一、干扰素α-2a治疗轮状病毒性肠炎85例临床分析（论文文献综述）
赵红丽[1]（2020）在《心肌酶谱检测在小儿轮状病毒性肠炎中的应用价值分析》文中认为目的:通过检测轮状病毒（rotavirus,RV）感染患儿心肌酶谱的生化指标,全面认识心肌酶谱检测在小儿轮状病毒性肠炎中的应用价值。方法:研究对象选取2017年10月～2018年12月在我院就诊的180例轮状病毒性肠炎患儿为观察组,同期于我院就诊的非轮状病毒感染性肠炎的急性腹泻患儿180例为对照组。轮状病毒感染患儿的病毒检测主要利用胶体金的方法进行检测。进一步利用全自动分析仪检测两组患儿的心肌酶谱,包括肌酸激酶（Creatine kinase,CK）、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase,LDH）、肌酸激酶同工酶（Creatine kinase isoenzyme,CK-MB）、天门冬氨酸氨基转移酶（Aspartate aminotransfrease,AST）以及 α-羟丁酸脱氢酶（Alpha-hydroxybutyrate dehydrogenase,α-HBDH）的水平。比较轮状病毒阳性和阴性患儿心肌酶谱之间的差异以及治疗前后两组患儿心肌酶谱的差异;比较不同脱水和酸中毒程度与患儿心肌酶谱的关系;对心肌酶升高的患儿进行心电图、胸片、心脏彩超等物理器械检查,判断患儿心脏损伤的情况。所有统计分析均采用SPSS 20.0统计软件进行分析,定量资料采用t检验、定性资料采用卡方检验,多组资料之间采用方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.观察组和对照组患儿的一般情况如性别、年龄、体重、疾病程度等之间差异无统计学意义（P>0.05）。2.两组患儿治疗前后心肌酶谱变化:治疗前观察组轮状病毒感染患儿心肌酶谱水平较未感染轮状病毒患儿高,差异具有显着统计学意义（P<0.001）;治疗后观察组患儿心肌酶谱值均下降趋于正常,与治疗前差异具有统计学意义（P<0.001）。而对照组治疗前后心肌酶谱无显着性变化,差异无统计学意义（P>0.05）。3.随着脱水程度以及酸中毒程度的加重,观察组患儿的心肌酶谱水平升高,差异具有统计学意义（P<0.001）。对照组患儿心肌酶谱水平随着脱水程度升高,CK和LDH水平升高,P<0.001,差异具有统计学意义,而AST、α-BHDH、CK-MB变化无显着性差异（P>0.05）;而随着酸中毒程度的升高,对照组患儿心肌酶谱水平升高,P<0.001,差异具有统计学意义。4.心肌酶升高患儿随着脱水程度的升高,患儿的心电图、胸片、心脏彩超结果异常增多。提示该类患儿出现心脏损伤的可能性增大,差异具有统计学意义（P<0.001）。结论:1.轮状病毒感染性肠炎患儿的心肌酶谱水平普遍高于非轮状病毒性肠炎患儿。2.随着脱水程度以及酸中毒程度的增加,轮状病毒性肠炎患儿的心肌酶谱水平相应升高,表明心肌酶谱的变化与患儿腹泻的严重程度有关。3.观察心肌酶谱指标的变化,结合心电图以及超声心动图能够明确诊断心肌炎,对于指导治疗以及利用心肌酶谱指标的变化预测患儿的预后,判断轮状病毒的感染程度有着重要的临床意义。
张月[2]（2020）在《止泻方治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻的临床观察》文中研究指明研究目的:本研究通过主、客观的观察指标,综合评价西药组、中药方组（止泻方）对改善小儿轮状病毒性腹泻的临床症候,以及安全性和有效率等方面的影响,旨在探讨止泻方对治疗小儿轮状病毒性腹泻的可行性和优势所在,为中医中药治疗本病提供理论依据。研究方法:本试验采用前瞻性、随机对照的研究方法,收集2019年2月至2020年2月在广州市中医医院儿科门诊及住院收治的符合纳入标准的小儿湿热型轮状病毒性腹泻患儿80例,采用随机数字法从中随机纳入72例患儿,采用随机对照分组的方法,分为治疗组和对照组。其中,治疗组男孩18例,女孩18例;对照组男孩16例,女孩20例。本试验无脱落病例。对照组予口服蒙脱石散,用法用量:将药（1袋）倒入50ml温开水中,搅匀后口服。<1岁,1袋/日;1-2岁,2袋/日;2-5岁,3袋/日,均每日分3次服用。治疗组予口服止泻方（南豆花10g、紫苏梗6g、白芍10g、板蓝根10g、车前子10g、陈皮6g、法半夏10g、布渣叶10g、火炭母10g、甘草3g、芡实10g、石榴皮10g）。煎煮方法:由我院煎药室统一煎煮（采用JH07240/3001型煎药机、包装机）为袋煎剂,每日一剂（1袋,约150ml）。1岁以下小儿药量减半（半袋,约80 ml）。两组疗程均为4天。分别统计分析患儿治疗前和治疗后的临床症状缓解情况、止泻的时间及大便轮状病毒抗原转阴等情况并对比差异。研究结果:（1）两组治疗前的基线资料（月龄、性别）、病程和治疗前症状及总积分相对比,均无显着性差异（P>0.05）,具有可比性。（2）临床疗效方面:本研究通过观察止泻方治疗小儿轮状病毒性腹泻的临床综合疗效,并与口服蒙脱石散组进行比较,结果显示治疗组的总有效率为97.22%,对照组的总有效率为88.89%,统计学显示二者无显着性差异（P=0.167>0.05）。但两组在临床疗效等级方面有显着性差异（P=0.000<0.01）。说明止泻方在治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻方面疗效仍优于对照组。（3）中医证候积分方面:两组治疗前后在中医症状总积分、次证总积分、大部分单项症状积分方面比较,均有显着性差异,说明两组在改善中医症状积分方面均有明显疗效。在改善主证（大便次数）,及部分次证（包括精神、呕吐、便前哭闹情况、饮食、饮水情况、皮肤、口舌、小便量、肛门皮肤）,止泻方的治疗组疗效明显优于对照组。（4）止泻时间的比较:治疗组的止泻时间也明显短于对照组（P=0.01＜0.05）。（5）轮状病毒抗原转阴方面:治疗组与对照组治疗后轮状病毒抗原转阴情况比较有显着性差异（P=0.004<0.01）,治疗组优于对照组。（6）整个试验研究过程中,治疗前后患儿的肝肾功能检查皆无异常。对照组有2例患儿出现大便干结,1例患儿出现服药后呛咳,治疗组未出现不良反应,说明止泻方安全可靠。结论:通过临床研究表明:止泻方治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻具有良好效果,并能有效地改善临床伴随症状,在症候效果和整体疗效、止泻时间、轮状病毒抗原转阴及安全性方面更具优势,而且不良反应小,口感好、易为小儿接受。
周鸿云[3]（2019）在《基于“五味合化”理论研究人参乌梅汤加味及其性味拆方对腹泻模型大鼠结肠差异基因表达的影响》文中研究说明目的:基于“五味合化”理论,采用全基因芯片技术探索人参乌梅汤加味（酸甘化阴法）对腹泻模型大鼠结肠差异基因的分子调控机制。方法:84只幼龄SD大鼠适应性喂养2d后,随机抽取12只为空白组（A组）,予以生理盐水灌胃（30ml/kg,1次/d）。剩余72只为造模组,参考文献方法,采用苦寒泻下、劳倦力竭复合方法制作腹泻模型。予以25%番泻叶灌胃（20ml/kg,1次/d）;灌胃30min后,大鼠入水游泳（水深40cm,水温30℃,尾部负重约其体重5%铅丝）,至力竭（大鼠鼻尖没水5s）后捞出烘干;连续造模21d。参考文献方法评定造模成功后,随机分为模型组（B组）、西药组（D组）、全方组（人参乌梅汤加味全方,E组）、去甘味药组（人参乌梅汤加味去甘味药,F组）、去酸味药组（人参乌梅汤加味去酸味药,G组）、去辛味药组（人参乌梅汤加味去辛味药,H组）,每组12只;分别予以生理盐水（30ml/kg,1次/d）、5%妈咪爱（0.7g/kg,1次/d）、人参乌梅汤加味全方、人参乌梅汤加味去甘味药、人参乌梅汤加味去酸味药、人参乌梅汤加味去辛味药（各中药组用法均为35g/kg,1次/d）灌胃,连续干预7d。观察造模及干预过程中大鼠一般情况。干预7d后处死大鼠,分别取材送检。（1）取结肠组织经10%甲醛固定液固定,常规HE染色,组织切片光镜下观察结肠病理形态。（2）取结肠组织经RNA保存液固定,进行RNA抽提、质检、纯化、放大标记后,采用Agilent大鼠全基因4*44K芯片进行杂交扫描,对芯片原始数据归一化处理后统计筛选各组间差异基因（FC≥2,p<0.05）;采用GO功能、KEGG pathway富集分析方法对差异基因进行生物信息学分析,初步阐释差异基因相关生物功能。