一、PI-3K在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达（论文文献综述）
王羽[1]（2021）在《SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究》文中研究指明低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）是特发于低氧条件下的疾病,其病理变化主要集中在肺血管上,表现为长期的收缩及显着的结构改变,其肺动脉压力持续保持在较高的水平和右心室的渐进性肥大是其主要临床特征,在平原地区常继发于肺部疾病导致的低氧状态,如慢性阻塞性肺疾病等。HPH同时也是很多高原特发疾病的中心环节,HPH会加重心脏负荷,进一步影响心功能,严重影响高原居民生活质量、生命健康。因此阐明HPH的发生发展进程,有助于我们掌握其发病基础,为制定确实有效的防治手段提供重要的理论支撑。低氧引起的肺组织中血管结构的明显改变是HPH主要的病理特征,也是维持肺动脉压力在较高水平的病理基础,而低氧引发的肺动脉平滑肌细胞（pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）显着增殖是导致肺组织中血管结构发生改变的主要原因。低氧诱导的PASMCs增殖一直是HPH发病机制的研究热点,但因其是一个受多种因素交互影响的复杂过程,目前仍未阐明其发生机制。低氧时,PASMCs内离子通道的改变、氧化应激损伤、mi RNA谱和酸碱平衡的改变以及ROCK和HIF等信号通路的激活都会促进其增殖。且越来越多的证据表明,肿瘤和低氧引起的PASMCs增殖在发生机制方面有很多共通之处,多种在肿瘤细胞增殖中有着关键作用的分子机制,也被证实在低氧引发的PASMCs增殖中发挥着重要的调控作用。研究发现,低氧可使大鼠肺组织中的细胞因子信号转导抑制因子3（suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3）的表达发生变化,而增加其表达可显着缓解低氧引起的大鼠肺血管结构重构。且SOCS3对由炎症因子、低氧引起的血管平滑肌增殖反应有显着的抑制作用,而这种作用与STAT3信号通路有着密不可分的关系,同时在SOCS3的启动子区域有识别SOX6的特征序列,SOCS3的转录表达直接受SOX6调控。SOX6（sex determining region Y-box 6）是Y染色体性别决定区基因家族中的成员,调控胚胎发育、软骨形成等重要的发育进程。最近的研究发现,SOX6可以作为一种抑癌分子来发挥作用,使肿瘤细胞处于G0/G1期的比例增多,进而阻碍其增殖。但有关SOX6在正常细胞增殖和低氧诱导的PASMCs增殖中的作用均未见报道。鉴于低氧对SOCS3表达的影响,及其在血管平滑肌细胞增殖中的作用和相关机制,结合其上游调控分子SOX6在调控肿瘤细胞增殖中的功能,因此推测SOX6可能在低氧引起的PASMCs增殖中有着重要的作用,其机制与SOCS3和STAT3信号通路有着密切的关系。因此,本课题拟通过si RNA、慢病毒转染等技术研究SOX6在低氧引起的HPASMCs增殖中的作用及机制,找到调控低氧诱导HPASMCs增殖的新靶点,充实HPH的发病机制研究,同时也为制定HPH防治措施找到新的方向。方法1.以人肺动脉平滑肌细胞（human pulmonary artery smooth muscule cells,HPASMCs）作为细胞模型,基于处理模式不同将全部细胞划分为3组:常氧组（21%O2）、低氧24 h组（4%O2）、低氧48 h组（4%O2）。2.通过si RNA下调HPASMCs中的SOX6和SOCS3的表达。用慢病毒转染上调细胞中SOX6的表达,然后用4%O2处理48h诱导其增殖。3.q RT-q PCR和Western blot检测各组细胞中SOX6、SOCS3、PCNA、磷酸化信号转导与转录激活因子3（phosphorylated-signal transduction and activators of transcription 3,p-STAT3）的表达变化。其中PCNA的蛋白表达水平与CCK-8检测结果一起用来判断细胞增殖情况。结果1.低氧对SOX6表达和HPASMCs增殖的影响:低氧可使HPASMCs的CCK-8相对水平和PCNA蛋白表达都显着升高（P<0.05）,而SOX6蛋白则显着下调（P<0.01）。2.SOX6在低氧诱导的HPASMCs增殖中的作用:用si RNA干扰SOX6表达,可使HPASMCs中SOX6的m RNA和蛋白都显着下调（P<0.001）,而细胞的CCK-8相对水平和PCNA蛋白水平都显着升高（P<0.05）。慢病毒转染使细胞中的SOX6蛋白显着上调（P<0.05）,后将其放在4%O2条件下处理48h,细胞的CCK-8相对水平和PCNA蛋白水平都显着降低（P<0.05）。3.SOX6调控低氧诱导的HPASMCs增殖的机制:低氧、干扰SOX6表达都可使SOCS3蛋白显着下调（P<0.05）,而过表达SOX6则使细胞中的SOCS3蛋白显着上调（P<0.01）。用si RNA干扰可显着下调SOCS3的m RNA和蛋白水平,但CCK-8相对水平和PCNA水平都明显升高,且存在统计学差异（P<0.05）。低氧、敲低SOX6表达、敲低SOCS3表达都可使HPASMCs中的p-STAT3蛋白显着上调（P<0.01）,而过表达SOX6可使HPASMCs中的p-STAT3蛋白显着下调（P<0.01）。结论1.低氧显着下调SOX6表达,诱导HPASMCs增殖。2.SOX6调控低氧诱导的HPASMCs增殖。3.SOX6通过SOCS3影响STAT3信号通路来调控低氧诱导的HPASMCs增殖。
赵倩文[2]（2021）在《DNA纳米材料携带miR-135a调节肺动脉平滑肌细胞增殖及其机制研究》文中研究表明研究背景:人肺动脉平滑肌细胞（HPASMCs）功能紊乱是引起肺血管重构的重要因素。低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞异常分化、增殖、迁移是导致肺小动脉持续收缩,动脉压力增高的关键病理机制。课题组前期研究已发现在慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺心病患者肺组织和低氧处理的HPASMCs中lnc RNA-RP11表达升高,miR-135a表达降低,Rab26表达升高。故提出:低氧使lnc RNA-RP11启动子发生去甲基化,上调lnc RNA-RP11表达,通过内源性竞争结合作用吸附miR-135a,间接上调miR-135a靶基因Rab26表达,促进HPASMCs的表型转化及异常增殖,导致肺血管重构、肺动脉高压形成。自组装DNA纳米材料具有结构可控性高,生物兼容性好等特点,在生物医学等方面有巨大的应用潜力。然而,其在生理条件下稳定性相对较差,急需新的组装策略和功能化以适应生物医学应用需求。碱性氨基酸分子（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）在生理条件下携带正电荷,具备介导DNA自组装成规整结构的潜力。故提出利用碱性氨基酸代替传统镁离子介导组装DNA纳米结构。同时,构建携带si RNA或miRNA的DNA纳米材料,并在肿瘤细胞中验证其功能;进而将其应用于HPASMCs中,为HPASMCs异常增殖导致的肺血管重构治疗提供新的纳米干预策略。研究方法:1.自组装DNA纳米结构的设计和构建（1）利用SEQUIN软件设计DNA纳米管。通过对DNA组装链中的一条进行延长,使其能够通过碱基互补配对结合目标si RNA和miRNA。利用Cadnano软件设计DNA纳米四边形结构。（2）应用非变性凝胶电泳（PAGE）、琼脂糖凝胶电泳法、激光动态散射法（DLS）对DNA纳米管、四边形结构进行表征。（3）非传统自组装DNA纳米材料构建。利用碱性氨基酸介导组装DNA纳米管、四边形结构,通过PAGE、琼脂糖凝胶电泳法、DLS以及原子力显微镜（AFM）进行表征,研究合成DNA纳米材料所需的浓度、温度和p H值。2.自组装DNA纳米材料生物兼容性评估及其应用于细胞的初步验证（1）通过PAGE检测氨基酸介导自组装DNA纳米材料的稳定性。（2）利用MTT法检测氨基酸介导自组装DNA纳米材料对肿瘤细胞的毒性。（3）通过流式细胞术、激光共聚焦检测肿瘤细胞对氨基酸介导组装DNA纳米材料的摄取效率,观察纳米材料在肿瘤细胞中的位置。（4）通过流式细胞术、激光共聚焦检测肿瘤细胞对功能化DNA纳米管的摄取。（5）通过RT-q PCR、核质分离实验,研究lnc RNA PVT1在肿瘤细胞中的表达分布。（6）通过MTT法检测携带lnc RNA PVT1 si RNA的DNA纳米管对肿瘤细胞增殖的影响。通过蛋白质印迹法（WB）检测肿瘤细胞相关蛋白的表达。3.自组装DNA纳米材料通过miR-135a-Rab26轴调控HPASMCs增殖机制（1）通过RT-q PCR、WB检测HPASMCs中miR-135a、Rab26的表达情况。（2）利用DNA纳米管递送miR-135a,通过CCK-8法检测低氧条件下上调miR-135a对HPASMCs增殖的影响。（3）利用携带si RNA的DNA纳米管敲低Rab26,通过RT-q PCR法测定其敲低效果,通过CCK-8法测定细胞活力。（4）利用RT-q PCR法检测低氧和纳米材料对平滑肌收缩型标志物α-SMA、HPASMCs表型、和HPASMCs表面AT2R受体的影响。研究结果:1.成功设计并构建了DNA纳米管、DNA纳米四边形;其合成产率较高,粒径大小符合理论设计。2.精氨酸、赖氨酸能在一定浓度范围内介导合成DNA纳米管和四边形,其粒径大小、形态符合理论设计。精氨酸、赖氨酸有较宽的p H范围和恒温条件下介导DNA自组装能力;组氨酸难以合成DNA纳米结构。3.（1）精氨酸组装的DNA纳米材料结构稳定性和热稳定性较高。（2）氨基酸介导自组装DNA纳米材料细胞毒性较低。（3）相对Mg2+合成的DNA材料,氨基酸组装的DNA纳米材料摄取效率更高;精氨酸介导组装的DNA纳米管主要富集在细胞膜上,Mg2+组装的DNA纳米管位于细胞内。4.