 孙磊. 中国医科大学, 2021(02)
- [3]脂联素对冠脉搭桥术后静脉桥血管再狭窄的抑制作用及利用脂联素转基因家蚕蚕丝制备血管外支架的研究[D]. 周阳. 安徽医科大学, 2021(01)
- [4]冠状动脉心肌桥患者的急性心肌梗死风险模型及不同手术预后对比的荟萃分析[D]. 卢晓峰. 兰州大学, 2021(12)
- [5]基于miR-1183/PTEN/Akt信号通路探讨苏木提取物在血管再狭窄中的抗炎机制[D]. 曹丽娟. 黑龙江中医药大学, 2020(01)
- [6]颈动脉内膜切除术围手术期抗血小板治疗：系统评价和meta分析[J]. 唐琴,郭毅佳,胡任重,唐镱方,王晓庆,张玉娇,林亚鹏,郝军莉,杨杰. 华西医学, 2020(06)
- [7]急性ST段抬高型心肌梗死患者急诊植入药物洗脱支架后支架内再狭窄发生的相关因素分析[D]. 杨博文. 苏州大学, 2020(02)
- [8]木犀草素通过转化生长因子β受体1抑制血管平滑肌细胞增殖、迁移及血管内膜增生的作用研究[D]. 吴玉婷. 南方医科大学, 2020(01)
- [9]苦豆碱诱导自噬减轻球囊损伤后血管再狭窄[D]. 朱兴兴. 南方医科大学, 2020(01)
- [10]pH和ROS双响应性靶向纳米药物的构建及其防治血管再狭窄的应用研究[D]. 张润军. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)