（3）筛选组间重叠差异基因,采用实时荧光定量PCR技术验证芯片实验结果,并统计分析。结果:（1）结肠病理形态观察:西药组、全方组可有效缓解腹泻大鼠一般表现和腹泻情况,并能明显改善腹泻大鼠结肠粘膜溃疡、充血、水肿、炎性浸润等反应,对粘膜具有促损伤修复能力;去甘味药组、去酸味药组、去辛味药组肠粘膜损伤表现不同程度改善,损伤程度较模型组轻。（2）全基因芯片实验及生物信息学分析:（1）模型组与空白组相较,获得差异基因34个,其中上调基因10个,下调基因24个;GO富集获得123个条目,其中生物学过程92条（显着富集（p<0.05）44条）,主要涉及离子转运、离子稳态、发育调节、细胞分化、信号转导、细胞增殖等;pathway富集获取21条通路,主要涉及肥厚型心肌病（HCM）、心肌收缩、MAPK信号通路、神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路等。（2）西药组与模型组相较,获取差异基因16个,其中上调基因6个,下调基因10个;GO富集获得5个条目,其中生物过程2条（无显着富集）,涉及细胞过程调节;pathway富集获得2条通路,涉及嗅觉转导、RNA降解。（3）全方组与模型组相较,获得差异基因51个,其中上调基因17个,下调基因34个;GO富集获得125个条目,其中生物过程80条（显着富集12条）,主要涉及损伤反应、信号转导、转录调控等;pathway富集获得21条通路,主要涉及神经活性配体-受体相互作用、嗅觉转导、赖氨酸降解、蛋白质的消化和吸收、味觉转导、钙信号通路等。（4）去甘味药组与模型组相较,获得差异基因45个,其中上调基因19个,下调基因26个;GO富集获得72个条目,其中生物过程35条,主要涉及对其他有机体的反应、对外部生物刺激的反应等;pathway富集获得37条通路,主要涉及吞噬、嗅觉转导等。（5）去酸味药组与模型组相较,获得差异基因145个,其中上调基因71个,下调基因74个;GO富集获得411个条目,其中生物学过程306条,主要涉及脂质代谢过程的负调控、对干扰素-γ的反应等;pathway富集获得53条通路,主要涉及原发性免疫缺陷、胞质DNA传感通路等。（6）去辛味药组与模型组相较,获得差异基因126个,其中上调基因52个,下调基因74个;GO富集获得574个条目,其中生物学过程439条,主要涉及雄激素生物合成过程、C21类固醇激素生物合成过程等;pathway富集获得73条通路,主要涉及类固醇激素生物合成、色氨酸代谢等。与模型组相较,各拆方组获得差异基因参与的生物功能以去辛味药组最多,各拆方组获得的差异基因及参与的生物功能与全方组比较同时存在相似和不同;所有中药组差异基因及涉及的生物过程、通路均多于西药组。各拆方组与全方组相较,去辛味药组差异基因最少。（3）RT-PCR验证实验:筛选出Nlrp6、Tmem66、Gng10、Shc1、Ctnnb1、Trpm7、Vamp7、Gnas作为验证基因。验证基因经扩增后的整体表达趋势与基因芯片实验结果具有较好的一致性。验证基因经扩增后,与空白组相较,模型组中Gng10、Trpm7差异有统计学（p<0.05）,表达上调;与模型组相较,全方组中Nlrp6、Tmem66差异有统计学意义（p<0.05）,表达下调;且均与芯片实验结果一致。结论:（1）人参乌梅汤加味对腹泻模型大鼠结肠粘膜具有促损伤修复作用。（2）提示腹泻具有多基因、多途径的发病特点。CHRNA7下调影响钙离子调控,CACNA2D3下调、IL1R2上调影响MAPK信号通路,可能参与腹泻的发生发展。（3）初步证明人参乌梅汤加味（酸甘化阴法）可通过调控腹泻模型大鼠结肠差异基因的表达发挥益气生津止泻效应。人参乌梅汤加味复方可能通过下调F2RL3、GHR影响神经活性配体-受体相互作用途径,上调SUV39H2影响赖氨酸降解途径,下调XPNPEP2影响蛋白质的消化和吸收途径发挥治疗效应。（4）结合课题组前期人参乌梅汤加味复方指纹图谱研究基础,提示酸味药+甘味药的配伍合化作用是人参乌梅汤加味复方发挥止泻效应的主要物质基础,并体现了中药复方多成分、多基因、多途径的复杂作用特征。（5）RT-PCR验证实验证实基因芯片实验结果可靠,将Gng10、Trpm7、Nlrp6、Tmem66作为腹泻发病及治疗的分子靶点研究具有一定的潜在价值。
刘博[4]（2019）在《银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻疗效观察》文中指出目的通过对银葛止泻散治疗小儿秋季腹泻（湿热型）的临床观察,并与蒙脱石散对比,评价其治疗效果。方法入选病例均来自保定市第一中医院儿科病房（2017年10月2018年12月）,选择符合小儿秋季腹泻（湿热型）纳入标准的72例患儿（年龄在6个月3岁之间）,按照随机数字表法分组进行试验研究,其中治疗组（银葛止泻散组）36例,对照组（蒙脱石散组）36例,疗程5天。依据中医证候症状体征分级量化计分标准（包括中医证候各项症状体征积分、中医证候总积分）、止泻时间分布、临床总有效率、RV转阴率、安全性等方面,观察评价两组治疗前后临床疗效,结果应用SPSS20.0软件系统进行统计学分析。结果1两组患儿分别在性别、年龄、体重、病程、病情、症状及体征方面,经统计学分析,P>0.05,无统计学差异,具可比性。2两组患儿在临床疗效等级分布及临床疗效总有效率方面,治疗组痊愈21例（占51%）、显效9例（占31%）、有效3例（占11%）、无效2例（占6%）,总有效率为94.29%;对照组痊愈13例（占29%）、显效6例（占34%）、有效8例（占17%）、无效8例（占20%）,总有效率77.14%。治疗组临床疗效等级分布、总疗效方面与对照组相比,比较有统计学差异（P<0.05）。3两组患儿在缩短止泻时间方面,经治疗1d后、2d后、3d后、4d后、5d后的累计例数,治疗组分别为8例、14例、19例、23例、26例,对照组分别为2例、6例、13例、19例、21例。两组患儿在缩短止泻时间方面,经治疗1d后、2d后,比较有统计学差异（P<0.05）;经治疗3d后、4d后、5d后两组患儿止泻时间无明显差异（P>0.05）。4两组患儿治疗前后各项症状、体征比较,在改变大便次数方面无明显差异（P>0.05）;在改善大便性状、腹胀、不思乳食、恶心呕吐、精神状况、发热、小便短黄、肛门红赤、舌苔、指纹方面,两组比较有统计学差异（P<0.05）。5在降低中医证候总积分方面两组间相比,有统计学差异（P<0.05）;在治疗前后中医证候总积分方面两组内相比,有统计学差异（P<0.05）。6两组患儿治疗前、后RV检测变化方面,治疗组的转阴率80.00%,对照组的转阴率57.14%,比较有统计学差异（P<0.05）。7两组因患儿不配合治疗各脱落1例,无临床不良事件发生。两组治疗前后肝肾功能检测,比较无统计学差异（P>0.05）。结论1银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻临床疗效良好,其总体疗效优于蒙脱石散组。2银葛止泻散能明显改善患儿症状,2d内缩短止泻时间方面疗效突出,在改善大便性状、腹胀、不思乳食、恶心呕吐、精神状况、发热、小便短黄、肛门红赤、舌苔、指纹、提高RV转阴率方面均有显着疗效,且未出现明显不良反应。图0幅;表12个;参109篇。