（1）lnc RNA PVT1在A549等肺腺癌细胞中表达显着升高。（2）肺腺癌细胞对DNA纳米管的摄取效率较高。（3）通过核质分离实验发现lnc RNA PVT1在细胞核和细胞质中均有表达。（4）携带lnc RNA PVT1 si RNA的DNA纳米管能很好地抑制肿瘤细胞增殖,其通过上调Bax蛋白抑制肿瘤细胞增殖。5.自组装DNA纳米材料通过miR-135a-Rab26轴调控HPASMCs增殖机制:（1）低氧条件下,HPASMCs中miR-135a表达降低,α-SMA的表达降低,Rab26升高。（2）低氧条件下,通过DNA纳米管递送miR-135a,HPASMCs的增殖受到抑制。（3）构建携带Rab26 si RNA的DNA纳米管,其敲低HPASMCs中Rab26效果良好,敲低后HPASMCs的细胞增殖降低。（4）DNA纳米管敲低Rab26后α-SMA表达升高,平滑肌细胞合成型标志物VIM、MMP2表达减低,AT2R基因表达升高,HPASMCs向收缩型分化,增殖降低。结论:1.成功设计和构建了DNA纳米管和DNA纳米四边形;DNA纳米管可以携带多个si RNA、miRNA的功能单元。精氨酸、赖氨酸能够在一定浓度、p H值、温度下成功合成DNA纳米结构。2.相较于Mg2+,氨基酸组装的DNA纳米材料生物兼容性好,毒性低,更易被肿瘤细胞摄取。携带si RNA的DNA纳米管在肿瘤细胞中能够高效的沉默目标基因,抑制肿瘤细胞增殖。3.通过携带Rab26 si RNA和miR-135a的DNA纳米管敲低Rab26,递送miR-135,验证了如下假说:低氧下调lnc RNA-RP11启动子甲基化水平,上调lnc RNA-RP11表达,通过“海绵吸附”作用下调miR-135a,间接上调Rab26表达,从而促使HPASMCs异常增殖、表型转化。同时,我们的研究表明,携带核酸药物的DNA纳米材料是一种潜在靶向Rab26和miR-135a的调节肺动脉平滑肌细胞增殖新工具。
秦一冰[3]（2021）在《补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究》文中指出目的:通过临床研究观察补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性及安全性,利用网络药理学探索其治疗机制及主要通路,通过动物实验予以验证。材料与方法:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究本研究采用前瞻性、随机、双盲、对照的研究方法,观察2019年6月—2020年08月就诊于辽宁中医药大学附属医院门诊及住院部的慢阻肺合并肺动脉高压（气虚血瘀证）的患者。纳入病例67人,随机分为治疗组和对照组,治疗组予补阳还五汤颗粒剂,对照组予形状、气味、外观与治疗组颗粒剂相同的补阳还五汤模拟颗粒剂,两组均根据患者实际病情联合氧疗、抗感染治疗、利尿剂、抗凝等治疗,疗程4周,第12周随访。设置肺功能和超声心动图作为筛选指标,肺功能、超声心动图、中医证候总积分、单项症状评分、慢阻肺CAT评分、6分钟步行试验、Borg量表、BODE指数评分、血气分析、NT-pro BNP、D-二聚体、纤维蛋白原为有效性观测指标,对补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性进行评价,记录整个研究过程中出现的不良事件观察药物的安全性,对本研究患者的依从性和安全性进行评价。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制通过TCMSP或BATMAN-TCM数据库获得补阳还五汤的活性成分及靶点,Gene Cards数据库获取慢阻肺和肺动脉高压的疾病靶点,提取交叉靶点作为慢阻肺合并肺动脉高压的疾病靶点,将药物靶点与疾病靶点进行映射,构建蛋白相互作用PPI网络,进行基因GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,筛选主要的通路。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究将大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组,适应性喂养一周后将除空白组外的其余四组采用脂多糖、烟熏及低氧的方式造慢阻肺合并肺动脉高压大鼠模型,采用边造模边给药的方式进行实验。中药组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤灌胃;西药组予12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;中西医结合组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤+12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;三组均配置成2ml的药物溶液;正常组和模型组予等体积的生理盐水进行灌胃。造模、灌胃4w后,检测大鼠平均肺动脉压力（m PAP）、右心肥厚指数（RV/LV+S）、HE染色并观察肺血管管壁厚度/血管直径百分比（WT%）和血管壁面积/总血管面积百分比（WA%）,判断造模是否成功。制备组织标本后通过TUNEL法检测观察细胞凋亡情况,免疫组化法观察肺小动脉PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制取出大鼠肺动脉,进行PASMCs的分离及培养,α-SMA抗体免疫荧光法对PASMCs进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞技术检测细胞的凋亡率,western-blot法检测PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达及影响细胞增殖的m TOR、p27kip1和PCNA以及影响细胞凋亡相关的Bcl-2、Bax、Cyt c、Caspase-3、caspase-9。结果:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究1.1两组患者治疗前后肺功能结果比较两组患者治疗前肺功能（FEV1占预计值%、FEV1/FVC）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。1.2两组患者治疗前后超声心动图结果比较两组患者治疗前超声心动图各项结果无明显差异（P>0.05）,具有可比性;治疗后治疗组各项指标明显优于治疗前,且优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;对照组S、RVFAC与治疗前比较未见明显差异（P>0.05）,余各项指标明显优于治疗前,差异有统计学意义（P<0.05）。1.3两组患者治疗后中医证候疗效比较治疗后治疗组临床控制6例（20%）,显效12例（40%）,有效10例（33.33%）,无效2例（6.67%）;对照组临床控制2例（6.67%）,显效10例（33.33%）,有效12例（40%）,无效6例（20%）,治疗组治疗后中医证候疗效优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.4两组患者治疗前后中医证候总积分比较治疗前两组患者中医证候积分比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周时与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.5两组患者治疗前后单项症状积分比较治疗前两组患者在喘息、气短、咯痰、疲乏无力、胸闷或痛,痛有定处及面色暗淡等症状评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.6两组患者治疗前后CAT评估量表比较两组患者治疗前CAT评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.7两组患者治疗前后6分钟步行距离比较两组患者治疗前6分钟步行距离差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.8两组患者治疗前后Borg量表比较两组患者治疗前Borg量表比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.9两组患者治疗前后BODE指数比较两组患者治疗前BODE指数差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.10两组患者治疗前后血气分析比较两组患者治疗前血气分析（Pa O2、Pa CO2）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.11两组患者治疗前后NT-pro BNP比较两组患者治疗前NT-pro BNP差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.12两组患者治疗前后D-二聚体比较两组患者治疗前D-二聚体差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.13两组患者治疗前后FIB比较两组患者治疗前FIB差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.14安全性指标对两组患者治疗前后血尿常规、肝肾功能以及心电图等进行监测,部分患者心电图出现右室大表现,个别指标呈现异常而无临床意义,未见明显异常。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究应用网络药理学技术共获得96个有效化合物,对应的作用靶点共1140个,根据预设条件获得203个疾病靶点。GO富集分析得到具有显着意义的BP1416个、CC26个和MF68个。KEGG通路分析得到104个具有显着意义的通路。