潘家华,羊礼荣,韩旻,周浩泉,祖庆,周晓丽,顾倩,杨晓光,王子斌,李玉桂[5]（2019）在《口服重组人干扰素α2b治疗小儿轮状病毒肠炎的多中心随机双盲对照研究》文中提出目的:评估口服重组人干扰素α2b（rhIFNα2b）治疗小儿轮状病毒性肠炎的有效性和安全性。方法:采用多中心、随机、双盲、安慰剂对照的临床研究方法,于2016年11月至2018年6月期间参加本研究的三家单位共收集符合入组条件的轮状病毒肠炎患儿90例,所有患儿均按照入院时间顺序随机编入安慰剂对照组、小剂量IFNα2b组和大剂量IFNα2b组。所有患儿均给予常规治疗。在常规治疗基础上,安慰剂对照组患儿空腹口服阴性对照药（安慰剂）,2次/天,共3天;小剂量IFNα2b组患儿空腹口服rhIFNα2b每次20万IU/kg,2次/天,共3天;大剂量IFNα2b组患儿空腹口服rhIFNα2b每次40万IU/kg,2次/天,共3天。所有患儿观察7 d,比较三组患儿治疗第3天以及第5天的临床疗效以及症状和体征消失时间,并评估口服rhIFNα2b的安全性。结果:90例患儿均完成研究,其中安慰剂对照组30例、口服小剂量IFNα2b组30例和口服大剂量IFNα2b组30例。三组患儿的年龄、体质量、性别、治疗前腹泻时间和脱水症状评分等情况比较差异均无统计学意义（P>0. 05）;口服大剂量IFNα2b组第3天和第5天的显效率分别为86. 7%和100%,显着高于口服小剂量IFNα2b组的53. 3%和80. 0%和安慰剂对照组的10. 0%和63. 3%（P<0. 01）,口服小剂量IFNα2b组第3天的显效率高于安慰剂对照组（P <0. 05）。口服大剂量IFNα2b组和小剂量IFNα2b组患儿发热消退时间、呕吐消失时间和腹泻消失时间均显着短于安慰剂对照组（P<0. 05）;而大剂量IFNα2b组在发热消退时间、腹泻消失时间和呕吐消失时间方面显着短于小剂量组（P<0. 05）。口服大剂量IFNα2b组第3天大便轮状病毒抗原阴转率为43. 3%,显着高于口服小剂量IFNα2b组的13. 3%和对照组的6. 7%,但治疗第5天三组大便轮状病毒抗原阴转率差异无统计学意义（P>0. 05）。治疗期间未发现明显不良反应。结论:口服干扰素α2b治疗小儿轮状病毒性肠炎临床疗效好,且其临床疗效具有一定的剂量相关性,值得临床进一步探索和推广应用。
姚凌云[6]（2018）在《犬干扰素α2的克隆表达与抗病毒活性分析》文中研究指明干扰素是由多种细胞分泌的蛋白家族成员之一,具有广谱的抗病毒、抗肿瘤细胞增殖和免疫调节等生物学功能。根据干扰素的核苷酸序列和染色体定位,及其与特定受体的相互作用方式、结构与理化性质等,干扰素可以分为Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型3大类。干扰素α属Ⅰ型干扰素家族,是由白细胞分泌产生的一种糖蛋白,具有较高的抗病毒活性,在试验研究和抗病毒治疗中具有很高的临床应用价值。干扰素也存在半衰期短、给药频繁等缺陷,限制了它的临床应用。血清白蛋白是天然存在于动物体内的一类大分子蛋白质,具有性质稳定和半衰期长的特点,在维持胶体渗透压、运输物质和清除自由基等方面有着重要的生理作用,适合用来与干扰素融合表达以延长干扰素的半衰期。本试验通过大肠杆菌表达系统和昆虫/杆状病毒表达系统表达犬干扰素α2,并鉴定其抗病毒活性;再在昆虫/杆状病毒表达系统中分泌表达犬血清白蛋白与犬干扰素α2的融合干扰素,并进一步检测其抗病毒活性,为犬干扰素的研究与临床应用奠定基础。试验1、犬干扰素α2在大肠杆菌的表达与抗病毒活性分析根据Genbank公布的犬干扰素α2序列（M28625.1）,设计并合成编码犬干扰素α2（CaIFN-α2）的成熟蛋白基因,同时引入EcoRI和HindⅢ酶切位点。将合成的CaIFN-α2基因插入表达载体pET-28a（+）,构建表达质粒pET-28a-CaIFN-α2。将鉴定正确的表达质粒pET-28a-CaIFN-α2转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western bolt分析可见分子量约为23 kDa的目的蛋白,主要以包涵体的形式存在,表达量约占菌体总蛋白的52.5%。蛋白包涵体经变性、复性和纯化后,获得的重组CaIFN-α2纯度为92%。用犬肾细胞（MDCK）/水疱性口炎病毒（VSV）系统检测重组CaIFN-α2的抗病毒活性为3.16×106U/ml。本试验成功构建pET-28a-CaIFN-α2表达质粒,并在大肠杆菌中实现表达,表达的重组CaIFN-α2具有较好的抗病毒活性,为进一步研究新型犬用干扰素制品提供了依据。试验2、犬干扰素α2在昆虫细胞的表达与抗病毒活性测定本试验将合成的编码CaIFN-α2成熟蛋白基因插入pFastBacHTA载体,转化DH1OBac细胞。经过3次筛选纯化,获得重组穿梭质粒Bacmid-CaIFN-α2,并转染Sf 9细胞后收获重组杆状病毒rBac-CaIFN-α2。rBac-CaIFN-α2传至第3代后,用P3代rBac-CaIFN-α2感染Sf 9昆虫细胞3 d,收获昆虫细胞进行SDS-PAGE、IFA和Western blot分析CaIFN-α2的表达。IFA结果表明,CaIFN-α2可在昆虫细胞中表达,SDS-PAGE和Western blot均检测到25和28 kDa的表达产物。利用MDCK/VSV系统检测重组CaIFN-α2的抗病毒活性,表达的重组CaIFN-α2能够有效抑制VSV对MDCK细胞的攻击,细胞裂解物的抗病毒活性为5.58×105 U/mL。试验3、犬融合干扰素α2在昆虫细胞的表达将编码犬血清白蛋白（Alb）基因与CaIFN-α2成熟蛋白基因用柔性肽（GGGGS）连接,并在犬血清白蛋白基因N端接入蜂素信号肽基因（HBM）。将合成的融合基因HBM-Alb-CaIFN-α2插入pFastBacI载体,转化DH1OBac细胞。经过3次筛选纯化,获得重组穿梭质粒Bacmid-HBM-Alb-CaIFN-α2,并转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2。重组杆状病毒传至第3代后,用P3代感染Sf 9昆虫细胞3 d,收获昆虫细胞进行SDS-PAGE、IFA和Western blot分析重组犬融合干扰素α2的表达。IFA结果表明,重组犬融合干扰素α2可在昆虫细胞表达;SDS-PAGE和Western blot均检测到上清培养物存在90 kDa的表达产物,表明获得分泌性表达,符合预期结果。用MDCK/VSV系统检测重组犬融合干扰素a2的抗病毒活性,表达的重组犬融合干扰素α2对MDCK细胞遭受VSV的攻击具有抑制作用,细胞培养上清的抗病毒活性为 1.78×104U/mL。
王伟[7]（2017）在《五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效及其体外抗病毒的实验研究》文中研究说明研究目的1.文献研究检索历年有关“轮状病毒性肠炎”（RVE）的文献,系统研究并总结国内外研究的动态,中西医对病毒性肠炎的诊疗进展,尤其是中医药治疗的独特优势。2.临床研究进行五加减正气散（WJJZQS）治疗小儿寒湿型RVE的临床疗效评价,分析经典古方五加减正气散在治疗寒湿型RVE中的治疗优势。3.实验研究进行五加减正气散含药血清作用于体外细胞染毒模型后其抗病毒机制的研究;并进一步检测其对IL-6、IL-1 β、TNF-α、IFN-β因子以及对TLR3信号通路关键蛋白的调控作用,探讨五加减正气散抗轮状病毒的免疫学机制。研究方法1.文献研究查阅国内外文献数据库,通过对RVE的相关文献检索,了解国内外研究动态,分别完成中医对RVE的研究进展综述（包括病名及沿革、病因病机、治则治法、辨证分型、中医治疗等）,以及西医对RVE的研究进展综述（包括流行病学特征、RV的病原学特征、发病机制、临床表现及诊断、治疗方法等）。2.临床研究2.1研究对象研究对象来自2014年10月至2016年6月,山东中医药大学附属医院门诊及住院的中医诊断为寒湿型RVE的患儿,年龄6个月-3岁,病情属轻、中型,共计60例。按随机对照原则分为治疗组、对照组各30例。2.2治疗方法在常规饮食及生活调摄指导基础上,根据脱水情况对症应用ORS治疗外,治疗组应用《温病条辨》五加减正气散原方:藿香12g、苍术12g、陈皮10g、厚朴12g、大腹皮10g、茯苓18g、谷芽6g治疗。以上药物全部采用中药饮片,并由山东中医药大学附属医院药剂科代煎,每剂浓缩制成100ml/袋的液体。6个月-1岁每日20ml,1-2岁每日25ml,2岁以上每日35ml。分早晚两次,连服3天。对照组应用利巴韦林颗粒,50mg/粒,按15mg/kg·d剂量应用,分3次口服,连续3天。2.3观察指标通过治疗前后腹泻、腹痛、发热、呕吐、精神状态等临床表现观察,进行治疗前后中医症状积分、证候总积分、证候疗效、综合疗效、大便RV抗原转阴率、不良反应发生情况等比较,结合治疗前后三大常规、肝肾功、心电图等检查评估,完成五加减正气散治疗小儿寒湿型RVE的临床疗效评价。3.实验研究3.1实验材料病毒株与细胞株:轮状病毒SA11株（RV SA11）,恒河猴胚胎肾细胞（MA104）为RVSA11株敏感细胞。动物:SPF级Wistar大鼠36只,体质量160g-200g,雌雄各半。药物:五加减正气散原方（同上）、利巴韦林颗粒、藿香正气口服液等。3.2含药血清制备36只Wistar大鼠适应性饲养7d后,按体质量随机分为:空白组、中成药组、西药组及WJJZQS大、中、小剂量组共6组,每组6只,雌雄各半。给药量按成人日用量等效剂量换算后,分别给予0.9%生理盐水、蕾香正气液、利巴韦林颗粒液、五加减正气散大、中、小剂量灌胃。每日分2次,连续3天。末次灌胃1h后取血。3.3 WJJZQS含药血清对RV SA11的体外抗病毒作用采用细胞病变法（CPE）检测WJJZQS含药血清（大、中、小剂量组）对MA104的最大无毒浓度（TC0）和RVSA11对MA104细胞的半数组织感染量（TCID50）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法,在TC0范围内,检测WJJZQS含药血清对RVSA11的体外抗病毒作用。3.4 WJJZQS含药血清对TLR/TRIF/IRF3信号通路及下游因子的调控作用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-6、IL-1 β、TNF-α、IFN-β的含量;RT-PCR法检测细胞中TLR3、TRIF、IRF3mRNA的表达情况;Western blot法检测细胞中TLR3、TRIF、IRF3蛋白的表达情况。研究结果1.文献研究中医多以“泄泻”论治RVE。以辨证论治为特色的中医药疗法应用广泛,且临床疗效确切,但缺乏有力的临床疗效评价及实验研究论证。西医在临床及基础研究方面虽取得了很多进展,但仍没有针对肠道病毒的特效药物,仅采取对症治疗。2.临床研究2.1病例基本情况治疗期间除对照组出现不良反应（轻度皮疹）脱落1例,余患儿均未出现不良反应,并坚持治疗至疗程结束,资料齐全。实际共收集病例59例,治疗组30例,对照组29例。2.2 一般资料比较两组性别分布、年龄分布、病情轻重比较均无显着性差异,具有可比性（P>0.05）。2.3治疗前后症状积分比较两组患儿治疗前各症状积分比较均无显着性差异（P>0.05）。治疗后两组症状积分均有不同程度降低,与对照组相比,除倦怠乏力、恶寒/发热积分差异不显着外（P>0.05）,治疗组余症状改善程度均优于对照组,具有统计学意义（P<0.05）。其中腹泻、恶心呕吐、食欲不振改善明显优于对照组,差异特别显着（P<0.01）。2.4治疗前后证候总积分比较两组组内治疗前后证候总积分差比较,均具有统计学意义（P<0.05）。组间治疗前后证候总积分差比较,治疗组明显优于对照组（P<0.05）。2.5治疗后证候疗效比较两组总有效率比较,无统计学意义（P>0.05）;两组显效率比较,具有统计学意义（P<0.05）。2.6治疗后综合疗效比较两组显效率比较,无统计学意义（P>0.05）;两组总有效率比较,具有统计学意义（P<0.05）。2.7大便RV抗原转阴率比较两组大便RV抗原转阴率比较,治疗组明显优于对照组（P<0.05）。2.8不良反应发生情况比较对照组1例,服药1天后出现轻度皮疹,病例脱落。未予特殊处理2天后皮疹渐退。余两组患儿治疗前后均未出现不良反应及副作用,治疗前后肝、肾功,心电图等均正常。两组不良反应发生率差异无统计学意义（P>0.05）。3.实验研究3.1 RV SA11毒力测定RV SA11 对 MA104 细胞的 TCID50 10-3 34/ml:3.2含药血清的细胞毒性WJJZQS含药血清（大、中、小剂量组）对MA104细胞的TC0均为20%;3.3含药血清对病毒生物合成的抑制作用与同浓度空白血清组比较,除WJJZQS小剂量50%浓度组抑毒率差异不显着外（P>0.05）,余各组抑毒率均优于空白血清组,具有统计学意义（P<0.05）。其中WJJZQS中剂量各浓度组抑毒率均明显优于空白血清组,差异特别显着（P<0.01）。与同浓度中成药组比较,除WJJZQS中剂量5%浓度组抑毒率明显优于中成药组外（P<0.05）,余各组抑毒率与同浓度中成药组比较均无显着性差异（P>0.05）。与同浓度西药组比较,除WJJZQS小剂量各浓度组抑毒率明显低于西药组,差异显着外（P<0.05）,余各组抑毒率与同浓度西药组比较均无显着性差异（P>0.05）。组内不同浓度多重比较结果,说明各组均能有效抑制RV合成,并呈现一定剂量依赖关系（P<0.05或0.01）。3.4含药血清抗病毒吸附试验除空白血清组在20%浓度抗病毒吸附率为4.04%外,其余各组含药血清的TC0范围内各浓度,对RV吸附的过程均没有明显的抑制作用（P>0.05）。3.5含药血清直接灭活病毒试验各组含药血清的TC。范围内各浓度,对RV均无直接灭活作用（P>0.05）。3.6 WJJZQS含药血清对染毒细胞IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-β表达的影响病毒感染细胞后,各组IL-6表达量明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组IL-6表达量较染毒组均不同程度降低。与染毒组比较,WJJZQS中剂量组、中成药组能明显下调IL-6的表达水平,差异特别显着（P<0.01）;大剂量组亦可下调IL-6的高表达,且差异显着（P<0.05）;WJJZQS小剂量组、西药组虽能使细胞IL-6的高表达降低,但与染毒组比较,无显着性差异（P>0.05）。病毒感染细胞后,各组IL-1β表达量明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组IL-1β表达量较染毒组均不同程度降低。WJJZQS大、中剂量组下调IL-1β作用最强（P<0.01）;其次为中成药、小剂量组（P<0.05）;西药组对IL-1β表达无明显调控作用（P>0.05）。病毒感染细胞后,各组TNF-α表达量明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组TNF-α表达量较染毒组均不同程度降低。WJJZQS小剂量组可明显下调TNF-α的高表达,差异显着（P<0.05）;其余各组的调控作用则更强（依次为中成药组、西药组、WJJZQS中剂量、大剂量组）,差异特别显着（P<0.01）。病毒感染细胞后,各组IFN-β表达量明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组IFN-β表达量较染毒组均不同程度升高。WJJZQS中剂量组、中成药组上调IFN-β表达作用最强（P<0.01）;WJJZQS大剂量组亦可上调IFN-β的表达（P<0.05）;WJJZQS小剂量组、西药组对IFN-β表达无明显调控作用（P>0.05）。3.7 WJJZQS含药血清对染毒细胞TLR3、TRIF、IRF3 mRNA表达的影响病毒感染细胞后,TLR3mRNA明显升高（与空白组比较P<0.01）,含药血清干预后,各组TLR3mRNA表达量较染毒组均不同程度降低。其中WJJZQS大、中剂量组可明显下调TLR3mRNA的过表达（P<0.01）,WJJZQS小剂量组、中成药组、西药组均有不同程度的下调TLR3mRNA表达的作用（P<0.05）。病毒感染细胞后,TRIFmRNA明显升高（与空白组比较P<0.01）,含药血清干预后,各组TRIFmRNA表达量较染毒组均不同程度降低。其中以WJJZQS中剂量组、中成药组下调作用尤为显着（P<0.01）。WJJZQS大剂量组也可显着下调TRIFmRNA的过表达（P<0.05）。WJJZQS小剂量组、西药组调控作用不明显（P>0.05）。病毒感染细胞后,IRF3mRNA表达量虽较空白组升高,但经统计学分析无显着性差异（P>0.05）。含药血清干预后,虽各组IRF3mRNA表达较染毒组均不同程度降低,但下降幅度小于1.5倍,不具有统计学意义（P>0.05）。故各组含药血清对IRF3mRNA的表达无明显调控作用。3.8 WJJZQS含药血清对染毒细胞TLR3、TRIF、IRF3蛋白表达的影响病毒感染细胞后,TLR3蛋白表达明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组TLR3蛋白表达量较染毒组均有不同程度降低。其中WJJZQS大、中剂量组较染毒组显着降低（P<0.01）,WJJZQS小剂量组、中成药组、西药组TLR3蛋白表达量亦有不同程度降低（P<0.05）。