quercetin槲皮素、luteolin木犀草素、beta-caroteneβ胡萝卜素、kaempferol山奈酚和baicalein黄芩素等为主要成分,ALB、IL6、VEGFA、Akt1、IL1B等为主要靶点,AGE-RAGE、Relaxin、PI3K-Akt等为主要通路,分析后得出PI3K-Akt通路在本病中发挥着重要的作用。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究3.1.1气管注射LPS、烟熏联合低氧持续4w后模型组大鼠m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%与正常组对比明显异常,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,成功造出COPD-PH的动物模型。3.1.2中药组、西药组和中西医结合组COPD-PH大鼠的一般生活状态明显优于对照组,m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%水平较模型组明显改善,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,中药组与西药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组优于中药组与西药组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。3.1.3肺小动脉TUNEL结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡数量显着减少,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞凋亡数无明显差异,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡数增多,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡数显着增多,差异有统计学意义（P<0.01）。3.1.4免疫组化法检测肺小动脉PI3K/Akt通路相关指标与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤化裁方对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制3.2.1免疫荧光法鉴定PASMCs结果细胞均呈α-SMA阳性绿色荧光,可见明显肌丝,呈与细胞平行的丝状梭形排列,大鼠肺动脉成功提取出PASMCs。3.2.2western-blot法检测各组PASMCs的p-PI3K、p-Akt的蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.3CCK-8细胞增殖检测结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞增殖活性无明显差异,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.4western-blot法检测各组PASMCs的p-m TOR、PCNA、p27kip1蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着上调,p27kip1的表达显着下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）,西药组p-m TOR、PCNA、p27kip1的表达与中药组无显着差异（P>0.05）;与西药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.5流式细胞术检测细胞凋亡率结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率降低,差异有差异有统计学意义（P<0.05）;中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组细胞凋亡率无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.6western-blot法检测各组PASMCs的Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组Bcl-2表达显着上调,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调,模型组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着下调,中药组、西药组及中西医结合组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调;Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达与中药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1.补阳还五汤能够改善气虚血瘀型COPD-PH患者喘促、气短等临床症状,改善低氧状态,改善心肺功能,增加运动耐力,同时改善生活质量,其机制可能与缓解缺氧、高碳酸血症和呼吸性酸中毒等导致的肺血管收缩痉挛,降低血液粘稠度、预防原位血栓形成等密切相关,临床安全性高。2.补阳还五汤中的槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分,可以作用于ALB、IL6、VEGFA等靶点,通过调控AGE-RAGE、PI3K-Akt、TNF等信号通路,参与细胞凋亡、细胞增殖、炎症反应等多种生物过程达到治疗COPD-PH的作用。3.补阳还五汤能够调控PI3K/Akt信号通路起到抑制PASMCs增殖,促进PASMCs凋亡,抑制血管重构的作用,从而降低COPD-PH肺动脉压力的作用。
吕佳奇[4]（2021）在《乳酸及TDAG8在HPH中的作用研究》文中认为目的:通过观察乳酸、细胞因子及TDAG8、HIF-1α在临床患者及大鼠表达量的改变,了解乳酸及TDAG8在HPH中的作用。方法:1、临床部分:选取2019年4月至2019年12月在在内蒙古医科大学第三临床医学院呼吸与危重症医学科确诊的低氧性肺动脉高压患者10例为HPH组,选同期健康体检者10例为NC组。在外周血行PCR法检测TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206 m RNA的表达,行Elisa法测PDGF、VEGF的表达。2、动物部分:SD大鼠随机分正常组（NC组）、低氧组（HPH组）、TDAG8基因干扰组（HPH+TDAG8-组）各6只,HPH组采用常压低氧法21天建立低氧性肺动脉高压大鼠模型,HPH+TDAG8-组分别在HPH造模前1天、第7天、第14天向大鼠尾静脉注射TDAG8 sh RNA慢病毒实现基因干扰,持续21天造模成功后,留取血液及心、肺组织标本。通过器官水平评估模型建立情况及慢病毒干扰效果（1）评估右心肥厚指数及病理切片评估肺动脉血管重塑情况;（2）活体荧光示踪法验证大鼠尾静脉TDAG8 sh RNA慢病毒注入大鼠体内情况。细胞水平通过检测慢病毒介导sh RNA干扰TDAG8大鼠肺泡巨噬细胞的表达效果。使用Real-time PCR法检测模型大鼠外周血中TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206 m RNA的表达。Western Blot法检测模型大鼠外周血中TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206蛋白表达。ELisa法检测大鼠外周血血清中PDGF、VEGF的表达及大鼠肺组织匀浆中乳酸含量。细胞水平通过模型大鼠血清刺激肺血管平滑肌细胞,MTT法进行细胞增殖实验通过测OD值反应PASMCs增殖情况。结果:1、临床部分:（1）低氧性肺动脉高压患者及健康体检者一般资料对比HPH组与NC组年龄无差异性（t=2.01,P>0.05）;HPH组FEV1%较NC组低（t=6.92,P<0.0001）;HPH组FEV1%FVC较NC组低（t=7.32,P<0.0001）;HPH组PASP较NC组低（t=7.1,P<0.0001）。（2）PCR法检测外周血中TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206 m RNA在HPH组表达较NC组显着升高（t分别=6.253、6.687、4.945、5.452、6.098,P<0.001）;Elisa法检测外周血中PDGF、VEGF在HPH组表达较NC组显着升高（t分别=6.5、5.3,P<0.0001）,差异均具有统计学意义。（3）在HPH组中,TDAG8与HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206、PDGF、VEGF呈正相关（r值分别为0.764、0.747、0.763、0.703,P值均<0.05）;HIF-1α与PDK1、NDRG3、CD206呈正相关（r值分别为0.694、0.734、0.762,P值均<0.05）;NDRG3与CD206、PDGF、VEGF呈正相关（r值分别为0.753、0.763、0.741,P值均<0.05）。（4）ROC曲线:TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206、PDGF、VEGF的AUC分别为0.96、0.97、0.95、0.93、0.96、0.98和0.97,以上因子对低氧性肺动脉高压均有预测价值,PDGF的AUC最大,故PDGF具有更好的诊断价值。2、动物部分:（1）低氧性肺动脉高压大鼠模型建立成功:（1）21d后大鼠平均体重:HPH组为212±1.45,较NC组明显增加（t=6.435,P<0.0001）;HPH+TDAG8-组为191.9±5.938,较NC组明显增加（t=8.996,P=0.0001）;HPH+TDAG8-组较HPH组明显减轻（t=6.52,P=0.0001）,均具有差异性;（2）右心室肥厚指数（RVHI）:HPH组为0.440±0.0178,较NC组明显增加（t=7.051,P<0.0001）;HPH+TDAG8-组为0.409±0.0150,较NC组明显增加（t=4.265,P<0.01）;HPH+TDAG8-组较HPH组明显减轻（t=3.184,P<0.05）;（3）活体荧光示踪法验证大鼠尾静脉注射TDAG8特异性sh RNA慢病毒成功。（2）PCR法检测大鼠外周血中TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206m RNA在HPH组较NC组显着升高（t分别=10.1、11.4、9.25、10.68、12.96,P均<0.0001）;在HPH+TDAG8-组较NC组显着升高（t分别=10.1、11.4、9.25、10.68、12.96,P均<0.05）;在HPH+TDAG8-组较HPH组显着下降（t分别=4、2.58、3.13、3.477、5.181,P均<0.05）;且三组间存在显着差异性（F分别为30.7、31.1、23.4、31.29、59.09,P均<0.0001）。ELisa法检测大鼠外周血中PDGF、VEGF在HPH组较NC组显着升高（t=7.49、11.8,P均<0.0001）;在HPH+TDAG8-组较NC组显着升高（t=5.22、5.9,P均<0.01）;在HPH+TDAG8-组较HPH组显着下降（t=3.9、6.53,P均<0.01）,三组间具有差异性（F分别为37.1、74.4,P均<0.0001）。Western Blot法大鼠外周血中TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206蛋白在HPH组较NC组显着升高（t分别=9.04、15.1、7.76、7.22、9.76,P均<0.01）;在HPH+TDAG8-组较NC组显着升高（t分别=8.77、10.9、14.3、9.25、7.6,P均<0.001）;在HPH+TDAG8-组较HPH组显着下降（t分别=2.47、5.98、2.5、4.86、3.48,P均<0.05）,三组间具有差异性（F分别为43.2、114、41.6、39.4、47.5,P均<0.001）。Elisa法检测大鼠肺组织匀浆乳酸含量在HPH组中较NC组显着升高（t=7.86,P<0.0001）,在HPH+TDAG8-组较NC组显着升高（t=6,P<0.001）,在HPH+TDAG8-组较HPH组显着下降（t=4.5,P<0.01）,具有差异性（F=41.5,P<0.0001）。MTT法检测大鼠血清刺激大鼠肺血管平滑肌细胞增殖在HPH组中较NC组显着升高（t=6.13,P<0.01）,在HPH+TDAG8-组较NC组显着升高（t=2.46,P<0.05）,在HPH+TDAG8-组较HPH组显着下降（t=4.23,P<0.01）,三组间具有差异性（F=23.6,P=0.0005）。相关性分析示在HPH组中,TDAG8与HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206呈正相关（r值分别为0.899、0.915、0.899、0.890,P均<0.05）,HIF-1α与PDK1、NDRG3、CD206呈正相关（r值分别为0.916、0.899、0.891,P均<0.05）,NDRG3与CD206、PDGF、VEGF呈正相关（r值分别为0.847、0.852、0.830,P均<0.05）。结论:1、临床研究表明,HPH患者TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206、PDGF、VEGF水平明显升高,且TDAG8与HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206呈正相关,HIF-1α与PDK1、NDRG3、CD206呈正相关,NDRG3与CD206、PDGF、VEGF呈正相关。ROC分析显示PDGF对低氧性肺动脉高压最具有诊断价值。2、在HPH模型大鼠中,TDAG8、HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206基因及蛋白表达水平也显着升高,分子水平PDGF、VEGF表达水平也显着升高,相关性分析显示,TDAG8与HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206呈正相关,HIF-1α与PDK1、NDRG3、CD206呈正相关,NDRG3与CD206、PDGF、VEGF呈正相关,CD206与PDGF、VEGF呈正相关,与HPH患者结果相一致。3、通过慢病毒基因干扰技术,干扰HPH模型大鼠TDAG8的表达,可以部分减少HIF-1α、PDK1、NDRG3、CD206、PDGF、VEGF的表达,相关性分析并未发生显着性改变。4、乳酸及TDAG8在HPH中有调节作用,其机制可能涉及TDAG8/HIF-1α/PDK1/乳酸信号通路的活化,最终导致糖酵解增强,乳酸生成增多,NDRG3乳酸化,独立于HIF-1α稳定表达,促进巨噬细胞向M2型极化,PDGF、VEGF等细胞因子分泌增多,诱导肺血管平滑肌细胞增殖,促进肺血管重塑的进程。
刘奕[5]（2021）在《RELM-β经Ca2+/PI3K/Akt/mTOR通路对低氧性肺动脉高压的作用机制研究》文中指出目的:研究 RELM-β 对低氧性肺动脉高压（Hypoxic pulmonary hypertension,HPH）的影响及经Ca2+/PI3K/Akt/mTOR信号通路上调细胞周期蛋白表达,从而诱导肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMCs）增殖。方法:动物实验:检测SD大鼠血流动力学、肺血管形态及肺组织中RELM-β、Akt、mTOR表达。SD雄性大鼠有野生型及RELM-β基因完全敲除型（RELM-β（-/-））两种,将两种大鼠分为4组,每组5只,分别为野生型低氧组、RELM-β（-/-）低氧组、野生型常氧组及RELM-β（-/-）常氧组。低氧组以间歇低氧法（常压下,箱内氧浓度为10%±0.5%,每天低氧8小时,持续21天）建立HPH模型,常氧组在常压、常氧条件下培育。使用右心导管法测量四组大鼠平均肺动脉压（Mean pulmonary arterial pressure,mPAP）;称重法测量右心室肥大指数（Right ventricular hypertrophy index,RVHI）;计算肺动脉壁厚度与血管外直径的比值（WT%）表示肺动脉重塑程度;蛋白免疫印迹（Western blot,WB）检测肺组织中RELM-β、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平;实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）检测肺组织中 RELM-β 的 mRNA相对表达量。细胞实验:检测 PASMCs 中 RELM-β、Ca2+、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、细胞周期蛋白 cyclin D1/E、CKD2/4 表达水平,RELM-β 经 Ca2+/PI3K/Akt/mTOR 信号通路上调细胞周期蛋白表达,从而诱导PASMCs增殖。分离并原代培养RELM-β（-/-）与野生型大鼠PASMCs,将PASMCs分别予以低氧（将细胞放置于1%02,94%N2,5%C02的三气培养箱中低氧24小时）和常氧（将细胞放置于21%02,74%N2,5%C02的细胞培养箱中培养）处理。细胞实验分组:野生型低氧组、RELM-β（-/-）低氧组、野生型常氧组及RELM-β（-/-）常氧组。选取其中野生型低氧组用于检测信号通路及对PASMCs增殖的调控作用,通过分别添加Ca2+内外螯合剂（BAPTA-AM+EGTA）,PI3K抑制剂（LY294002）、Akt抑制剂（KRK-0401）后检测下游信号分子及PASMCs增殖来验证。使用WB检测PASMCs中RELM-β、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、细胞周期蛋白 cyclin D1/E、CKD2/4 表达水平;qPCR 检测 PASMCs 中 RELM-β 的 mRNA 相对表达量;使用流式细胞技术（Flow cytometry,FCM）检测PASMCs中Ca2+浓度;使用EdU检测PASMCs增殖。结果:动物实验:野生型低氧组大鼠mPAP、RVHI及WT%较野生型常氧组和RELM-β（-/-）低氧组明显升高（P<0.05）;RELM-β（-/-）低氧组较RELM-β（-/-）常氧组相比,大鼠mPAP、RVHI及WT%升高（P<0.05）;野生型常氧组与RELM-β（-/-）常氧组间mPAP、RVHI及WT%无明显差异（P>0.05）。肺组织内RELM-β及下游通路蛋白表达情况结果:WB及qPCR检测RELM-β表达情况,提示RELM-β（-/-）组低氧组及常氧组RELM-β完全不表达,野生型低氧组与RELM-β（-/-）低氧组相比,RELM-β及下游磷酸化蛋白表达升高（P<0.05）;野生型低氧组较常氧组RELM-β及下游通路蛋白明显升高（P<0.05）;RELM-β（-/-）低氧组与常氧组相比,下游磷酸化通路蛋白表达升高（P<0.05）;野生型常氧组较RELM-β（-/-）常氧组RELM-β及下游通路蛋白均有升高（P<0.05）。细胞实验:PASMCs中RELM-β、下游通路蛋白表达及细胞周期蛋白表达情况:用WB及qPCR检测RELM-β表达情况,提示RELM-β（-/-）组低氧组及常氧组RELM-β完全不表达;野生型低氧组与RELM-β（-/-）低氧组相比,RELM-β、下游磷酸化蛋白及细胞周期蛋白表达升高（P<0.05）;野生型低氧组较常氧组RELM-β、下游通路蛋白及细胞周期蛋白明显升高（P<0.05）;RELM-β（-/-）低氧组与常氧组相比,下游磷酸化通路蛋白及细胞周期蛋白表达升高（P<0.05）;野生型常氧组较RELM-β（-/-）常氧组RELM-β、下游通路蛋白及细胞周期蛋白均有升高（P<0.05）。PASMCs增殖情况结果:野生型低氧处理组PASMCs增殖较RELM-β（-/-）低氧组明显增多（P<0.05）;野生型低氧处理组较常氧组增殖能力增强（P<0.05）;RELM-β（-/-）低氧组较RELM-β（-/-）常氧组细胞增殖上调（P<0.05）;野生型常氧组与RELM-β（-/-）常氧组相比无明显差异（P>0.05）。加入抑制剂后结果:加入各抑制剂处理后与对照组相比PASMCs增殖能力减弱（P<0.05）。在加入各抑制剂处理后下游通路蛋白及细胞周期蛋白表达较各对照组均降低（P<0.05）。结论:1.在低氧条件下RELM-β通过Ca2+/PI3K/Akt/mTOR信号通路上调细胞周期蛋白cyclin D1/E、CKD2/4表达,从而增加PASMCs增殖能力,对HPH的形成发挥作用