病毒感染细胞后,TRIF蛋白表达明显升高（与空白组比较P<0.01）。含药血清干预后,各组TRIF蛋白表达量较染毒组均有不同程度降低。其中WJJZQS中剂量组、中成药组较染毒组显着降低（P<0.01）,WJJZQS大剂量组TRIF蛋白表达量亦显着降低（P<0.05）;WJJZQS小剂量组、西药组虽蛋白表达量减少,但差异不显着（P>0.05）。病毒感染细胞后,IRF3蛋白表达量虽较空白组升高,但经统计学分析,无显着性差异（P>0.05）。含药血清干预后,虽各组IRF3蛋白表达量较染毒组不同程度降低,但经数据分析,亦无统计学意义（P>0.05）。研究结论1.文献研究中医药在治疗RVE临床疗效确切,但缺乏有力的临床疗效评价及实验研究论证。2.临床研究WJJZQS可明显改善寒湿型RVE患儿腹泻、腹痛/肠鸣、恶心呕吐、脘腹闷胀、食欲不振症状积分,尤其是腹泻、恶心呕吐、食欲不振改善程度明显优于对照组。而倦怠乏力、恶寒/发热改善程度与对照组相当。治疗前后证候总积分、证候疗效（显效率）、综合疗效（总有效率）、大便RV抗原转阴率等方面,明显优于对照组。WJJZQS治疗寒湿型RVE,安全有效,值得深入研究并临床推广应用。3.实验研究（1）WJJZQS具有的抗病毒作用,不是通过抗病毒吸附和对病毒的直接杀灭作用实现的,其抗病毒作用可能是通过抑制病毒进入细胞后的病毒生物合成作用。（2）WJJZQS通过下调IL-6、IL-1β、TNF-α等致炎因子的过表达,上调抑炎因子IFN-β的表达,发挥辅助的抗病毒作用。（3）WJJZQS对特异性识别dsRNA病毒的TLR3信号通路关键蛋白TLR3、TRIF表达有一定的调控作用,但对IRF3的表达则无显着调控作用。
申昆玲,张国成,尚云晓,李兴旺,徐樨巍,陈强,鲍一笑,符州,赵德育,刘长山,孙新[8]（2015）在《重组人干扰素-α1b在儿科的临床应用专家共识》文中认为干扰素（interferon,IFN）是一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的蛋白质,包括Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型,分别具有不同的受体和功能,是机体天然免疫的关键组成部分。其中Ⅰ型IFN于1957年发现[1],是人和动物受病毒感染后产生的重要抗病毒物质,根据其基因和蛋白结构的不同,又分为IFN-α、IFN-β、IFN-ε、IFN-κ、IFN-ω等[2]。IFN-α已有3个亚型被批准为药品在临床
孙海娜,任玲丽[9]（2013）在《α-2b干扰素在小儿轮状病毒性肠炎治疗中的作用》文中研究说明目的探讨注射用重组人干扰素α-2b在小儿轮状病毒性肠炎治疗中的作用。方法 96例轮状病毒肠炎患儿分别采用常规治疗、α-2b干扰素治疗和利巴韦林治疗,比较三组疗效及不良反应。结果α-2b干扰素组、抗病毒组和常规组总有效率差异有显着性。α-2b干扰素组患儿的退热时间、止泻时间、脱水纠正时间、住院时间较抗病毒组明显缩短,且差异有显着性。治疗后4天三组患儿的白细胞、中性粒细胞杆状核及分叶核计数差异有显着性。三组患儿的不良反应发生率差异无显着性。结论重组人干扰素α-2b治疗小儿轮状病毒性肠炎疗效较好,安全性高。
汤晶晶,韩新民[10]（2013）在《小儿轮状病毒肠炎研究进展》文中认为轮状病毒（RV）感染引起的腹泻位居小儿腹泻第一位。文章从中医、西医学两个方面总结了轮状病毒肠炎的理论与临床研究进展,并指出当前研究存在的一些缺陷和今后的研究方向,进一步认为目前西医尚无特效药,而中医药具有简便廉效的优势,应用广泛。
二、干扰素α-2a治疗轮状病毒性肠炎85例临床分析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干扰素α-2a治疗轮状病毒性肠炎85例临床分析（论文提纲范文）
（1）心肌酶谱检测在小儿轮状病毒性肠炎中的应用价值分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 1、前言 |
| 2、材料与方法 |
| 2.1 患儿的一般临床资料 |
| 2.2 纳入标准 |
| 2.3 排除标准 |
| 2.4 诊断依据 |
| 2.5 方法 |
| 2.6 一般治疗 |
| 2.7 观察指标 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3、结果 |
| 3.1 两组患者的一般资料 |
| 3.2 两组患儿治疗前后心肌酶谱变化 |
| 3.3 两组患儿不同腹泻程度(不同程度脱水及酸中毒)心肌酶谱水平比较 |
| 3.4 心肌酶升高者同时行心电图、胸片、心脏彩超等器械检查结果 |
| 4、讨论 |
| 4.1 轮状病毒感染性肠炎与心肌酶谱之间的关系 |
| 4.2 腹泻严重程度与心肌酶谱之间的关系 |
| 4.3 轮状病毒感染的肠外表现 |
| 4.4 轮状病毒心肌损伤的预后 |
| 5、展望与不足 |
| 5.1 展望 |
| 5.2 不足 |
| 6、结论 |
| 参考文献 |
| 综述 轮状病毒性胃肠炎的治疗与疫苗应用研究进展 |
| 1、概述 |
| 2、轮状病毒治疗的研究进展 |
| 2.1 免疫球蛋白Y的应用进展 |
| 2.2 抗病毒治疗进展 |
| 2.3 益生菌 |
| 2.4 植物及中草药 |
| 3、轮状病毒疫苗的研究进展 |
| 3.1 轮状病毒疫苗使用现状 |
| 3.2 轮状病毒疫苗对肠外疾病的影响 |
| 3.3 我国轮状病毒疫苗使用情况 |
| 3.4 目前轮状病毒疫苗应用中的问题 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（2）止泻方治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻的临床观察（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 中医学 |
| 一、祖国医学对本病病名的认识 |
| 二、中医病因病机的研究 |
| 三、中医药的辨证及治疗 |
| 四、止泻方辨析 |
| 第二节 现代医学 |
| 一、轮状病毒性腹泻的概述及流行病学 |
| 二、病理和发病机制 |
| 三、轮状病毒性腹泻的并发症 |
| 四、治疗 |
| 五、健康教育 |
| 第二章 临床研究 |
| 第一节 临床资料 |
| 一、病例来源及样本量估算 |
| 二、诊断标准 |
| 第二节 临床试验方案 |
| 一、研究对象 |
| 二、分组方法 |
| 三、治疗方案 |
| 四、观察指标 |
| 五、临床疗效评定 |
| 六、统计方法 |
| 七、技术路线 |
| 第三节 研究结果 |
| 一、病例收集情况 |
| 二、治疗前背景资料均衡性分析 |
| 三、疗效结果 |
| 四、安全性分析 |
| 第三章 讨论 |
| 一、止泻方治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻的疗效分析 |
| 二、小儿湿热型轮状病毒性腹泻疗程 |
| 三、不良反应 |
| 四、小儿泄泻治疗中“固涩”与“留寇”的探讨 |
| 五、总结 |
| 六、不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录 1: 随机入表 |
| 附录 2: 随机分组表 |
| 附录 3: 中医症状积分评价量表 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（3）基于“五味合化”理论研究人参乌梅汤加味及其性味拆方对腹泻模型大鼠结肠差异基因表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文对照缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 中药药性理论的认识及研究进展 |
| 1.1 中药药性理论的内涵 |
| 1.2 “五味合化”的性味配伍理论 |
| 1.3 酸甘化阴法的研究价值 |
| 2 小儿腹泻病的中西医认识及研究进展 |
| 2.1 祖国医学对小儿腹泻病的认识及研究进展 |
| 2.2 西医对小儿腹泻病的认识及研究进展 |
| 3 人参乌梅汤的认识及研究进展 |