李善政[6]（2021）在《红景天苷对高原肉鸡生产性能及肺动脉组织中CaSR表达的影响》文中提出红景天被广泛用于高原反应的防治中,其主要有效成分红景天苷的抗缺氧作用和临床应用已有大量研究,但在肉鸡腹水症的预防机制研究上还未见报道。高原地区肉鸡腹水症高发,死淘率极高,这是由于机体长期处于高原缺氧条件下,一方面,血液红细胞压积升高,增加了肺血管阻力,引起肺动脉压升高,造成右心肥大;另一方面,肺动脉平滑肌中钙敏感受体（CaSR）表达上调,促进细胞中[Ca2+]cyt升高导致肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）的增殖增加,引起肺血管重构,最终形成肺动脉高压（PAH）综合征,即腹水症（AS）。为了揭示红景天苷靶向CaSR调控高原肉鸡肺动脉高压的分子机制以及对肉鸡腹水的预防作用,本试验在西藏林芝市西藏农牧学院（海拔2 990 m）进行,按常规条件饲养肉鸡180羽,随机分为低氧组（自然高原低氧环境,鸡舍氧气百分比14.0%～16.0%）、常氧组（鸡舍氧气百分比20.8%～21.5%）和红景天苷组（自然高原低氧环境下日粮中添加0.2%红景天苷粉）,每组设置四个重复。对试验期42天期间各组肉鸡的平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）和饲料转化率（FCR）进行测定,同时记录试验期间的死亡率并分析病因;检测各组肉鸡的右心室（RV）肥厚指数,测定血清免疫球蛋白Ig A,Ig G和Ig M水平以及血清抗氧化指标;采用蛋白免疫印迹试验和RT-q PCR检测CaSR蛋白水平和m RNA水平的变化,并应用免疫组化的方法研究肺动脉平滑肌组织中CaSR蛋白的分布变化。结果显示:饲养至42日龄时,红景天苷组和常氧组肉鸡ADG、ADFI、SOD、GSH-Px、Ig A和Ig G指标均显着高于低氧组（P<0.05）,MDA指标显着低于低氧组（P<0.05）;常氧组CAT指标显着高于低氧组（P<0.05）;三组之间的FCR和Ig M差异不显着（P>0.05）;红景天苷组和常氧组右心指数、总死亡率和腹水死亡率显着低于低氧组（P<0.05）;红景天苷组和常氧组CaSR基因m RNA和蛋白表达量显着低于低氧组（P<0.05）,前两组之间差异不显着（P>0.05）;三组肉鸡肺动脉平滑肌细胞的胞质中均有CaSR蛋白不同程度的阳性表达,红景天苷组和常氧组的阳性表达率低于低氧组。结论:高原肉鸡肺动脉组织中CaSR的表达在红景天苷的作用下表达下调,推测其可减少PASMCs中[Ca2+]cyt,抑制细胞增殖,改善肺血管重构,同时红景天苷可维持右心指数和肺动脉压保持正常,达到预防高原肉鸡PAH发生的目的,并可通过提高肉鸡血清抗氧化性和Ig G、Ig A的水平,增强机体抵抗力和适应力,减少发病率,为肉鸡腹水综合症的预防提供新思路。
侯建同[7]（2020）在《整合素连接激酶在低氧诱导肺血管重塑中的作用机制研究》文中研究说明第一部分整合素连接激酶在低氧性肺动脉高压大鼠中的表达和分布特征目的:低氧性肺动脉高压（Hypoxic pulmonary hypertension,HPH）是慢性缺氧性肺部疾病的严重并发症之一,也是全世界常见的致残、致死原因。低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞（Pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）表型转换及增殖是HPH发生发展的重要病理过程。整合素连接激酶（Integrin-linked kinase,ILK）是一种早期低氧反应因子,且是维持血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）收缩表型的关键基因。本部分旨在探究ILK在HPH大鼠中的表达及分布特征。方法:将Sprague-Dawley（SD）大鼠置于低氧舱中建立HPH模型,分别低氧干预0周、2周、3周、4周。采用右心导管法检测各组大鼠平均肺动脉压力（Mean pulmonary artery pressure,m PAP）。提取各组大鼠左心室（Left ventricle,LV）、室间隔（Septum,S）、右心室（Right ventricle,RV）测定右心指数[RV/（LV+S）]。采用HE染色方法观察肺血管重塑并计算血管壁厚度与血管外径的比值（Wall thickness percentage,WT%）及血管壁面积与血管总面积的比值（Wall area percentage,WA%）。采用ELISA方法检测各组大鼠血清ILK水平。提取各组大鼠肺动脉采用Western blot、RT-PCR方法检测ILK、Myocardin表达水平。采用免疫组织化学方法观察ILK在大鼠中的分布。结果:（1）与正常对照组相比,低氧组大鼠m PAP水平明显升高,且呈低氧时间依赖性升高（P<0.05）。与正常对照组相比,低氧2周组大鼠RV/（LV+S）水平有升高趋势,但无统计学差异（P>0.05）。低氧3周时,大鼠RV/（LV+S）水平明显升高,且亦呈低氧时间依赖性增加（P<0.05）。（2）与正常对照组相比,低氧组大鼠肺动脉WT%与WA%水平明显增加,且呈低氧时间依赖性增加（P<0.05）。（3）与正常对照组相比,低氧组大鼠血清ILK水平明显降低。在低氧4周时,ILK水平进一步降低（P<0.05）。（4）与正常对照组相比,低氧组大鼠肺动脉ILK及Myocardin表达水平明显降低,且随着低氧时间的延长二者表达水平进一步降低（P<0.05）。（5）ILK在大鼠肺内广泛表达,主要定位于细胞浆内。结论:慢性低氧可促使大鼠肺血管重塑。ILK在大鼠血清及肺动脉中的表达呈低氧时间依赖性降低。ILK广泛表达于大鼠肺内,主要定位于细胞的胞浆中。第二部分整合素连接激酶参与低氧诱导PASMCs表型转换的机制目的:在低氧条件下,PASMCs从收缩/分化型向合成型/去分化型转变是HPH发生和发展的重要过程。Myocardin作为血清效应因子（Serum response factor,SRF）的关键辅助因子,在低氧条件下调节PASMCs分化的转录环节中起到关键作用。ILK作为早期低氧反应因子及维持VSMCs收缩表型的关键基因在低氧诱导PASMCs表型转换中的机制不明,我们推测ILK可能通过作用于Myocardin参与低氧诱导PASMCs表型转换的调节。方法:提取大鼠原代PASMCs进行培养及鉴定。将PASMCs进行低氧干预检测ILK、Myocardin、ETS样蛋白1（ETS-like1,Elk-1）、p-Elk-1、SRF、平滑肌α-肌动蛋白（Smooth muscleα-actin,SMα-actin）、调宁蛋白（Calponin）、骨桥蛋白（Osteopontin）表达变化。建立以髓磷脂碱性蛋白（Myelin basic protein,MBP）为底物的反应体系检测ILK激酶活性的变化。采用免疫共沉淀（Coimmunoprecipitation,Co-IP）及染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,Ch IP）方法检测Myocardin、Elk-1与SRF、SMα-actin基因启动子结合差异。采用免疫荧光方法观察ILK在PASMCs中的分布。采用小干扰RNA（Small interfering RNA,Si RNA）技术敲减ILK、Myocardin表达,观察对PASMCs中Myocardin及收缩合成表型蛋白的影响。采用鬼笔环肽染色方法观察ILK表达降低对PASMCs形态的影响。建立腺病毒（Adenovirus,Ad）载体过表达ILK,观察对PASMCs中Myocardin、收缩合成表型蛋白表达及Myocardin与SMα-actin基因启动子结合的影响。结果:（1）与对照组相比,低氧1h及6h对PASMCs的ILK及Myocardin表达没有影响（P>0.05）。低氧24h,ILK及Myocardin的表达显着降低,低氧48h,72h后,二者表达进一步降低,且呈低氧时间依赖性降低（P<0.05）。（2）与对照组相比,低氧1h可明显促进Elk-1磷酸化,并且可降低ILK激酶活性（P<0.05）。（3）与对照组相比,低氧或QLT0267干预PASMCs 1h可引起Myocardin与SRF及SMα-actin基因启动子结合降低,Elk-1与SRF及SMα-actin基因启动子结合增加（P<0.05）。（4）与对照组相比,低氧24h对p-Elk-1、Elk-1、SRF的蛋白表达无明显影响（P>0.05）,但可引起Elk-1及SRF m RNA表达升高（P<0.05）。同时,我们发现低氧24h可引起PASMCs的SMα-actin及Calponin蛋白及m RNA表达降低,而Osteopontin蛋白及m RNA表达升高（P<0.05）。（5）ILK在PASMCs中广泛表达,主要定位于PASMCs的胞浆中。（6）Myocardin表达降低可引起PASMCs中的SMα-actin及Calponin表达降低,Osteopontin表达增加（P<0.05）。（7）ILK表达降低可引起PASMCs中的SMα-actin及Calponin表达降低,Osteopontin表达增加。同时,ILK表达降低可靶向降低Myocardin水平（P<0.05）。同时,ILK表达降低可使PASMCs从典型的梭形结构转变为扁平状,且PASMCs的长度明显变短,但表面积明显增加（P<0.05）。（8）ILK过表达可明显逆转低氧引起的Myocardin表达降低,且可明显逆转低氧引起的SMα-actin及Calponin表达降低,Osteopontin表达增加（P<0.05）。同时,ILK过表达可明显逆转低氧引起的Myocardin与SMα-actin基因启动子结合降低。结论:低氧早期引起ILK激酶活性降低,进而使Myocardin与SRF及SMα-actin基因启动子结合降低。ILK表达降低可靶向降低Myocardin水平,促使PASMCs发生表型转换。ILK过表达可明显逆转低氧引起的Myocardin表达及与SMα-actin基因启动子结合的降低。第三部分整合素连接激酶参与低氧诱导PASMCs增殖的机制目的:低氧引起PASMCs基础细胞内Ca2+浓度(Intracellular calcium concentration,[Ca2+]i)增加是促进PASMCs增殖的重要分子信号。在低氧条件下,低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）可通过Rho A/Rho相关激酶（Rho-associated kinase,ROCK）信号通路促进瞬时受体电位通道（Transient receptor potential canonical,TRPC）蛋白的表达,引起基础[Ca2+]i升高。HIF-1α可通过调节ILK表达参与内皮-间充质转分化（Endothelial-tomesenchymal transition,End MT）的发生。此外,ILK可通过调节Rho A/ROCK信号通路参与对细胞信号的调节。我们推测ILK可能是HIF-1α的下游因子,通过Rho A/ROCK信号通路调节TRPC蛋白的表达,进而影响基础[Ca2+]i参与低氧诱导PASMCs增殖。方法:采用细胞计数、MTT、流式细胞术的方法检测ILK过表达对PASMCs增殖的影响。使用氯化钴（Co Cl2）干预PASMCs,观察对ILK、Myocardin表达及ILK激酶活性的影响。采用Si RNA技术敲减HIF-1α表达,观察对ILK、Myocardin表达的影响。采用Ad过表达ILK,观察对TRPC1、TRPC6、基础[Ca2+]i及Rho A/ROCK信号通路的影响。结果:（1）低氧干预PASMCs 48h可明显增加PASMCs的数量、吸光度、处于S+G2/M期的百分比,而降低处于G0/G1期的百分比,ILK过表达可明显逆转这一现象（P<0.05）。（2）Co Cl2（100μM）干预PASMCs 24h后可明显降低ILK、Myocardin表达。且随着干预时间的延长,ILK、Myocardin表达进一步降低（P<0.05）。同时,Co Cl2干预PASMCs 1h可明显降低ILK激酶活性（P<0.05）。（3）PASMCs被低氧干预48h后,ILK、Myocardin水平明显降低,但敲减HIF-1α表达后可逆转低氧引起的ILK、Myocardin表达降低（P<0.05）。（4）低氧干预PASMCs 48h后,TRPC1、TRPC6及基础[Ca2+]i明显增加,ILK过表达可明显逆转低氧引起的TRPC1、TRPC6及基础[Ca2+]i增加（P<0.05）。（5）低氧干预PASMCs 24h,48h可显着增加Rho A、ROCK1、ROCK2的表达,ILK过表达可明显逆转低氧引起的Rho A、ROCK1、ROCK2的表达增加（P<0.05）。结论:慢性低氧通过升高HIF-1α水平,进而降低ILK、Myocardin表达。ILK可能通过Rho A/ROCK信号通路调节TRPC1、TRPC6表达进而调控基础[Ca2+]i参与低氧诱导PASMCs增殖。
张舒婷[8]（2020）在《慢性低氧性肺动脉高压大鼠凝血纤溶因子的变化及其意义》文中指出目的:通过建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型,探讨血管性血友病因子（vWF）、蛋白C（PC）、组织型纤溶酶原激活物（t‐PA）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI‐1）在慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）中的变化及在CHPH疾病发生发展中的意义。方法:1.将30只实验SD大鼠随机分为常氧对照组、低氧3天组、低氧7天组、低氧14天组和低氧21天组,采用慢性常压低氧[氧浓度（10.0±0.1）%]建立肺动脉高压大鼠模型。2.利用右心导管法测定各组大鼠右心室收缩压（RVSP）,通过计算右心室（RV）和[左心室（LV）+室间隔（S）]的重量比值,即RV/（LV+S）,得出右心室肥厚指数（RVHI）。3.收集各组大鼠相同部位肺组织进行HE染色、VG染色、Masson染色,光镜下观察肺动脉病理学改变。4.剖腹经腹主动脉采血,收集各组大鼠血液,用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定大鼠血浆血管性血友病因子（vWF）、蛋白C（PC）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、纤溶酶原激活物抑制物1（PAI‐1）水平。结果:1.与常氧对照组相比,低氧各组大鼠RVSP、RVHI均显着升高（p<0.01）,低氧暴露3d、7d、14d和21d组肺动脉病理学改变明显。2.与常氧对照组相比,低氧各组大鼠血浆vWF、t‐PA（除低氧7天组）、PAI‐1水平均显着升高（p<0.01）,其中血浆vWF、PAI‐1水平在低氧7天组达高峰;低氧3天、14天、21天组血浆PC水平均显着降低（p<0.01）,低氧7天组血浆PC水平显着升高（p<0.01）。3.慢性低氧性肺动脉高压大鼠血浆vWF、PAI‐1水平与RVSP和RVHI均呈正相关（p<0.01）。4.低氧各组与常氧对照组相比大鼠血浆t‐PA/PAI‐1的比值水平均显着降低（p<0.01）。结论:1.成功地建立了慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）大鼠模型。2.慢性低氧诱导的低氧性肺动脉高压（HPH）大鼠的血浆vWF、PC、t‐PA、PAI‐1明显变化,其中血浆vWF和PAI‐1的水平可作为间接评价慢性低氧性肺动脉高压（CHPH）病情严重程度的指标。
柳志伟[9]（2020）在《低氧和牵拉对前列腺基质细胞增殖的影响及机制研究》文中提出研究目的:本研究通过低氧环境培养前列腺基质细胞株WPMY-1,并利用机械牵拉装置对WPMY-1细胞施加一定力学刺激。观察低氧对前列腺基质细胞增殖的影响并从HIF-1α信号及其相关基因和蛋白表达方面探讨前列腺增生疾病发生机制;初步探索机械牵拉对前列腺基质细胞增殖和氧化应激的影响。通过以上研究,为良性前列腺增生的防治提供一定理论依据。研究方法:1.对WPMY-1细胞进行常规培养和传代,取35代细胞分为常氧组和低氧组,设置培养箱氧气浓度分别为21%O2和3%O2。培养至12h,24h和48h进行检测,利用CCK-8检测细胞增殖,Western Blot检测HIF-1α,Bcl-2,Bax和PCNA蛋白的表达;2.采用倒序法依次使低氧干预时间为48h,24h,12h并统一收取细胞,Annexin V/PI检测细胞凋亡,DCFH-DA探针法检测细胞内的氧化应激水平,RT-qPCR和Western Blot分别用于检测HIF-1α,AKT,ERK mRNA和蛋白的表达;3.将细胞分为四个组:对照组,低氧组,牵拉组和低氧结合牵拉组。在常氧和低氧环境培养的基础上,利用Flexcell 5000系统对细胞施加10%形变,0.5Hz,持续4h的机械牵拉。干预结束后按照同样的方法检测细胞的增殖,凋亡和氧化应激水平。研究结果:1.低氧和常氧环境下,随着培养时间的延长WPMY-1细胞增殖均显着上升,（P<0.01）。培养至48h,低氧环境下细胞的增殖显着高于常氧环境（P<0.01）;低氧干预不同时间对细胞的凋亡无显着性影响（P>0.05）;低氧干预24h细胞内氧化应激水平显着升高（与常氧组和低氧12h相比,P<0.01）,低氧干预48h细胞内氧化应激水平显着下降（与低氧24h相比,P<0.01）。2.HIF-1α蛋白的表达随低氧培养时间延长而增加（低氧培养24h和48h分别与12h相比P<0.05,P<0.01）;PCNA蛋白的表达不随低氧培养时间而变化（P>0.05）;Bcl-2蛋白的表达在低氧培养24h显着增加（与低氧培养12h相比P<0.05）;Bax蛋白的表达在低氧培养24h和48h后显着增加（与低氧12h相比均为P<0.05）。3.HIF-1αmRNA在低氧干预48h显着增加（与常氧组相比,P<0.05）;AKT mRNA在低氧干预48h显着降低（与常氧组相比,P<0.05）;ERK mRNA在低氧干预组和常氧组比较无显着性差异（P>0.05）;AKT蛋白在低氧干预24h显着降低（较常氧组和低氧12h,分别为P<0.01,P<0.05）,低氧干预48h显着增加（较低氧24小时,P<0.05）;ERK蛋白在低氧干预后显着降低（12h,24h,48h与常氧组相比,分别为P<0.05,P<0.01,P<0.01）。4.低氧和牵拉干预后,低氧组细胞增殖仍高于常氧组（P<0.01）,牵拉组细胞增殖显着下降（与常氧组和低氧组相比,分别为P<0.01,P<0.01）,低氧结合牵拉组细胞增殖显着上升（与常氧组和单纯牵拉组相比,分别为P<0.01,P<0.01）;各组细胞凋亡率差异不具有统计学意义（P>0.05）;低氧组氧化应激较常氧组显着降低（P<0.05）,低氧结合牵拉干预后细胞内氧化应激水平显着下降（与常氧组,低氧组,牵拉组分别比较,均为P<0.01）。研究结论:1.低氧可能通过HIF-1α信号激活及其下游Bcl-2和Bax蛋白的表达对细胞增殖和凋亡起到调节作用。2.低氧能够引起前列腺基质细胞内氧化应激的升高,可能影响AKT和ERK蛋白的表达。3.机械牵拉能够降低前列腺基质细胞内的氧化应激水平,可能发挥抑制细胞增殖的作用。