| 3.1 人参乌梅汤的历史渊源 |
| 3.2 人参乌梅汤的临床实践 |
| 3.3 人参乌梅汤的实验研究 |
| 4 现代生物分子技术在中药复方的研究应用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 人参乌梅汤加味及其性味拆方作用腹泻模型大鼠结肠病理形态学观察实验 |
| 1 材料与仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 主要试剂与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 药物制备 |
| 2.3 模型制备 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般情况观察 |
| 3.2 结肠病理形态学观察 |
| 4 小结 |
| 实验二 人参乌梅汤加味及其性味拆方干预的腹泻模型大鼠结肠全基因芯片实验 |
| 1 材料与仪器 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验用药 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 药物及模型制备 |
| 2.3 实验取材 |
| 2.4差异基因筛选实验 |
| 2.5 统计分析 |
| 2.6 芯片质控 |
| 3 结果 |
| 3.1 总RNA质检结果 |
| 3.2 芯片实验结果质控 |
| 3.3 芯片荧光信号扫描图片结果 |
| 3.4 芯片数据结果质量评价 |
| 3.5 差异基因筛选结果 |
| 4 小结 |
| 实验三 人参乌梅汤加味及其拆方干预的腹泻大鼠结肠差异表达基因生物信息学分析 |
| 1 实验方法 |
| 2 实验步骤 |
| 3 结果 |
| 3.1 差异基因GO功能富集分析结果 |
| 3.2 差异基因KEGG pathway富集分析结果 |
| 4 小结 |
| 实验四 人参乌梅汤加味及其拆方干预的腹泻模型大鼠结肠基因芯片实验结果实时荧光PCR验证实验 |
| 1 实验用品 |
| 1.1 实验样品 |
| 1.2 Real-time PCR验证差异基因筛选 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 引物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 RNA抽提 |
| 2.2 RNA质检 |
| 2.3 反转录 |
| 2.4 SYBR Green qPCR |
| 2.5 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 RNA质检结果 |
| 3.2 RT-PCR验证结果 |
| 3.3 验证基因生物信息学分析结果 |
| 4 小结 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 腹泻动物模型的制备 |
| 1.1 腹泻模型动物选择 |
| 1.2 腹泻疾病模型制备的常用药物及方法 |
| 1.3 腹泻病证结合动物模型制备方法 |
| 1.4 课题组前期动物腹泻模型研究 |
| 2 人参乌梅汤加味组方理论 |
| 2.1 人参乌梅汤加味立论及方解 |
| 2.2 人参乌梅汤加味的效应评价 |
| 2.3 人参乌梅汤加味的现代机制研究 |
| 3 人参乌梅汤加味对幼龄腹泻大鼠结肠差异基因表达的调控机制 |
| 3.1 基因芯片技术在腹泻病的应用 |
| 3.2 全基因芯片实验结果讨论 |
| 3.3 芯片实验RT-PCR验证结果讨论 |
| 第四部分 结论 |
| 创新性 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1:综述 |
| 参考文献 |
| 附件2:全基因实验荧光芯片扫描图 |
| 附件3:在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（4）银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻疗效观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略表 |
| 引言 |
| 第1章 临床研究 |
| 1.1 研究内容 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 诊断标准 |
| 1.1.3 纳入标准 |
| 1.1.4 排除标准 |
| 1.1.5 脱落指标 |
| 1.1.6 剔除指标 |
| 1.1.7 试验中止指标 |
| 1.1.8 治疗方法 |
| 1.1.9 观测指标 |
| 1.1.10 疗效判定标准 |
| 1.1.11 统计学方法 |
| 1.2 研究结果 |
| 1.2.1 一般资料对比及分析 |
| 1.2.2 临床疗效观测及对比 |
| 1.2.3 相关安全性项目观测 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻理论基础 |
| 1.3.2 银葛止泻散组方用药分析 |
| 1.3.3 银葛止泻散剂型特点 |
| 1.3.4 蒙脱石散(思密达) |
| 1.3.5 银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻研究结果分析 |
| 1.3.6 疗程及其它 |
| 1.4 问题及展望 |
| 1.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 中医学对小儿秋季腹泻的认识 |
| 2.1.1 病名及概念 |
| 2.1.2 病因病机 |
| 2.1.3 辨证论治 |
| 2.2 现代医学对小儿秋季腹泻的认识 |
| 2.2.1 概念及病因 |
| 2.2.2 流行病学 |
| 2.2.3 发病机制 |
| 2.2.4 西医治疗 |
| 2.3 相关药物现代药理研究 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录A 病历资料 |
| 致谢 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 学位论文数据集 |
（5）口服重组人干扰素α2b治疗小儿轮状病毒肠炎的多中心随机双盲对照研究（论文提纲范文）
| 1 资料和方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 治疗方案 |
| 1.2.2 试验药物 |
| 1.2.3 试验药物服用方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 疗效和安全性评价指标 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 三组患儿临床疗效比较 |
| 2.2 三组患儿症状和体征消失时间比较 |
| 2.3 三组患儿大便轮状病毒抗原阴转率比较 |
| 2.4 三组患儿脱水程度评分比较 |
| 2.5 三组患儿生命体征比较 |
| 2.6 三组患儿治疗前后血常规比较 |
| 2.7 三组患儿大便常规及不良反应比较 |
| 3 讨论 |
（6）犬干扰素α2的克隆表达与抗病毒活性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号及缩略语 |
| 绪论 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 干扰素的研究进展与应用 |
| 1 干扰素的起源与生物进化 |
| 2 干扰素的分类与分布 |
| 3 干扰素的诱导产生及机理 |
| 3.1 干扰素诱导剂及诱导产生 |
| 3.2 干扰素的产生机理 |
| 4 干扰素作用的信号转导通路 |
| 5 犬干扰素研究进展 |
| 5.1 犬干扰素分类与特点 |
| 5.2 重组犬干扰素研究现状 |
| 6 干扰素在犬病治疗中的应用 |
| 6.1 干扰素的抗肿瘤作用 |
| 6.2 干扰素的抗病毒作用 |