谢玥[10]（2020）在《RELM-β调节PLC-IP3/Ca2+信号通路对野百合碱致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制研究》文中研究说明目的:研究抵抗素样分子β（RELM-β）与野百合碱致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的关系,探讨PLC-IP3/Ca2+信号通路在此过程中的作用机制。方法:1.观察野百合碱是否促进或抑制大鼠PASMCs增殖。进一步调控RELM-β的表达水平,观察野百合碱是否通过PLC-IP3/Ca2+信号通路影响大鼠PASMCs的增殖:实验分组:1、盐水对照组（空白对照组）2、野百合碱组3、空载慢病毒生理盐水组（空载对照组）4、空载慢病毒野百合碱组（空载MCT组）5、沉默慢病毒RELM-β生理盐水组（沉默对照组）6、沉默慢病毒RELM-β野百合碱组（沉默MCT组）7、过表达慢病毒RELM-β生理盐水组（过表达对照组）8、过表达慢病毒RELM-β野百合碱组（过表达MCT组）。将SD大鼠原代PASMCs体外培养传至3-5代,加入野百合碱（1umol/L,48h）,通过慢病毒转染至大鼠PASMCs,调控细胞的RELM-β表达水平。EDU检测观察大鼠PASMCs的增殖,QT-PCR和Western blot分别检测PASMCs 中 RELM-β、PLC、IP3R mRNA 和蛋白表达。（2）探索RELM-β通过调控PLC-IP3/Ca2+信号通路影响PASMCs增殖:用同样的方法取SD大鼠原代PASMCs体外培养传至3-5代,同步化处理后分别加入重组RELM-β蛋白及信号通路抑制剂,将实验分为空白对照组、重组RELM-β蛋白对照组、PLC抑制剂（U73122）加重组RELM-β蛋白组、IP3R抑制剂（Xestosβongin C）加重组RELM-β蛋白组共4组。EDU细胞增殖检测观察PASMCs的增殖情况,流式细胞术检测细胞内钙离子浓度,QT-PCR和Western blot分别检测PASMCs中RELM-β、PLC、IP3R mRNA和蛋白表达情况。结果:1.第一部分实验:野百合碱、RELM-β通过PLC-IP3/Ca2+信号通路影响（促进/抑制）大鼠PASMCs增殖:EDU结果显示:MCT组与空白对照组比较细胞增殖率增加（P<0.05）。沉默MCT组与空载MCT组比较:细胞增殖率减少（P<0.05）;过表达MCT组与空载MCT组比较:细胞增殖率增加（P<0.05）。QT-PCR、Western blot 检测 PASMCs 中 RELM-β、PLC、IP3R mRNA及蛋白的表达水平结果显示:与空白对照组比较,MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均升高（P<0.05）;与空载MCT组比较,沉默MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平降低（P<0.05）;与空载MCT组比较,过表达MCT组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均明显升高（P<0.05）;与空载对照组比较,沉默对照组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均降低（P<0.05）;与空载对照组比较,过表达对照组RELM-β、PLC、IP3R表达水平均明显增加（P<0.05）。2.第二部分实验:RELM-β和PLC-IP3/Ca2+信号通路对PASMCs增殖的影响:Edu检测PASMCs细胞增殖率结果显示:重组RELM-β蛋白对照组与空白对照组比较,细胞增殖率增加（P<0.05）,细胞内钙离子平均荧光强度增加（P<0.05）;PLC抑制剂加重组RELM-β蛋白组与重组RELM-β蛋白对照组比较,细胞增殖率减少（P<0.05）,细胞内钙离子平均荧光强度减少（P<0.05）;IP3R抑制剂加重组RELM-β蛋白组与重组RELM-β蛋白对照组比较,细胞增殖率减少（P<0.05）,细胞内钙离子平均荧光强度减少（P<0.05）。QT-PCR、Western blot检测PLC、IP3R mRNA及蛋白表达水平,流式细胞术测细胞内钙离子结果显示:与空白对照组比较,RELM-β重组蛋白对照组PLC、IP3R mRNA及蛋白表达水平增加（P<0.05）;分别与重组RELM-β蛋白对照组比较,PLC抑制剂加重组RELM-β蛋白组、IP3R抑制剂加重组RELM-β蛋白组两组的PLC、IP3R mRNA及蛋白水平均明显降低（P<0.05）。结论:1、野百合碱促进大鼠PASMCs增殖,RELM-β可以调节野百合碱致大鼠PASMCs增殖;2、RELM-β通过PLC-IP3/Ca2+信号通路促进野百合碱致大鼠PASMCs的增殖情况。
二、PI-3K在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、PI-3K在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达（论文提纲范文）
（1）SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 低氧对人肺动脉平滑肌细胞增殖和SOX6 表达的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 SOX6 在低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 SOX6 调控低氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖的机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 低氧诱导的肺动脉平滑肌增殖发生机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 致谢 |
（2）DNA纳米材料携带miR-135a调节肺动脉平滑肌细胞增殖及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 自组装DNA纳米材料构建 |
| 2.1 传统自组装DNA纳米材料构建 |
| 2.2 非传统自组装DNA纳米材料构建 |
| 第三章 自组装DNA纳米材料生物兼容性评估及其初步应用 |
| 3.1 自组装DNA纳米材料生物兼容性评估 |
| 3.2 自组装DNA纳米材料携带siRNA应用于细胞的初步验证 |
| 第四章 自组装DNA纳米材料通过miR-135a-Rab26轴调控肺动脉平滑肌细胞增殖机制 |
| 4.1 实验材料和方法 |
| 4.2 结果与讨论 |
| 4.3 小结 |
| 4.4 本论文的不足之处与下一步研究计划 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 肺动脉平滑肌细胞功能紊乱与肺血管重构 |
| 参考文献 |
| 在读期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（3）补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究 |
| 资料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响 |
| 实验一 补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 中医药治疗慢阻肺合并肺动脉高压研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）乳酸及TDAG8在HPH中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 2.临床研究 |
| 3.动物实验 |
| 4.统计学分析 |
| 5.实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 乳酸及TDAG8在HPH中的作用 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（5）RELM-β经Ca2+/PI3K/Akt/mTOR通路对低氧性肺动脉高压的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 RELM-β相关调控因子 |
| 参考文献 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 |
| 致谢 |
（6）红景天苷对高原肉鸡生产性能及肺动脉组织中CaSR表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词用表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 肺动脉高压综合征与肺血管重构 |
| 1.1.1 肺动脉高压综合征研究概况 |
| 1.1.2 肺血管重构 |
| 1.2 低氧与肺动脉高压综合征 |
| 1.3 钙敏感受体及其在血管重构中的作用研究 |
| 1.4 红景天苷在动物高原低氧适应性方面的研究 |
| 1.4.1 红景天苷的药理作用 |
| 1.4.2 红景天苷抗缺氧的研究进展 |
| 1.4.3 红景天苷在西藏应用的可行性 |
| 1.5 问题与展望 |
| 1.6 技术路线 |
| 第二章 红景天苷对低氧环境下肉鸡生长性能、右心指数和死亡率的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 试验材料 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.2.3 数据的统计分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 各处理组肉鸡生长性能 |