| 6.3 干扰素的免疫调节作用 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第二章 犬干扰素α2在大肠杆菌的表达与抗病毒活性分析 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 菌株、载体、病毒及细胞 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2 方法 |
| 2.1 成熟CaIFN-α2基因的设计与合成 |
| 2.2 成熟CaIFN-α2基因的扩增 |
| 2.3 重组表达质粒pET-28a-CaIFN-α2的构建 |
| 2.4 重组CaIFN-α2的表达与鉴定 |
| 2.5 重组CaIFN-α2表达条件的优化 |
| 2.6 重组CaIFN-α2包涵体的变性、复性及纯化 |
| 2.7 重组CaIFN-α2的抗病毒活性测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 成熟CaIFN-α2的扩增 |
| 3.2 重组表达质粒(pET-28a-CaIFN-α2)的鉴定 |
| 3.3 重组CaIFN-α2的表达分析 |
| 3.4 重组CaIFN-α2的可溶性分析 |
| 3.5 重组CaIFN-α2的Western blot检测 |
| 3.6 诱导表达条件的优化 |
| 3.7 重组CaIFN-α2的纯化 |
| 3.8 重组CaIFN-α2的抗病毒活性分析 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 犬干扰素α2在昆虫细胞的表达与抗病毒活性测定 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 菌株、载体、病毒及细胞 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2 方法 |
| 2.1 成熟CaIFN-α2基因的获得 |
| 2.2 重组转移质粒pFastBacHTA-CaIFN-α2的构建 |
| 2.3 重组转移质粒pFastBacHTA-CaIFN-α2的筛选与鉴定 |
| 2.4 重组穿梭质粒Bacmid-CaIFN-α2的构建与鉴定 |
| 2.5 重组杆状病毒rBac-CaIFN-α2的构建与鉴定 |
| 2.6 重组CaIFN-α2在Sf9昆虫细胞中的表达与检测 |
| 2.7 重组CaIFN-α2的抗病毒活性测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 转移载体pFastBacHTA-CaIFN-α2的构建 |
| 3.2 重组穿梭载体Bacmid-CaIFN-α2的构建 |
| 3.3 转染Sf9昆虫细胞后的病变情况 |
| 3.4 重组杆状病毒rBac-CaIFN-α2的获得与鉴定 |
| 3.5 重组CaIFN-α2在Sf9细胞中表达的SDS-PAGE分析 |
| 3.6 重组CaIFN-α2的Western blot鉴定 |
| 3.7 间接免疫荧光(IFA)检测重组CaIFN-α2的表达 |
| 3.8 重组CaIFN-a2的抗病毒活性测定 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 犬融合干扰素α2在昆虫细胞的表达 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 菌株、载体、病毒及细胞 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2 方法 |
| 2.1 融合基因HBM-Alb-CaIFN-α2的设计与获得 |
| 2.2 重组转移质粒pFastBacI-HBM-Alb-CaIFN-a2的筛选与鉴定 |
| 2.3 重组穿梭质粒Bacmid-HBM-Alb-CaIFN-a2的构建与鉴定 |
| 2.4 重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-a2的构建与鉴定 |
| 2.5 重组HBM-Alb-CaIFN-α2在Sf9昆虫细胞的表达与检测 |
| 2.6 重组HBM-Alb-CaIFN-α2的抗病毒活性测定 |
| 3 结果 |
| 3.1 转移载体pFastBacI-HBM-Alb-CaIFN-α2的鉴定 |
| 3.2 重组穿梭载体Bacmid-HBM-Alb-CaIFN-α2的构建 |
| 3.3 转染Sf9昆虫细胞后的病变情况 |
| 3.4 重组杆状病毒rBac-HBM-Alb-CaIFN-α2的获得与鉴定 |
| 3.5 间接免疫荧光(IFA)检测重组融合CaIFN-α2的表达 |
| 3.6 SDS-PAGE分析 |
| 3.7 重组融合CaIFN-α2的Western blot鉴定 |
| 3.8 重组融合CaIFN-α2的抗病毒活性测定 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 附录: 常用试剂的配制 |
| 致谢 |
（7）五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效及其体外抗病毒的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 中西医学对轮状病毒性肠炎的研究进展 |
| 1. 中医对轮状病毒性肠炎的研究进展 |
| 1.1 病名及沿革 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.2.1 感受外邪 |
| 1.2.2 饮食所伤 |
| 1.2.3 情志不畅 |
| 1.2.4 病后体虚 |
| 1.2.5 肾命火衰 |
| 1.3 治法方药 |
| 1.4 辨证分型 |
| 1.4.1 辨证要点 |
| 1.4.2 疾病分型 |
| 1.5 中医治疗 |
| 1.5.1 经典治疗 |
| 1.5.2 现代中医治疗 |
| 1.6 现代中西医结合治疗 |
| 2. 西医对轮状病毒性肠炎的研究进展 |
| 2.1 流行病学特征 |
| 2.2 轮状病毒的病原学特征 |
| 2.3 发病机制 |
| 2.4 临床表现及诊断 |
| 2.5 常用治疗方法 |
| 2.5.1 液体疗法 |
| 2.5.2 抗病毒及免疫疗法 |
| 2.5.3 微生态制剂 |
| 2.5.4 肠黏膜保护剂 |
| 2.5.5 RV疫苗 |
| 2.5.6 补锌治疗 |
| 第二部分 五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效评价 |
| 1. 临床资料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.2.1 西医诊断标准 |
| 1.2.2 中医证候诊断标准 |
| 1.2.3 中医证候量化标准 |
| 1.2.4 中医证候轻重判定标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 脱落标准 |
| 2. 研究方法 |
| 2.1 临床分组 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 3. 疗效判定标准 |
| 3.1 综合疗效判定标准 |
| 3.2 症状量化判定标准 |
| 3.3 证候疗效判定标准 |
| 3.4 安全性评价标准 |
| 3.5 不良事件轻重程度判断标准 |
| 3.6 医学伦理控制 |
| 3.7 统计学处理方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 病例基本情况 |
| 4.2 一般资料比较 |
| 4.2.1 两组性别分布比较 |
| 4.2.2 两组年龄分布比较 |
| 4.2.3 两组病情轻重比较 |
| 4.3 两组治疗前后临床疗效比较 |
| 4.3.1 治疗前后症状积分比较 |
| 4.3.2 治疗前后证候总积分比较 |
| 4.3.3 治疗后证候疗效比较 |
| 4.3.4 治疗后综合疗效比较 |
| 4.3.5 大便RV抗原转阴率比较 |