| 2.3.2 各处理组肉鸡的右心指数和死亡率 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 红景天苷对低氧环境下肉鸡血清抗氧化指标和免疫球蛋白水平的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.2.3 数据的统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 各处理组肉鸡血清抗氧化指标 |
| 3.3.2 各处理组肉鸡的血清免疫球蛋白水平 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 红景天苷对低氧性PAH肉鸡肺动脉组织CaSR基因表达的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验材料 |
| 4.2.2 试验方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 不同组肉鸡肺动脉组织总RNA提取和质量检测结果 |
| 4.3.2 RT-q PCR法检测不同组肉鸡肺动脉组织中CaSR m RNA水平的表达 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 红景天苷对低氧性PAH肉鸡肺动脉组织CaSR蛋白定位和表达的影响 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验材料 |
| 5.2.2 试验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 CaSR蛋白在不同组肉鸡肺动脉组织的分布 |
| 5.3.2 CaSR蛋白在不同组肉鸡肺动脉组织的差异表达 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 结论 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 本研究创新点 |
| 6.3 需进一步解决的问题 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（7）整合素连接激酶在低氧诱导肺血管重塑中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语注释表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 文献综述 低氧性肺动脉高压发病分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 第一部分 整合素连接激酶在低氧性肺动脉高压大鼠中的表达和分布特征 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 整合素连接激酶参与低氧诱导PASMCs表型转换的机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 整合素连接激酶参与低氧诱导PASMCs增殖的机制 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文小结与展望 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）慢性低氧性肺动脉高压大鼠凝血纤溶因子的变化及其意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 慢性低氧诱导肺动脉高压 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠右心室收缩压(RVSP)的变化 |
| 2.2 各组大鼠右心室肥厚指数(RVHI)的变化 |
| 2.3 各组大鼠肺组织HE染色结果观察 |
| 2.4 各组大鼠肺组织VG染色结果观察 |
| 2.5 各组大鼠肺组织Masson染色结果观察 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 vWF、PC、t-PA、PAI-1在HPH中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠血浆vWF、PC、t-PA、PAI-1 浓度的变化 |
| 2.2 各组大鼠v WF、PC、t-PA、PAI-1 与RVSP的相关性 |
| 2.3 各组大鼠v WF、PC、t-PA、PAI-1 与RVHI的相关性 |
| 2.4 各组大鼠血浆t-PA/PAI-1 变化 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（9）低氧和牵拉对前列腺基质细胞增殖的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 1 前言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 缺氧和氧化应激 |
| 2.2 缺氧与前列腺增生 |
| 2.2.1 流行病学调查 |
| 2.2.2 动物实验研究 |
| 2.2.3 分子生物学研究 |
| 2.3 氧化应激与前列腺增生 |
| 2.4 体力活动与良性前列腺增生 |
| 2.5 机械牵拉的理论依据 |
| 2.6 小结与展望 |
| 3 研究对象和方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 样本来源 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 试剂配方 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 前列腺基质细胞株WPMY-1的常规培养 |
| 3.2.2 低氧影响WPMY-1细胞活性的实验方法 |
| 3.2.3 牵拉影响WPMY-1细胞活性的实验方法 |
| 3.2.4 技术路线 |
| 3.3 统计方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 常氧条件下WPMY-1细胞的生长状况 |
| 4.2 低氧对WPMY-1细胞活性的影响 |
| 4.2.1 低氧对WPMY-1细胞增殖的影响 |
| 4.2.2 低氧对WPMY-1细胞凋亡率的影响 |
| 4.2.3 低氧对WPMY-1细胞氧化应激的影响 |
| 4.2.4 低氧环境对HIF-1α,PCNA,Bcl-2,Bax基因表达的影响 |
| 4.2.5 低氧干预不同时间HIF-1α,AKT,ERK mRNA的相对表达情况 |
| 4.2.6 低氧干预不同时间HIF-1α,AKT,ERK蛋白的表达 |
| 4.3 牵拉刺激对WPMY-1细胞活性的影响 |
| 4.3.1 牵拉对WPMY-1细胞增殖的影响 |
| 4.3.2 牵拉对WPMY-1细胞凋亡率的影响 |
| 4.3.3 牵拉对WPMY-1细胞氧化应激的影响 |
| 5 分析讨论 |
| 5.1 低氧对前列腺基质细胞增殖的影响及可能机制 |
| 5.2 HIF-1α在低氧调控前列腺基质细胞增殖中的作用及与ERK,AKT信号之间的关系 |
| 5.3 机械牵拉对前列腺基质细胞活性的影响及可能机制 |
| 5.4 临床应用价值 |
| 6 研究结论 |
| 7 不足与展望 |
| 8 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（10）RELM-β调节PLC-IP3/Ca2+信号通路对野百合碱致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 第三章 结果 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 |
| 致谢 |
四、PI-3K在低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的表达（论文参考文献）
- [1]SOX6在低氧诱导的人肺动脉平滑肌增殖中的作用及机制的初步研究[D]. 王羽. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [2]DNA纳米材料携带miR-135a调节肺动脉平滑肌细胞增殖及其机制研究[D]. 赵倩文. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [3]补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究[D]. 秦一冰. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [4]乳酸及TDAG8在HPH中的作用研究[D]. 吕佳奇. 内蒙古医科大学, 2021(02)
- [5]RELM-β经Ca2+/PI3K/Akt/mTOR通路对低氧性肺动脉高压的作用机制研究[D]. 刘奕. 南华大学, 2021
- [6]红景天苷对高原肉鸡生产性能及肺动脉组织中CaSR表达的影响[D]. 李善政. 西藏农牧学院, 2021(08)
- [7]整合素连接激酶在低氧诱导肺血管重塑中的作用机制研究[D]. 侯建同. 东南大学, 2020(01)
- [8]慢性低氧性肺动脉高压大鼠凝血纤溶因子的变化及其意义[D]. 张舒婷. 山西医科大学, 2020(10)
- [9]低氧和牵拉对前列腺基质细胞增殖的影响及机制研究[D]. 柳志伟. 上海体育学院, 2020(01)
- [10]RELM-β调节PLC-IP3/Ca2+信号通路对野百合碱致大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及机制研究[D]. 谢玥. 南华大学, 2020(01)