| 4.3.6 不良反应发生情况比较 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 五加减正气散出处及组方依据 |
| 5.1.1 原方出处及方义 |
| 5.1.2 药物分析 |
| 5.2 五加减正气散治疗小儿RVE的理论依据 |
| 5.2.1 基于“温病理论”辨治RVE的思路 |
| 5.2.2 小儿生理病理特点与RVE发病的关系 |
| 5.3 利巴韦林在病毒性肠炎中的临床应用 |
| 5.3.1 药物概述 |
| 5.3.2 利巴韦林在治疗中的应用 |
| 5.4 临床研究结果分析 |
| 6. 小结 |
| 第三部分 五加减正气散抗体外轮状病毒的作用机制探讨 |
| 实验一 五加减正气散含药血清抗体外轮状病毒的实验研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 病毒株与细胞株 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 试剂 |
| 1.5 主要仪器及实验室 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 血清制备 |
| 2.1.1 分组 |
| 2.1.2 给药 |
| 2.1.3 取血 |
| 2.2 MA104细胞的复苏及传代 |
| 2.3 病毒活化 |
| 2.4 病毒毒力测定 |
| 2.5 含药血清体外抗病毒试验 |
| 2.5.1 含药血清的前处理 |
| 2.5.2 制备96孔板内单层细胞 |
| 2.5.3 含药血清的细胞毒性试验 |
| 2.5.4 含药血清对病毒生物合成抑制作用的测定 |
| 2.5.5 含药血清抗病毒吸附试验 |
| 2.5.6 含药血清直接灭活病毒试验 |
| 2.6 统计方法 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 RV SA11毒力测定 |
| 3.2 含药血清的细胞毒性 |
| 3.3 含药血清对病毒生物合成的抑制作用 |
| 3.4 含药血清抗病毒吸附试验 |
| 3.5 含药血清直接灭活病毒试验 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验二 五加减正气散含药血清对染毒细胞IL-6、IL-1β、TNF-α及IFN-β的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 检测原理 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.3 数据统计 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 WJJZQS对染毒细胞IL-6表达水平的调控作用 |
| 3.2 WJJZQS对染毒细胞IL-1β表达水平的调控作用 |
| 3.3 WJJZQS对染毒细胞TNF-α表达水平的调控作用 |
| 3.4 WJJZQS对染毒细胞IFN-β表达水平的调控作用 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 实验三 五加减正气散含药血清对染毒细胞TLR3、TRIF、IRF3 mRNA表达的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 细胞总RNA的提取 |
| 2.2 反转录 |
| 2.2.1 去除基因组DNA反应 |
| 2.2.2 逆转录反应 |
| 2.3 实时荧光定量PCR |
| 2.3.1 实时荧光检测PCR引物 |
| 2.3.2 进行Realtime PCR反应 |
| 2.4 计算 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 WJJZQS对染毒细胞TLR3 mRNA表达的影响 |
| 3.2 WJJZQS对染毒细胞TRIF mRNA表达的影响 |
| 3.3 WJJZQS对染毒细胞IRF3 mRNA表达的影响 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 Toll样受体(TLRs)家族 |
| 4.2 TLR3信号通路在RV感染中的作用 |
| 4.3 WJJZQS对TLR3、TRIF、IRF3 mRNA表达的调控作用 |
| 5. 小结 |
| 实验四 五加减正气散含药血清对染毒细胞TLR3、TRIF、IRF3蛋白表达的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验试剂 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 制备蛋白样品 |
| 2.2 BCA法测蛋白浓度 |
| 2.3 样品处理 |
| 2.4 蛋白检测 |
| 2.5 配置SDS-PAGE |
| 2.6 上样 |
| 2.7 电泳 |
| 2.8 转膜 |
| 2.9 免疫反应 |
| 2.10 化学发光 |
| 2.11 凝胶图像分析及数据统计 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 WJJZQS对染毒细胞TLR3蛋白表达的影响 |
| 3.2 WJJZQS对染毒细胞TRIF蛋白表达的影响 |
| 3.3 WJJZQS对染毒细胞IRF3蛋白表达的影响 |
| 4. 小结 |
| 结语 |
| 1. 结论 |
| 2. 创新点 |
| 3. 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 缩略语索引 |
| 附录2 临床调查表 |
| 附录3 症状积分评估表 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
| 科研课题 |
| 附件 |
（10）小儿轮状病毒肠炎研究进展（论文提纲范文）
| 1 西医学研究进展 |
| 1.1 病原学 |
| 1.2 发病机制 |
| 1.3 治疗 |
| 1.3.1 液体疗法 |
| 1.3.2 抗病毒 |
| 1.3.3 微生态疗法 |
| 1.3.4 肠黏膜保护剂 |
| 1.3.5补锌疗法 |
| 2 中医学研究进展 |
| 2.1 病因病机 |
| 2.2 证型 |
| 2.3 中医内治法 |
| 2.4 中医外治法 |
| 2.4.1 推拿疗法 |
| 2.4.2 穴位贴敷 |
| 2.4.3 中药灌肠 |
| 2.4.4 经皮给药 |
| 3 述评与展望 |
四、干扰素α-2a治疗轮状病毒性肠炎85例临床分析（论文参考文献）
- [1]心肌酶谱检测在小儿轮状病毒性肠炎中的应用价值分析[D]. 赵红丽. 郑州大学, 2020(02)
- [2]止泻方治疗湿热型小儿轮状病毒性腹泻的临床观察[D]. 张月. 广州中医药大学, 2020(06)
- [3]基于“五味合化”理论研究人参乌梅汤加味及其性味拆方对腹泻模型大鼠结肠差异基因表达的影响[D]. 周鸿云. 成都中医药大学, 2019(04)
- [4]银葛止泻散治疗湿热型小儿秋季腹泻疗效观察[D]. 刘博. 华北理工大学, 2019(01)
- [5]口服重组人干扰素α2b治疗小儿轮状病毒肠炎的多中心随机双盲对照研究[J]. 潘家华,羊礼荣,韩旻,周浩泉,祖庆,周晓丽,顾倩,杨晓光,王子斌,李玉桂. 儿科药学杂志, 2019(01)
- [6]犬干扰素α2的克隆表达与抗病毒活性分析[D]. 姚凌云. 南京农业大学, 2018(07)
- [7]五加减正气散治疗寒湿型轮状病毒性肠炎的临床疗效及其体外抗病毒的实验研究[D]. 王伟. 山东中医药大学, 2017(08)
- [8]重组人干扰素-α1b在儿科的临床应用专家共识[J]. 申昆玲,张国成,尚云晓,李兴旺,徐樨巍,陈强,鲍一笑,符州,赵德育,刘长山,孙新. 中华实用儿科临床杂志, 2015(16)
- [9]α-2b干扰素在小儿轮状病毒性肠炎治疗中的作用[J]. 孙海娜,任玲丽. 中国医刊, 2013(10)
- [10]小儿轮状病毒肠炎研究进展[J]. 汤晶晶,韩新民. 辽宁中医药大学学报, 2013(04)